本文關(guān)鍵詞：NS-398逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細(xì)胞多藥耐藥作用研究

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【摘要】：結(jié)腸癌是嚴(yán)重威脅人類生命健康的常見病、多發(fā)病,且起病隱匿,早期診斷率低。近年來(lái),結(jié)腸癌的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì),已躍居惡性腫瘤死亡的第四位。目前,其治療方式仍是以手術(shù)、放療和化療為主,其中化療在其治療中占據(jù)重要地位。但是,在化療過(guò)程中腫瘤多藥耐藥(multi-drug resistance,MDR)頻發(fā),嚴(yán)重影響了化療效果甚至導(dǎo)致化療失敗,從而導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)或/和轉(zhuǎn)移,成為腫瘤化療中一個(gè)非常棘手的問題。因此,多藥耐藥是目前化療中需要克服的最大難點(diǎn)。本課題以結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞株HCT-8/FU為研究對(duì)象,觀察環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)選擇性抑制劑NS-398對(duì)癌細(xì)胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用及其對(duì)P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多藥耐藥相關(guān)蛋白(multi-drug resistance related protein,MRP)、COX-2的調(diào)控,以初步探討其可能作用機(jī)制。通過(guò)CCK-8法檢測(cè)NS-398對(duì)HCT-8/FU的毒性作用及對(duì)MDR的逆轉(zhuǎn)作用;通過(guò)Caspase 3活性檢測(cè)試劑盒和Hoechst33342染色觀察藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡情況;ELISA法檢測(cè)NS-398作用前后培養(yǎng)液中前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)含量的變化;免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)NS-398作用前后結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞P-gp、MRP和COX-2的表達(dá)變化。通過(guò)上述研究探討以下幾個(gè)問題:探討COX-2選擇性抑制劑NS-398、5-FU的劑量對(duì)耐藥細(xì)胞的毒性作用,并明確NS-398以何種有效劑量逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細(xì)胞的多藥耐藥性;COX-2選擇性抑制劑作為結(jié)腸癌等常見消化道惡性腫瘤化療耐藥逆轉(zhuǎn)劑,探討NS-398是否能夠抑制HCT-8/FU細(xì)胞膜表面的P-gp、MRP和細(xì)胞漿中COX-2的表達(dá)及是否能夠降低細(xì)胞液中PGE2的含量,以初步探討其逆轉(zhuǎn)耐藥的分子機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn),10、20μmol·L-1 NS-398作用于HCT-8/FU細(xì)胞24h后,HCT-8/FU細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率分別為5%、8%,差異具有顯著性(P0.01),對(duì)癌細(xì)胞均無(wú)明顯毒性,而與不同濃度5-FU合用后,HCT-8/FU細(xì)胞對(duì)5-FU敏感性增加,耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為2.831倍、7.629倍;通過(guò)Caspase 3活性檢測(cè)試劑盒測(cè)得20μmol·L-1 NS-398+320μg·mL-1 5-FU組Caspase 3活性增加百分比為386.11%,較320μg·mL-1 5-FU組的179.94%、20μmol·L-1 NS-398組的125.23%顯著增加(P0.05);Hoechst 33342染色結(jié)果同樣顯示兩藥聯(lián)用組HCT-8/FU細(xì)胞核呈致密濃染,細(xì)胞凋亡較單獨(dú)用藥組增加;10μmol·L-1、20μmol·L-1 NS-398作用HCT-8/FU細(xì)胞24h后,ELISA法測(cè)得HCT-8/FU細(xì)胞培養(yǎng)上清液中PGE2含量分別為189.437ng·L-1、151.282ng·L-1,較0μmol·L-1 NS-398時(shí)的321.659ng·L-1顯著下降(P0.05);免疫細(xì)胞化學(xué)法研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)20μmol·L-1NS-398作用24h后,HCT-8/FU細(xì)胞膜表面P-gp、MRP表達(dá)均由強(qiáng)陽(yáng)性變?yōu)槿蹶?yáng)性,HCT-8/FU細(xì)胞漿中COX-2表達(dá)由中陽(yáng)性變?yōu)槿蹶?yáng)性。研究結(jié)果表明,COX-2選擇性抑制劑NS-398對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞耐藥性有顯著的逆轉(zhuǎn)作用,能夠增強(qiáng)HCT-8/FU細(xì)胞對(duì)5-FU的敏感性,其逆轉(zhuǎn)機(jī)制可能是在抑制COX-2表達(dá)的同時(shí)抑制P-gp、MRP的表達(dá),減少化療藥物的外排,其次NS-398能夠抑制PGE2生成,從而恢復(fù)了機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng),使耐藥細(xì)胞重新恢復(fù)對(duì)化療藥物的敏感性,充分發(fā)揮化療藥物的臨床療效,將為我國(guó)結(jié)直腸癌患者提供一條新的治療途徑。
【關(guān)鍵詞】：多藥耐藥 結(jié)腸癌 P-糖蛋白 多藥耐藥相關(guān)蛋白 環(huán)氧化酶-2選擇性抑制劑
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.35
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-20
• 結(jié)果20-22
• 附圖22-25
• 附表25-27
• 討論27-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 綜述 消化道腫瘤耐藥機(jī)制研究37-55
• 參考文獻(xiàn)48-55
• 致謝55-56
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷56

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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本文編號(hào)：745888