本文關(guān)鍵詞：BRD4在預(yù)測(cè)非小細(xì)胞性肺癌預(yù)后中的作用及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： BRD4 非小細(xì)胞性肺癌 增殖 凋亡 侵襲 預(yù)后

【摘要】：BRD4是布羅莫結(jié)構(gòu)蛋白BET家族中的一員。跟其他的BET家族成員一樣,BRD4也包含兩個(gè)可識(shí)別乙酰賴氨酸殘基的布羅莫結(jié)構(gòu)域。BRD4是BET家族中研究得最徹底的一員,研究發(fā)現(xiàn)BRD4通過(guò)其布羅莫結(jié)構(gòu)域在很多生物學(xué)進(jìn)程中扮演重要角色。尤為重要的是,研究發(fā)現(xiàn)BRD4的激活表達(dá)跟黑色素瘤、肝癌、多發(fā)性骨髓瘤、Burkitt’s淋巴瘤、急性髓性白血病及乳腺癌的生存預(yù)后及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。另外,BRD4的異位融合產(chǎn)物BRD4-NUT跟半數(shù)以上侵襲性腫瘤相關(guān)。我們前期的實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)BRD4與非小細(xì)胞性肺癌的侵襲轉(zhuǎn)移能力關(guān)系密切,因此,BRD4可作為非小細(xì)胞性肺癌的一個(gè)潛在預(yù)后指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了BRD4蛋白在非小細(xì)胞性肺癌及對(duì)應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)水平,并且利用組織微陣列分析技術(shù),驗(yàn)證了BRD4蛋白表達(dá)水平與非小細(xì)胞性肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系及其預(yù)后診斷價(jià)值。此外,通過(guò)小干擾技術(shù)抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中BRD4的蛋白表達(dá)后,我們發(fā)現(xiàn)其與非小細(xì)胞性肺癌的增殖、侵襲遷移和凋亡密切相關(guān)。因此,我們得出結(jié)論,BRD4具有潛在預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值并可作為靶向治療的新靶點(diǎn),為非小細(xì)胞性肺癌的診治帶來(lái)新的曙光。第一部分BRD4在非小細(xì)胞性肺癌中高表達(dá)目的:探究BRD4蛋白在非小細(xì)胞性肺癌及對(duì)應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)情況,初步分析其在非小細(xì)胞性肺癌發(fā)生發(fā)展中扮演的角色。方法:qRT-PCR、Western Blot及免疫組化方法檢測(cè)BRD4蛋白在非小細(xì)胞性肺癌患者癌與對(duì)應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)情況。結(jié)果:上述各方法的結(jié)果一致顯示BRD4在非小細(xì)胞性肺癌患者癌組織中的表達(dá)量高于其在對(duì)應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)量,兩者間有顯著性差異(P0.05)。結(jié)論:BRD4在非小細(xì)胞性肺癌患者癌組織中表達(dá)升高,可能在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。第二部分BRD4的預(yù)后診斷價(jià)值目的:探究BRD4與非小細(xì)胞性肺癌臨床參數(shù)的關(guān)系及其預(yù)后診斷價(jià)值。方法:免疫組化方法檢測(cè)208例非小細(xì)胞性肺癌患者癌與對(duì)應(yīng)癌旁組織中BRD4蛋白的表達(dá)情況,用SPSS19.0軟件統(tǒng)計(jì)分析BRD4與肺癌患者臨床參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果:研究結(jié)果顯示BRD4蛋白高表達(dá)與非小細(xì)胞性肺癌患者中的肺鱗癌、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及腫瘤分化程度等密切相關(guān)(P0.05),且BRD4高表達(dá)組術(shù)后總體生存期明顯比BRD4低表達(dá)組短(P0.05);單因素及多因素分析結(jié)果顯示BRD4蛋白表達(dá)是非小細(xì)胞性肺癌患者獨(dú)立的預(yù)后預(yù)測(cè)因子。結(jié)論:BRD4與非小細(xì)胞性肺癌的病理類型、TNM分期、淋巴轉(zhuǎn)移及腫瘤分化程度密切相關(guān),具有預(yù)測(cè)預(yù)后的診斷價(jià)值。第三部分BRD4對(duì)非小細(xì)胞性肺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響目的:研究BRD4蛋白表達(dá)水平的改變對(duì)非小細(xì)胞性肺癌細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力及凋亡的影響。方法:應(yīng)用小干擾技術(shù)下調(diào)BRD4蛋白在非小細(xì)胞性肺癌細(xì)胞株A549與95-D中的表達(dá),經(jīng)Western Blot、流式細(xì)胞術(shù)驗(yàn)證干擾效率后,應(yīng)用細(xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力變化,Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力變化,CCK-8及BrdU免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞增殖能力變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化。結(jié)果:vshRNA干擾后A549、95-D細(xì)胞株BRD4蛋白表達(dá)明顯下調(diào),且BRD4表達(dá)下調(diào)伴隨著非小細(xì)胞性肺癌細(xì)胞增殖、侵襲遷移能力明顯減弱,且凋亡率增加(P0.05)。結(jié)論:BRD4具有促進(jìn)非小細(xì)胞性肺癌細(xì)胞增殖、侵襲遷移的能力,且能抑制腫瘤細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：BRD4 非小細(xì)胞性肺癌 增殖 凋亡 侵襲 預(yù)后
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 英文縮略詞11-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 BRD4在非小細(xì)胞性肺癌組織中高表達(dá)14-24
• 2.1 材料與方法14-19
• 2.1.1 材料14-15
• 2.1.1.1 組織標(biāo)本14
• 2.1.1.2 試劑14-15
• 2.1.1.3 儀器15
• 2.1.2 方法15-19
• 2.1.2.1 組織RNA的提取（Trizol法）15-16
• 2.1.2.2 cDNA的合成（逆轉(zhuǎn)錄法）16
• 2.1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR16-17
• 2.1.2.4 組織蛋白的提取17
• 2.1.2.5 蛋白免疫印跡17-18
• 2.1.2.6 免疫組織化學(xué)18-19
• 2.1.2.7 免疫組化結(jié)果判定19
• 2.2 結(jié)果19-20
• 2.2.1 qRT-PCR、Western Blot檢測(cè)BRD4在肺癌及其對(duì)應(yīng)癌旁中的表達(dá)19-20
• 2.2.2 免疫組化法檢測(cè)BRD4在非小細(xì)胞性肺癌及其對(duì)應(yīng)癌旁中的表達(dá)20
• 2.3 討論20-21
• 2.4 結(jié)論21-22
• 2.5 參考文獻(xiàn)22-24
• 第三章 BRD4的預(yù)后診斷價(jià)值24-31
• 3.1 材料與方法24-25
• 3.1.1 材料24
• 3.1.1.1 組織標(biāo)本24
• 3.1.1.2 試劑24
• 3.1.1.3 儀器24
• 3.1.2 方法24-25
• 3.1.2.1 組織芯片制作24
• 3.1.2.2 免疫組織化學(xué)24
• 3.1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析24-25
• 3.2 結(jié)果25-29
• 3.2.1 組織芯片技術(shù)進(jìn)一步研究BRD4在肺癌及其癌旁中的表達(dá)25
• 3.2.2 本實(shí)驗(yàn)中非小細(xì)胞性肺癌患者的臨床病理參數(shù)25-26
• 3.2.3 統(tǒng)計(jì)分析BRD4與各臨床病理參數(shù)的關(guān)系26-27
• 3.2.4 BRD4高表達(dá)與非小細(xì)胞性肺癌的差預(yù)后成正相關(guān)27-28
• 3.2.5 非小細(xì)胞性肺癌亞型分析進(jìn)一步明確BRD4與肺癌患者預(yù)后的關(guān)系28-29
• 3.3 討論29-30
• 3.4 結(jié)論30
• 3.5 參考文獻(xiàn)30-31
• 第四章 BRD4對(duì)非小細(xì)胞性肺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響31-43
• 4.1 材料與方法31-35
• 4.1.1 材料31-32
• 4.1.1.1 細(xì)胞株31
• 4.1.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)材料31
• 4.1.1.3 試劑31
• 4.1.1.4 儀器31-32
• 4.1.2 方法32-35
• 4.1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)32
• 4.1.2.2 細(xì)胞總RNA提取32
• 4.1.2.3 cDNA的合成32
• 4.1.2.4 熒光定量PCR32-33
• 4.1.2.5 細(xì)胞蛋白提取33
• 4.1.2.6 蛋白免疫印跡33
• 4.1.2.7 小干擾試驗(yàn)33
• 4.1.2.8 干擾效果鑒定33-34
• 4.1.2.9 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)34
• 4.1.2.10 Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)34
• 4.1.2.11 流式細(xì)胞凋亡檢測(cè)34-35
• 4.1.2.12 腫瘤細(xì)胞增殖能力檢測(cè)35
• 4.1.2.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析35
• 4.2 結(jié)果35-40
• 4.2.1 非小細(xì)胞性肺癌細(xì)胞系中BRD4的表達(dá)情況35-36
• 4.2.2 BRD4干擾效果檢測(cè)36-37
• 4.2.3 BRD4對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移能力的影響37-38
• 4.2.4 BRD4對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲能力的影響38-39
• 4.2.5 BRD4對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的影響39
• 4.2.6 BRD4對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響39-40
• 4.3 討論40-41
• 4.4 結(jié)論41
• 4.5 參考文獻(xiàn)41-43
• 致謝43-44
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果44-45
• 綜述45-54
• 參考文獻(xiàn)51-54

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本文編號(hào)：758620