發(fā)布時(shí)間：2017-08-28 01:21

  本文關(guān)鍵詞：利用濾除白細(xì)胞分離培養(yǎng)NK細(xì)胞方法的優(yōu)化

  更多相關(guān)文章： NK細(xì)胞 同種異體 血液制品 分離培養(yǎng)

【摘要】：目的:利用制備血制品過程的濾除掉的淋巴細(xì)胞經(jīng)體外誘導(dǎo)擴(kuò)增NK細(xì)胞,對(duì)NK細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法進(jìn)行優(yōu)化,并對(duì)培養(yǎng)以后所獲得的NK細(xì)胞的功能和活性進(jìn)行檢測(cè),為非自體NK細(xì)胞的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室研究數(shù)據(jù)。方法:收集山西省血液中心2014年3月至2014年11月期間15例健康獻(xiàn)血者的新鮮外周血,將制備血液制品后廢棄的濾除白細(xì)胞回收,經(jīng)過密度梯度離心法獲得外周血中單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),每份樣本分為3組,A組:培養(yǎng)瓶預(yù)先包被CD3m Ab;B組:培養(yǎng)瓶預(yù)先包被CD16m Ab;C組:培養(yǎng)瓶預(yù)先包被CD16m Ab和CD3m Ab,相同培養(yǎng)條件下,加入相同無血清細(xì)胞培養(yǎng)液和細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ誘導(dǎo)擴(kuò)增。擴(kuò)增第0、8、12、17天高倍鏡下看細(xì)胞長(zhǎng)勢(shì)并計(jì)算細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù),用流動(dòng)檢測(cè)細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表型為CD3-CD56+的細(xì)胞比例的變化,選擇NK占比最高的B組細(xì)胞成為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,分別測(cè)定培養(yǎng)第0天和第17天B組NK細(xì)胞表面高活性受體(NKp30、NKp46、NKG2D)的表達(dá)及細(xì)胞殺傷因子IFN-γ的分泌水平,培養(yǎng)第17天采用LDH釋放法及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)B組NK細(xì)胞對(duì)惡性細(xì)胞K562和Raji細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。結(jié)果:比較誘導(dǎo)培養(yǎng)第17天與培養(yǎng)第0天的CD3-CD56+細(xì)胞占比的變化情況,A組為[(15.19±12.22)%vs(16.34±10.51)%,p0.05],差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,B組為[(83.63±10.63)%vs(16.34±10.51)%,p0.05],C組為[(49.40±12.64)%vs(16.34±10.51)%,p0.05],B和C組培養(yǎng)第17天的CD3-CD56+細(xì)胞比例均較第0天顯著增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;第17天CD3-CD56+細(xì)胞比例B組比例顯著高于A和C組;三組NK細(xì)胞總數(shù)均大于109個(gè);檢測(cè)B組培養(yǎng)第17天NK表面活化性受體NKp30和NKp46的表達(dá)比例均比第0天顯著增高,NKG2D比例變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;B組擴(kuò)增的NK細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞和Raji細(xì)胞均具有殺傷能力,對(duì)K562細(xì)胞具有較高的殺傷能力。結(jié)論:制備血液制品后濾除掉的白細(xì)胞,安全可靠,無病原體污染,經(jīng)體外分離培養(yǎng)后,可得到比例高達(dá)90%的NK細(xì)胞,其總數(shù)大于109個(gè),細(xì)胞殺傷能力增強(qiáng),對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞具有較高殺傷能力,達(dá)到臨床治療惡性疾病的應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn),濾除白細(xì)胞有希望成為臨床非自體NK細(xì)胞防治惡性腫瘤的一種細(xì)胞來源;NK細(xì)胞擴(kuò)增過程中經(jīng)過密度梯度離心法分出外周血單個(gè)核細(xì)胞,再添加單克隆抗體和細(xì)胞因子誘導(dǎo)擴(kuò)增,培養(yǎng)過程簡(jiǎn)便,成本較低,適用于臨床大規(guī)模應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】：NK細(xì)胞 同種異體 血液制品 分離培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.51
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表9-11
• 前言11-14
• 1 材料與方法14-19
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法15-18
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析18-19
• 2 結(jié)果19-26
• 2.1 培養(yǎng)前后NK細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化19
• 2.2 NK細(xì)胞表型檢測(cè)和擴(kuò)增情況19-21
• 2.3 NK細(xì)胞表面活化性受體表達(dá)率檢測(cè)21-22
• 2.4 NK細(xì)胞分泌IFN-γ水平22-23
• 2.5 NK細(xì)胞作用前后腫瘤細(xì)胞的形態(tài)變化23-24
• 2.6 NK細(xì)胞對(duì)不同腫瘤細(xì)胞殺傷作用比較24-26
• 3 討論26-29
• 4 結(jié)論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-34
• 綜述34-48
• 參考文獻(xiàn)41-48
• 致謝48-49
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果49-50
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷50

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 Chávez-Galán L;Arenas-Del Angel MC;Zenteno E;Chávez R;Lascurain R;;Cell Death Mechanisms Induced by Cytotoxic Lymphocytes[J];Cellular & Molecular Immunology;2009年01期

2 周智鋒;李潔羽;陳明水;葉韻斌;;細(xì)胞因子組合體外擴(kuò)增人NK細(xì)胞的研究[J];中華腫瘤防治雜志;2014年03期

3 吳長(zhǎng)有;劉杰;楊濱燕;Mario Roedere;;人外周血CD56~+NK細(xì)胞亞群表型和生物學(xué)特征[J];中華腫瘤雜志;2006年03期

4 張慰慈,張建;人NK細(xì)胞系的建立及其在腫瘤生物治療中的應(yīng)用前景[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2002年03期

，

本文編號(hào)：746687