本文關(guān)鍵詞：利用濾除白細胞分離培養(yǎng)NK細胞方法的優(yōu)化

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【摘要】：目的:利用制備血制品過程的濾除掉的淋巴細胞經(jīng)體外誘導(dǎo)擴增NK細胞,對NK細胞的分離培養(yǎng)方法進行優(yōu)化,并對培養(yǎng)以后所獲得的NK細胞的功能和活性進行檢測,為非自體NK細胞的臨床應(yīng)用提供實驗室研究數(shù)據(jù)。方法:收集山西省血液中心2014年3月至2014年11月期間15例健康獻血者的新鮮外周血,將制備血液制品后廢棄的濾除白細胞回收,經(jīng)過密度梯度離心法獲得外周血中單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),每份樣本分為3組,A組:培養(yǎng)瓶預(yù)先包被CD3m Ab;B組:培養(yǎng)瓶預(yù)先包被CD16m Ab;C組:培養(yǎng)瓶預(yù)先包被CD16m Ab和CD3m Ab,相同培養(yǎng)條件下,加入相同無血清細胞培養(yǎng)液和細胞因子IL-2和IFN-γ誘導(dǎo)擴增。擴增第0、8、12、17天高倍鏡下看細胞長勢并計算細胞擴增倍數(shù),用流動檢測細胞技術(shù)檢測細胞表型為CD3-CD56+的細胞比例的變化,選擇NK占比最高的B組細胞成為實驗對象,分別測定培養(yǎng)第0天和第17天B組NK細胞表面高活性受體(NKp30、NKp46、NKG2D)的表達及細胞殺傷因子IFN-γ的分泌水平,培養(yǎng)第17天采用LDH釋放法及流式細胞術(shù)檢測B組NK細胞對惡性細胞K562和Raji細胞的細胞毒作用。結(jié)果:比較誘導(dǎo)培養(yǎng)第17天與培養(yǎng)第0天的CD3-CD56+細胞占比的變化情況,A組為[(15.19±12.22)%vs(16.34±10.51)%,p0.05],差異無統(tǒng)計學(xué)意義,B組為[(83.63±10.63)%vs(16.34±10.51)%,p0.05],C組為[(49.40±12.64)%vs(16.34±10.51)%,p0.05],B和C組培養(yǎng)第17天的CD3-CD56+細胞比例均較第0天顯著增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;第17天CD3-CD56+細胞比例B組比例顯著高于A和C組;三組NK細胞總數(shù)均大于109個;檢測B組培養(yǎng)第17天NK表面活化性受體NKp30和NKp46的表達比例均比第0天顯著增高,NKG2D比例變化無統(tǒng)計學(xué)意義;B組擴增的NK細胞對K562細胞和Raji細胞均具有殺傷能力,對K562細胞具有較高的殺傷能力。結(jié)論:制備血液制品后濾除掉的白細胞,安全可靠,無病原體污染,經(jīng)體外分離培養(yǎng)后,可得到比例高達90%的NK細胞,其總數(shù)大于109個,細胞殺傷能力增強,對惡性腫瘤細胞具有較高殺傷能力,達到臨床治療惡性疾病的應(yīng)用標準,濾除白細胞有希望成為臨床非自體NK細胞防治惡性腫瘤的一種細胞來源;NK細胞擴增過程中經(jīng)過密度梯度離心法分出外周血單個核細胞,再添加單克隆抗體和細胞因子誘導(dǎo)擴增,培養(yǎng)過程簡便,成本較低,適用于臨床大規(guī)模應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】：NK細胞 同種異體 血液制品 分離培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.51
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 常用縮寫詞中英文對照表9-11
• 前言11-14
• 1 材料與方法14-19
• 1.1 實驗材料14-15
• 1.2 實驗方法15-18
• 1.3 統(tǒng)計學(xué)分析18-19
• 2 結(jié)果19-26
• 2.1 培養(yǎng)前后NK細胞形態(tài)學(xué)變化19
• 2.2 NK細胞表型檢測和擴增情況19-21
• 2.3 NK細胞表面活化性受體表達率檢測21-22
• 2.4 NK細胞分泌IFN-γ水平22-23
• 2.5 NK細胞作用前后腫瘤細胞的形態(tài)變化23-24
• 2.6 NK細胞對不同腫瘤細胞殺傷作用比較24-26
• 3 討論26-29
• 4 結(jié)論29-30
• 參考文獻30-34
• 綜述34-48
• 參考文獻41-48
• 致謝48-49
• 在學(xué)期間承擔/參與的科研課題與研究成果49-50
• 個人簡歷50

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：746687