本文關(guān)鍵詞：TROP2、Ki67在宮頸病變組織中的表達(dá)及臨床研究

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【摘要】：宮頸癌是世界上第三大流行的婦科惡性腫瘤,估計(jì)每年有530000婦女發(fā)病以及275000婦女死于宮頸癌。滋養(yǎng)層細(xì)胞表面抗原2(trophoblast cell-surface antigens 2, TROP2)是一個(gè)36 kDa跨膜糖蛋白,是腫瘤相關(guān)的鈣信號(hào)轉(zhuǎn)換器基因家族一員。它最初在人滋養(yǎng)層細(xì)胞中發(fā)現(xiàn),在大多數(shù)上皮性惡性腫瘤中過(guò)量表達(dá)而在正常組織中不表達(dá)或低表達(dá)。大量的證據(jù)已經(jīng)表明TROP2在多種上皮性腫瘤中特異性過(guò)表達(dá),可以通過(guò)加速細(xì)胞周期進(jìn)程,導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生和侵襲,而且TROP2的過(guò)度表達(dá)與腫瘤進(jìn)展和不良預(yù)后密切相關(guān)。Ki67(Antigen identified by monoclonal antibody細(xì)胞增殖抗原)是一種核抗原,與細(xì)胞的增殖相關(guān),是目前檢測(cè)細(xì)胞增殖活性比較準(zhǔn)確可靠的標(biāo)記物。目前國(guó)內(nèi)關(guān)于TROP2、Ki67與宮頸病變關(guān)系的臨床研究鮮有報(bào)道,本研究利用免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry IHC)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time Quantitative polymerase chain reaction RT-qPCR)、及蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)法檢測(cè)TROP2、Ki67在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸鱗癌組織中的表達(dá),探討其與宮頸病變臨床病理的關(guān)系及二者的相關(guān)性。目的本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)人滋養(yǎng)細(xì)胞表面抗原2(TROP2)、Ki67在宮頸鱗癌(SCC)、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)、正常宮頸上皮組織中的表達(dá),分析其與臨床病理因素的關(guān)系,同時(shí)探討二者的相關(guān)性。方法采用免疫組化SP法檢測(cè)TROP2、Ki67蛋白在22例正常宮頸、35例CINI、35例CINII、38例CINIII以及65例宮頸鱗癌組織中的表達(dá)情況,并結(jié)合臨床病理因素進(jìn)行分析；實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)20例正常宮頸、20例CINI、20例CINII、20例CINIII和20例宮頸鱗癌組織中TROP2、Ki67mRNA的表達(dá)情況；蛋白質(zhì)印跡的方法檢測(cè)例20例正常宮頸、20例CINI、20例CINII、20例CINIII和20例宮頸鱗癌組織中TROP2蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果1、免疫組化法顯示：①TROP2蛋白在宮頸鱗癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中呈陽(yáng)性表達(dá),主要定位在細(xì)胞膜上,且表達(dá)水平隨著宮頸病變程度的加重而逐漸升高。TROP2在正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為22.7%、72.4%、95.4%,三者陽(yáng)性表達(dá)呈逐漸上升的趨勢(shì),差異有顯著性(χ2=73.124, p=0.000); TROP2在CINI、CINII、CINIII組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為52%、71.4%、86.8%,三者陽(yáng)性表達(dá)呈逐漸上升的趨勢(shì),差異有顯著性(x2=44.078,p=0.000)；同時(shí)研究顯示TROP2的表達(dá)水平與宮頸鱗癌的臨床分期、病理分級(jí)以及淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)(p0.05),而與年齡及腫瘤大小沒(méi)有明顯關(guān)聯(lián)(p0.05)。②Ki67蛋白在宮頸鱗癌及CIN組織中呈陽(yáng)性表達(dá),主要定位在細(xì)胞核上。Ki67蛋白在正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為9.1%、62.2%、90.9%,三者陽(yáng)性表達(dá)呈逐漸上升的趨勢(shì),差異有顯著性(χ2=89.000, p=0.000); TROP2在CINI、CINⅡ、CINⅢ組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為36%、62.8%、78.9%,且表達(dá)水平隨著宮頸病變程度的加重而逐漸升高,差異有顯著性(x2=42.254,p=0.000)；同時(shí)研究顯示Ki67的表達(dá)水平與宮頸鱗癌的臨床分期、病理分級(jí)以及淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)(p0.05),而與年齡及腫瘤大小沒(méi)有明顯關(guān)聯(lián)(p0.05)。③在正常正常宮頸、CINⅠ、 CINⅡ、CINⅢ及宮頸鱗癌組織中TROP2和Ki67的表達(dá)均呈顯著正相關(guān)(rs=0.583, p=0.004; rs=0.5554, p=0.004; rs=0.430, p=0.01; rs=0.563, p0.001; rs=0.487, p0.001)。2、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法顯示：①以GAPDH mRNA為內(nèi)參照標(biāo)準(zhǔn),正常宮頸、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宮頸鱗癌組織中TROP2 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平分別為0.97±0.11、1.09±0.17、1.26±0.14、1.51±0.10、1.93±0.17。TROP2 mRNA在宮頸鱗癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中的表達(dá)明顯高于其在正常宮頸組織中的表達(dá),與正常組比較CINⅡ、CINⅢ及宮頸鱗癌組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p分別為p0.05、p0.01、p0.01),而CINI與正常組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。②以GAPDH mRNA為內(nèi)參照標(biāo)準(zhǔn),正常宮頸、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宮頸鱗癌組織中Ki67 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平分別為0.93±0.12、1.16±0.08、1.59±0.12、1.94±0.25、2.32±0.14。CINⅡ、CINⅢ及宮頸鱗癌組織中TROP2、Ki67 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平明顯高于正常組,兩者比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01,p0.01,p0.001),而CINI與正常組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3、蛋白質(zhì)印跡法顯示：TROP2的灰度隨著宮頸組織病變程度的加重逐漸加深,正常宮頸、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宮頸鱗癌組織中TROP2蛋白的相對(duì)表達(dá)水平分別為1.0±0.03、1.15±0.12、1.47±0.11、1.79±0.12、2.06±0.11。CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宮頸鱗癌組中TROP2蛋白的相對(duì)表達(dá)水平明顯高于正常組,兩者比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p分別為p0.01,p0.001,p0.001)。結(jié)論1、TRoP2的過(guò)表達(dá)與宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展緊密相關(guān),而且TROP2的過(guò)量表達(dá)與宮頸鱗癌的臨床分期,病理分級(jí)及淋巴轉(zhuǎn)移緊密相關(guān),而與年齡及腫瘤大小沒(méi)有明顯關(guān)聯(lián),TRoP2有可能成為宮頸疾病篩查、早期診斷、宮頸鱗癌治療的重要指標(biāo)和新靶點(diǎn)。2、Ki67的過(guò)表達(dá)與宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),且Ki67的過(guò)量表達(dá)與宮頸鱗癌的臨床分期、病理分級(jí)及有無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān),而與年齡及腫瘤大小沒(méi)有明顯關(guān)聯(lián),Ki67對(duì)于進(jìn)一步了解宮頸鱗癌生物學(xué)行為和判斷預(yù)后有很重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。3、在正常宮頸、CINI、CINII、CINIII及宮頸鱗癌組織中TROP2和Ki67的表達(dá)均呈顯著正相關(guān),同時(shí)檢測(cè)ITROP2和Ki67有助于宮頸鱗癌的惡性程度的判斷和預(yù)測(cè)預(yù)后。
【關(guān)鍵詞】：TROP2 Ki67 宮頸病變 宮頸上皮內(nèi)瘤變 宮頸鱗癌 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 蛋白質(zhì)印跡
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要2-5
• ABSTRACT5-10
• 符號(hào)說(shuō)明10-11
• 第一部分 前言11-12
• 第二部分 材料和方法12-21
• 1 研究對(duì)象12
• 2 主要儀器設(shè)備12-13
• 3 主要試劑配制13-14
• 4 主要試劑14-15
• 5 方法15-20
• 5.1 免疫組織化學(xué)法15-16
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)步驟15-16
• 5.1.2 結(jié)果判斷16
• 5.2 熒光定量PCR檢測(cè)TROP2、KI67 mRNA的表達(dá)16-18
• 5.2.1 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的收集16-17
• 5.2.2 總RNA的提取(Trizol法)17
• 5.2.3 RNA濃度及質(zhì)量檢驗(yàn)17
• 5.2.4 逆轉(zhuǎn)錄17-18
• 5.2.5 引物的獲取18
• 5.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)18
• 5.3 Western blot法18-20
• 6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理20-21
• 第三部分 結(jié)果21-30
• 1 免疫組化法21-27
• 1.1 TROP2蛋白在宮頸病變組織中的表達(dá)21-24
• 1.1.1 TROP2在正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸鱗癌中的表達(dá)21-23
• 1.1.2 TROP2在宮頸上皮內(nèi)瘤樣變中的表達(dá)23
• 1.1.3 ROP2的表達(dá)和宮頸鱗癌的臨床病理特征之間的關(guān)系23-24
• 1.2 Ki67蛋白在宮頸病變組織中的表達(dá)24-27
• 1.2.1 Ki67在正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸鱗癌中的表達(dá)26
• 1.2.2 Ki67在宮頸上皮內(nèi)瘤樣變中的表達(dá)26-27
• 1.2.3 Ki67表達(dá)和宮頸鱗癌的臨床病理特征之間的關(guān)系27
• 1.3 TROP2和Ki67在宮頸組織中表達(dá)的相關(guān)性27
• 2 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測(cè)TROP2、KI67mRNA在宮頸組織中的表達(dá)27-28
• 3 蛋白印跡法檢測(cè)宮頸病變組織中TROP2蛋白的表達(dá)28-30
• 第四部分 討論30-39
• 1 TROP2與宮頸鱗癌30-35
• 1.1 TROP2概述30-31
• 1.2 TROP2與惡性腫瘤的相關(guān)性31-32
• 1.3 TROP2在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)及意義32-35
• 1.3.1 TROP2的過(guò)表達(dá)與宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)32-33
• 1.3.2 TROP2的過(guò)表達(dá)與宮頸鱗癌的臨床分期、病理分級(jí)、淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)33
• 1.3.3 TROP2有潛力成為宮頸鱗癌治療的新靶點(diǎn)33-35
• 1.3.3.1 TROP2的調(diào)控機(jī)制33-34
• 1.3.3.2 TROP2特定的單克隆抗體(hRS7)34-35
• 2 Ki67在宮頸鱗癌35-37
• 2.1 Ki67概述35
• 2.2 Ki67與宮頸鱗癌的關(guān)系35-37
• 2.2.1 Ki67的過(guò)表達(dá)與宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)35-36
• 2.2.2 Ki67的過(guò)量表達(dá)與宮頸鱗癌的臨床分期、病理分級(jí)、淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)36-37
• 3 TROP2和Ki67在宮頸鱗癌中表達(dá)的相關(guān)性及意義37
• 4 結(jié)論37
• 5 TROP2、Ki67在宮頸病變組織中研究的不足及展望37-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 綜述43-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 致謝51-52
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文52-53

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