本文關(guān)鍵詞：急性髓細(xì)胞白血病中miR-155、SHIP1及AKT的表達(dá)及臨床意義

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【摘要】：研究目的:檢測急性髓細(xì)胞白血病(AML)患者骨髓單個核細(xì)胞(BMMCs)中miR-155及SHIP1、AKT mRNA的表達(dá),分析miR-155及SHIP1、AKT在急性髓細(xì)胞白血病患者中的臨床意義,初步探討miR-155及PI3K/AKT信號通路在AML發(fā)病機(jī)理中的作用,為miR-155的靶點治療提供理論基礎(chǔ)。研究方法:1、收集急性髓細(xì)胞白血病患者骨髓標(biāo)本80例,其中初治組46例、緩解組34例;對照組11例,為缺鐵性貧血患者。2、采用實時熒光定量PCR方法分別檢測AML患者骨髓標(biāo)本中miR-155和內(nèi)參基因U6及SHIP1、AKT和內(nèi)參基因GAPDH mRNA的表達(dá)水平。運用相對定量法計算miR-155及SHIP1、AKT mRNA的相對表達(dá)量,計算公式如下:目的基因相對表達(dá)量=2-ΔCt×102。3、應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料呈非正態(tài)分布,用中位數(shù)描述,采用Mann-Whitney U檢驗,相關(guān)性分析行Spearman相關(guān)性檢驗;計數(shù)資料采用χ2檢驗。檢驗水準(zhǔn)取α=0.05,選擇p0.05為結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義。實驗結(jié)果:1、AML患者BMMCs中miR-155相對表達(dá)水平在初治組4.2931(2.1642~8.8388)及緩解組3.6853(2.3697~5.2406)均明顯高于對照組2.5190(0.9848~4.9360),P值分別為0.001和0.004,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);初治組miR-155的表達(dá)水平較緩解組也明顯增高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.022)。2、AML患者BMMCs中miR-155相對表達(dá)水平在預(yù)后中等組4.3587(2.3519~8.8388)、不良組5.8910(3.2193~7.9801)均明顯高于預(yù)后良好組3.4706(2.1642~5.2193),P值分別為0.036、0.022,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);預(yù)后中等組與不良組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.174)。3、按照34例初治患者miR-155的中位表達(dá)水平3.9656將患者分為高表達(dá)組(mir-155表達(dá)≥3.9656)與低表達(dá)組(mir-155表達(dá)3.9656),結(jié)果顯示高表達(dá)組與低表達(dá)組初次誘導(dǎo)緩解率分別為88.9%、56.3%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.636,p=0.031);且化療后未完全緩解患者初治時的mir-155表達(dá)水平5.3700(2.9360~8.8388)明顯高于化療后達(dá)完全緩解患者初治時的mir-155表達(dá)水平3.9012(2.1642~7.9801),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.005)。4、aml初治組中mir-155相對表達(dá)水平與患者的年齡、骨髓原始細(xì)胞比例、外周血白細(xì)胞計數(shù)、外周血血紅蛋白計數(shù)、外周血血小板計數(shù)均無明顯相關(guān)性(p0.05)。5、aml患者bmmcs中ship1mrna相對表達(dá)水平在初治組為0.9083(0.0137~2.8756),緩解組為1.8597(0.6848~4.2986),對照組為1.9740(0.3696~4.4502);緩解組及對照組均明顯高于初治組,p值分別為0.002和0.005,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01);緩解組與對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.510)。6、aml患者bmmcs中aktmrna相對表達(dá)水平在aml初治組為4.5486(2.1105~8.2922)、緩解組為4.1122(1.6328~8.0067)、對照組為4.2691(1.7854~6.4944),組間兩兩比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。7、初治組中mir-155與ship1mrna相對表達(dá)水平存在負(fù)相關(guān)(r=-0.354,p=0.016),ship1與aktmrna相對表達(dá)水平也存在負(fù)相關(guān)(r=-0.398,p=0.006);緩解組中mir-155與ship1mrna相對表達(dá)水平存在正相關(guān)(r=0.590,p=0.001),ship1與aktmrna相對表達(dá)水平無明顯相關(guān)性(r=-0.216,p=0.270);對照組中mir-155與ship1mrna相對表達(dá)水平無明顯相關(guān)性(r=-0.145,p=0.670),ship1與aktmrna相對表達(dá)水平存在正相關(guān)(r=0.609,p=0.047)。結(jié)論:1、mir-155在aml患者骨髓單個核細(xì)胞中呈高表達(dá),其表達(dá)水平與疾病狀態(tài)有關(guān)。2、mir-155的表達(dá)水平與aml預(yù)后相關(guān),預(yù)后中等組及不良組顯著高于預(yù)后良好組。mir-155表達(dá)水平與aml臨床療效密切相關(guān),mir-155高表達(dá)組患者的緩解率較低。3、mir-155與骨髓原始細(xì)胞比例,外周血白細(xì)胞、血紅蛋白和血小板計數(shù)以及年齡無明顯相關(guān)性。4、SHIP1 mRNA在AML患者骨髓單個核細(xì)胞中呈低表達(dá)。AKT mRNA在AML患者骨髓單個核細(xì)胞中表達(dá)水平無明顯變化。5、AML初治組中miR-155與SHIP1mRNA表達(dá)及SHIP1mRNA與AKT mRNA表達(dá)均存在負(fù)相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：急性髓細(xì)胞白血病 miRNA miR-155 SHIP1 AKT PI3K/AKT
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.71
【目錄】：

• 摘要3-6
• Abstract6-12
• 中英文縮略詞表12-13
• 第1章 引言13-17
• 第2章 材料與方法17-27
• 2.1 病例及臨床資料17
• 2.2 治療方案17-18
• 2.3 診斷及臨床療效評價標(biāo)準(zhǔn)18
• 2.3.1 AML診斷標(biāo)準(zhǔn)18
• 2.3.2 AML緩解標(biāo)準(zhǔn)18
• 2.4 主要實驗試劑18-19
• 2.5 主要實驗儀器19-20
• 2.6 常用實驗試劑的配制20-21
• 2.6.1 10×紅細(xì)胞裂解液的配制20
• 2.6.2 0.1%DEPC水的配制20
• 2.6.3 75%乙醇的配制20
• 2.6.4 PBS緩沖液的配制20
• 2.6.5 5×TAE緩沖液的配制20-21
• 2.7 實驗方法及步驟21-27
• 2.7.1 骨髓單個核細(xì)胞的分離21
• 2.7.2 骨髓細(xì)胞總RNA的提取21-22
• 2.7.3 RNA濃度、純度及完整性測定22-23
• 2.7.4 RNA逆轉(zhuǎn)錄成c DNA23-24
• 2.7.5 實時熒光定量PCR引物設(shè)計及合成24
• 2.7.6 實時熒光定量PCR24-26
• 2.7.7 結(jié)果統(tǒng)計學(xué)分析26-27
• 第3章 實驗結(jié)果27-36
• 3.1 總RNA純度及完整性檢測27
• 3.2 熒光定量PCR的擴(kuò)增及溶解曲線27-29
• 3.3 miR-155的表達(dá)與AML的關(guān)系29-33
• 3.3.1 miR-155在AML中的表達(dá)情況29-30
• 3.3.2 染色體核型對miR-155表達(dá)的影響30-31
• 3.3.3 miR-155的表達(dá)與臨床療效的關(guān)系31-32
• 3.3.4 miR-155的表達(dá)與臨床指標(biāo)的相關(guān)性32-33
• 3.4 SHIP1在AML中的表達(dá)情況33-34
• 3.5 AKT在AML中的表達(dá)情況34-35
• 3.6 miR-155與SHIP1以及SHIP1與AKT表達(dá)的相關(guān)性35-36
• 第4章 討論36-43
• 4.1 miR-155在AML中表達(dá)37-38
• 4.2 miR-155與AML預(yù)后的關(guān)系38-39
• 4.3 miR-155與AML療效的關(guān)系39-40
• 4.4 miR-155與AML患者臨床特征的相關(guān)性40
• 4.5 SHIP1在AML中的表達(dá)40-41
• 4.6 AKT在AML中的表達(dá)41
• 4.7 miR-155 與 SHIP1、AKT 在 AML 中表達(dá)的相關(guān)性41-43
• 第5章 結(jié)論與展望43-44
• 5.1 結(jié)論43
• 5.2 展望43-44
• 致謝44-45
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果51-52
• 綜述52-59
• 參考文獻(xiàn)57-59

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：759248