本文關鍵詞：MPPa-PDT誘導的人骨肉瘤MG-63細胞凋亡和自噬

  更多相關文章： 骨肉瘤 光動力療法 MPPa 自噬 凋亡

【摘要】：目的:Pyropheophorbide-αmethyl ester(MPPa)屬于第二代光敏劑,具有很好的應用前景。本研究以體外培養(yǎng)的人骨肉瘤MG-63細胞為研究對象,采用MPPa介導的光動力療法(MPPa-PDT)處理人骨肉瘤MG-63細胞,檢測MPPa-PDT能否誘導MG-63細胞發(fā)生凋亡和自噬反應并在信號通路轉導和蛋白表達水平探索其可能的分子機制,最后進一步探索MPPa-PDT作用下MG-63細胞自噬與凋亡的關系。為MPPa-PDT用于骨肉瘤的臨床治療以及調節(jié)自噬和凋亡水平以增強MPPa-PDT的抗腫瘤效應奠定實驗理論基礎。方法:MPPa-PDT作用于體外培養(yǎng)的人骨肉瘤MG63細胞,采用CCK-8檢測細胞活性的變化,以明確MPPa-PDT對MG-63細胞的毒性效應,并選擇后續(xù)實驗所采用的MPPa藥物劑量和LED光照能量密度。然后應用Hoechst熒光染色觀察細胞凋亡,Annexin V-PI染色后應用流式細胞術檢測MG-63細胞凋亡水平的變化,應用Western blot檢測MG-63細胞內凋亡相關蛋白表達水平的變化,探明MPPa-PDT能否誘導mg-63細胞發(fā)生凋亡。應用jc-1染色熒光顯微鏡和流式細胞術檢測細胞線粒體膜電位(mtΔψ)的變化,應用westernblot檢測線粒體凋亡通路相關蛋白表達水平的變化,明確線粒體凋亡途徑是否參與mppa-pdt誘導的mg-63細胞凋亡。應用mdc染色觀察細胞的自噬小體,應用透射電鏡觀察細胞的超微結構,進一步采用westernblot檢測自噬標志性蛋白表達水平的變化,明確mppa-pdt能否誘導mg-63細胞發(fā)生自噬。應用dcfh-da染色熒光顯微鏡和流式細胞術檢測細胞內活性氧(ros)水平,westernblot檢測jnk磷酸化水平的變化,明確mppa-pdt能否激活mg-63細胞內的ros-jnk通路;采用ros清除劑(nac)和jnk抑制劑(sp600125)分別清除細胞內ros和抑制jnk的激活,通過westernblot檢測jnk的磷酸化水平、自噬標志性蛋白的表達水平,明確ros-jnk通路是否參與mppa-pdt誘導的mg-63細胞自噬。最后采用自噬抑制劑(3-ma和cq)抑制細胞自噬水平,annexinv-pi染色后采用流式細胞術檢測細胞凋亡水平的變化,采用westernblot檢測凋亡相關指標表達水平的變化,明確mppa-pdt作用下mg-63細胞自噬與凋亡的關系。結果:mppa-pdt能明顯抑制人骨肉瘤mg63細胞的活性,且其抑制作用呈mppa濃度-光照能量密度劑量依賴性。mppa-pdt能誘導細胞凋亡,并伴隨有線粒體凋亡途徑的激活,主要表現(xiàn)為mppa-pdt處理后細胞凋亡率明顯升高,凋亡相關蛋白表達水平升高,同時線粒體膜電位降低,線粒體凋亡相關蛋白表達升高。mppa-pdt能誘導細胞自噬,并且ROS-JNK通路參與了MPPa-PDT誘導的MG-63細胞自噬,表現(xiàn)為MPPa-PDT處理后細胞MDC染色熒光明顯增強,MDC陽性的斑點樣結構明顯增多,電鏡可觀察到典型的自噬小體結構,自噬標志性蛋白表達水平明顯升高;ROS清除劑(NAC)和Jnk抑制劑(SP600125)都能抑制MPPa-PDT所誘導的自噬,且ROS清除劑能抑制Jnk的磷酸化。MPPa-PDT誘導的自噬可促進MG-63細胞凋亡的發(fā)生,表現(xiàn)為自噬抑制劑(3-MA和CQ)預處理可明顯降低細胞的凋亡率和凋亡相關蛋白的表達水平。結論:線粒體途徑參與MPPa-PDT誘導的MG-63細胞凋亡,ROS-Jnk信號通路參與MPPa-PDT誘導的MG-63細胞自噬;并且MPPa-PDT誘導的自噬促進MG-63細胞凋亡的發(fā)生。
【關鍵詞】：骨肉瘤 光動力療法 MPPa 自噬 凋亡
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R738.1
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 1 材料與方法12-19
• 2 結果19-22
• 3 討論22-25
• 4 結論25-26
• 參考文獻26-31
• 附插圖31-38
• 文獻綜述38-47
• 參考文獻43-47
• 致謝47-48
• 攻讀碩士期間的科研情況簡介48-49

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 黃秋;涂平華;歐云生;劉渤;陶勇;尹航;;MPPa-PDT誘導人骨巨細胞瘤細胞自噬[J];第三軍醫(yī)大學學報;2015年17期

2 ;JNK pathway:diseases and therapeutic potential[J];Acta Pharmacologica Sinica;2007年05期

，

本文編號：769620