本文關(guān)鍵詞：CTP-FoxM1抗原負(fù)載的DC疫苗對(duì)小鼠FoxM1陽(yáng)性肝癌皮下模型的免疫治療效應(yīng)

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【摘要】：目的:體外培養(yǎng)Hepa1-6小鼠肝癌細(xì)胞株,了解FoxM1作為腫瘤抗原在該細(xì)胞株中蛋白的表達(dá)水平,探討Hepa1-6細(xì)胞用于小鼠Fox M1陽(yáng)性肝癌皮下模型建立的可能性;摸索Hepa1-6細(xì)胞建立C57BL/6小鼠FoxM1陽(yáng)性皮下肝癌的最佳條件;并探討CTP-FoxM1負(fù)載的DC疫苗對(duì)小鼠FoxM1陽(yáng)性皮下肝癌的免疫治療作用。方法:在37℃、5%CO2孵箱中,采用含有10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基(1%青鏈霉素)培養(yǎng)小鼠肝癌細(xì)胞株Hepa1-6,收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期Hepa1-6肝癌細(xì)胞,RIPA裂解液(強(qiáng))提取Hepa1-6細(xì)胞總蛋白,western blot方法鑒定FoxM1在小鼠肝癌細(xì)胞系Hepa1-6中的表達(dá)水平。于C57BL/6小鼠右脅腹皮下注射濃度分別5x106/ml、1x107/ml、3x107/ml的Hepa1-6細(xì)胞0.1ml,觀察小鼠皮下腫瘤生長(zhǎng)情況并每?jī)商鞙y(cè)量瘤體體積,繪制皮下肝癌的生長(zhǎng)曲線,摸索小鼠皮下成瘤的最適條件;HE染色鑒定皮下腫瘤組織,同時(shí)Western blot檢測(cè)腫瘤組織中FoxM1的表達(dá)情況。以濃度為1ug/ml的融合蛋白CTP-FoxM1轉(zhuǎn)導(dǎo)DC48h制成疫苗,注射于荷瘤小鼠左脅腹皮下,測(cè)量并記錄小鼠皮下肝癌瘤體的變化情況,病理檢查確定腫瘤在肺、肝、脾等臟器的轉(zhuǎn)移情況,ELISA試劑盒檢測(cè)小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2的分泌水平,最終評(píng)估ctp-foxm1負(fù)載的dc疫苗對(duì)小鼠皮下肝癌的免疫治療效應(yīng)。此外,我們還采用elisa方法檢測(cè)了78例phc患者血清中cxcl13的表達(dá)情況,回顧性分析患者臨床病理特征和實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)并探討cxcl13在肝癌中臨床意義。結(jié)果:hepa1-6小鼠肝癌細(xì)胞中高表達(dá)foxm1,可以用來(lái)建立foxm1陽(yáng)性小鼠皮下肝癌模型。以3x107/ml濃度的hepa1-6細(xì)胞0.1ml荷瘤c57bl/6小鼠,建模時(shí)間短、成功率較高,he染色多見(jiàn)病理性核分裂,腫瘤內(nèi)微血管豐富,與臨床hcc類似,為觀察后續(xù)dc疫苗在小鼠體內(nèi)的的抗腫瘤免疫效應(yīng)奠定了基礎(chǔ)。ctp-foxm1抗原負(fù)載的dc疫苗治療hepa1-6肝癌細(xì)胞荷瘤小鼠,小鼠腫瘤生長(zhǎng)受到抑制,且與ctp、foxm1、pbs負(fù)載的dc疫苗對(duì)照組相比,皮下瘤體積和腫瘤重量均更小,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ctp-foxm1組小鼠血清中細(xì)胞因子ifn-γ、il-2的表達(dá)量與其他組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.5),he病理檢查正常低表達(dá)foxm1的小腸未發(fā)現(xiàn)炎癥以及組織損傷。原發(fā)性肝癌患者血清cxcl13表達(dá)水平明顯高于健康人,并且與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移、tnm分期密切相關(guān)。結(jié)論:hepa1-6細(xì)胞為foxm1陽(yáng)性的小鼠肝癌細(xì)胞株,可用于foxm1陽(yáng)性小鼠皮下肝癌的建立。0.1ml濃度為3x107/ml的hepa1-6細(xì)胞可以在c57bl/6小鼠體內(nèi)建立穩(wěn)定的皮下移植瘤,為肝癌的治療提供理想的動(dòng)物模型。ctp-foxm1抗原負(fù)載的dc疫苗對(duì)小鼠皮下移植瘤顯示出免疫治療效應(yīng),且明顯高于單獨(dú)的foxm1負(fù)載的dc疫苗組,說(shuō)明有ctp負(fù)載系統(tǒng)的dc疫苗能更好激活抗腫瘤免疫反應(yīng),殺傷腫瘤,且對(duì)機(jī)體無(wú)明顯的毒副作用,安全可靠。CXCL13可作為PHC患者的診斷和預(yù)后評(píng)估的血清學(xué)標(biāo)志物。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 CTP-FoxM1 DC疫苗 Hepa1-6細(xì)胞 CTL效應(yīng)
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7;R-332
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-16
• 第一部分 Hepa1-6 細(xì)胞培養(yǎng)及FoxM1表達(dá)鑒定16-24
• 1 材料16-18
• 2 方法18-21
• 3 結(jié)果21-23
• 4 討論23-24
• 第二部分 小鼠皮下肝癌模型的建立24-30
• 1 材料24-25
• 2 方法25-26
• 3 結(jié)果26-28
• 4 討論28-30
• 第三部分 DC疫苗對(duì)小鼠皮下肝癌的免疫治療效應(yīng)30-38
• 1 材料30-31
• 2 方法31-33
• 3 結(jié)果33-37
• 4 討論37-38
• 第四部分 CXCL13在原發(fā)性肝癌患者血清中的表達(dá)及臨床意義38-47
• 1 材料38
• 2 方法38-39
• 3 結(jié)果39-46
• 4 討論46-47
• 全文總結(jié)47-49
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 文獻(xiàn)綜述54-62
• 參考文獻(xiàn)58-62
• 致謝62-63
• 攻讀學(xué)位期間撰寫(xiě)和發(fā)表的學(xué)術(shù)論文63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

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本文編號(hào)：767978