本文關(guān)鍵詞：Th17細胞在TL1A調(diào)控結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌中作用的初步研究

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【摘要】：隨著我國炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease,IBD)發(fā)病率的不斷攀升,對其機制及并發(fā)癥防治的研究也正日益成為人們關(guān)注的焦點。這其中結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌(colitis associated colorectal cancer,CAC)是一種與IBD密切相關(guān),最令人擔憂的遠期并發(fā)癥,其發(fā)生與病變范圍、炎癥程度、發(fā)病年齡、患病時間和結(jié)直腸癌家族史等因素有關(guān)。研究其發(fā)病機制能為臨床上有效防治結(jié)直腸癌提供有力幫助。CAC是腸道在反復的炎癥刺激基礎上,不斷地增生修復最終由異型增生轉(zhuǎn)變?yōu)榘┑臐u進過程。這其中炎癥是其始動因素。作為體內(nèi)重要促炎因子的白細胞介素17(Interleukin-17,IL-17)、腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白細胞介素6(Interleukin-6,IL-6),除了參與多種炎癥性疾病和自身免疫性疾病的發(fā)生外還對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有重要影響。在圍繞結(jié)腸炎誘發(fā)癌變分子激活的機制研究中發(fā)現(xiàn):細胞因子可以通過與特異性受體結(jié)合,增強包括NF-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、WNT、STAT3等在內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子活性,從而發(fā)揮對CAC的調(diào)控作用。腫瘤壞死因子樣配體1A(TNF-like ligand 1 aberrance,TL1A)是新發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤壞死因子超家族成員,體內(nèi)、體外的研究均已證實TL1A可以通過促進T細胞和APCs的表型活化,增強單個核細胞分泌Th17型細胞因子活性,上調(diào)IL-17、TNF-α和IL-6的表達,促進腸黏膜炎癥的發(fā)生,參與IBD的起病。那么它作為T細胞的免疫增強子是否會通過促進炎癥反應而影響CAC的發(fā)生呢?目前尚未有相關(guān)文獻報道,為此我們利用TL1A過表達的轉(zhuǎn)基因(LCK-CD2-TL1A-GFP-transgenic,L-Tg)小鼠和野生型(wild type,WT)C57BL/6小鼠,建立實驗性結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌模型,研究TL1A在其中的作用以期尋找問題的答案。目的:建立炎癥誘導的小鼠結(jié)直腸癌模型,了解TL1A在結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌中的作用。方法:①采用real-time Q-PCR方法進行LCK-CD2-TL1A-GFP基因型小鼠的鑒定與篩選。②通過誘變劑AOM與致炎劑DSS聯(lián)合誘導的方式建立實驗性結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌模型,將L-Tg小鼠與C57BL/6 WT小鼠(8-12周)分別隨機分為Control組、AOM組、DSS組和AOM+DSS組,共8組,每組10只。Control組正常飲食;AOM組在實驗第一天接受10 mg/Kg AOM單劑量腹腔注射后正常飲食;DSS組先連續(xù)飲用7天濃度為2.5%的DSS,隨后14天飲用蒸餾水,以此為一個循環(huán),共飲用4個循環(huán);AOM+DSS組單劑量腹腔注射AOM 10 mg/Kg聯(lián)合間斷飲用4個循環(huán)的2.5%DSS。③結(jié)腸黏膜炎癥程度的評估包括體重變化(Body weight,BW)、疾病活動指數(shù)(Disease activity index,DAI)、結(jié)腸形態(tài)學變化、組織病理學評分和髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)檢測。④腫瘤形成情況的評估包括計算腫瘤的數(shù)目、直徑、成瘤率并對異型增生程度進行組織病理學評估。⑤應用Western blot技術(shù)檢測結(jié)腸組織中IL-17A、TNF-α和IL-6蛋白的定量表達。⑥將MPO活性和IL-17A、TNF-α、IL-6的相對表達量分別與腫瘤的數(shù)目、大小和異型增生評分做相關(guān)性分析。結(jié)果:①根據(jù)基因LCK-CD2-TL1A-GFP序列測定小鼠DNA,Tg小鼠目的基因成像在192 bp位置,而WT小鼠基因測定成像,在192 bp位置未檢測到目的基因,據(jù)此篩選鑒定Tg小鼠;②與Control組和AOM組相比,轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠的DSS組和AOM+DSS組小鼠體重均有減輕,DAI評分顯著升高,AOM+DSS/Tg組比AOM+DSS/WT組升高更明顯(2.3±0.76 vs 1.28±0.47,P0.05);大體形態(tài)顯示:DSS組結(jié)腸腸壁充血、水腫,AOM+DSS組腸壁增厚并出現(xiàn)腸腔狹窄、扭曲;光鏡下可見DSS組結(jié)腸組織有大量炎癥細胞浸潤,黏膜上皮破壞形成淺潰瘍,病理評分顯著增加,AOM+DSS組可見腺體扭曲變形,細胞大小不等,形態(tài)不一,核大深染,呈異型性增生。MPO結(jié)果顯示:WT和Tg小鼠的Control組和AOM組間MPO活性均無明顯差異,而與Control組和AOM組相比,DSS組、AOM+DSS組小鼠結(jié)腸MPO明顯升高,DSS/Tg、AOM+DSS/Tg較DSS/WT、AOM+DSS/WT組升高更明顯;③計算腫瘤的數(shù)目、大小和成瘤率,與野生型鼠比較,AOM+DSS/Tg組瘤體數(shù)目增多(5.62±1.30 vs 3.5±1.19,P0.05)、直徑增大(2.98±0.79 vs 2.08±0.37,P0.05),成瘤率明顯增高(88.9%vs 66.7%)且異型增生的組織病理學評分明顯增高(2.75±0.5 vs 1.7±0.8,P0.05);④用Western blot檢測IL-17A、TNF-α和IL-6表達,結(jié)果顯示:與Control組和AOM組相比,WT和Tg小鼠的DSS組、AOM+DSS組IL-17A、TNF-α和IL-6表達水平顯著升高(P0.05),AOM+DSS/Tg組比AOM+DSS/WT升高明顯,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)⑤MPO活性與腫瘤的數(shù)目、大小呈正相關(guān)(r=0.6,r=0.55,P0.05);IL-17A、TNF-α、IL-6的相對表達量均與腫瘤的數(shù)目和異型增生評分呈顯著性正相關(guān)(P0.05),IL-17A、TNF-α同時還與腫瘤的大小呈正相關(guān)(P0.05)。結(jié)論:TL1A過表達會促進結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌的進程,其機制可能與TL1A促進Th17細胞分泌炎癥因子IL-17A、TNF-α和IL-6有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤壞死因子樣配體1A 炎癥性腸病 結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌 炎癥因子 Th17細胞
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34;R574.62
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-24
• 結(jié)果24-28
• 附圖28-37
• 討論37-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-45
• 綜述 細胞因子及相關(guān)信號通路在結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌中的作用與機制研究新進展45-54
• 參考文獻51-54
• 致謝54-55
• 個人簡歷55

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