發(fā)布時間：2017-08-26 07:27

  本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍調(diào)控Nrf2對非小細(xì)胞肺癌EGCG和放射敏感性的影響及機(jī)制研究

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【摘要】：第一部分:二甲雙胍增加非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549對EGCG(表沒食子兒茶素沒食子酸酯)的敏感性目的研究二甲雙胍對非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞表沒食子兒茶素沒食子酸脂(EGCG)敏感性的影響及其機(jī)制。方法首先利用MTT法和Western Blot法檢測不同非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株對EGCG的敏感性差異以及細(xì)胞株中HO-1表達(dá)水平的差異;采用MTT法檢測二甲雙胍能否增加EGCG對A549細(xì)胞生長抑制;采用細(xì)胞凋亡試劑盒和ROS檢測試劑盒明確二甲雙胍和EGCG對A549細(xì)胞凋亡和ROS水平的影響;分別采用Western Blot和免疫熒光檢測二甲雙胍和EGCG對HO-1蛋白及Nrf2蛋白水平的影響及對Nrf2在細(xì)胞內(nèi)亞分布的影響;通過分析基因芯片的結(jié)果和實時熒光定量PCR檢測25對肺癌和正常肺組織中HO-1的表達(dá)水平了解正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中HO-1表達(dá)的差異,并采用MTT法分析EGCG對A549和正常肺上皮BEAS-2B細(xì)胞的影響。采用裸鼠皮下接種A549細(xì)胞的方法建立A549細(xì)胞裸鼠移植瘤模型;二甲雙胍200μg/m L溶于飲用水給藥,EGCG 50mg/kg隔天腹腔注射給藥。采用游標(biāo)卡尺測量裸鼠移植瘤的大小。采用免疫組化檢測裸鼠移植瘤中Nrf2水平的變化。結(jié)果四種不同的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中HO-1表達(dá)水平存在差異,A549中HO-1表達(dá)最高,同時A549對EGCG最為耐受。二甲雙胍能抑制A549細(xì)胞中HO-1的蛋白水平,并且這種抑制效果存在濃度依賴性,0.4mmol/L的二甲雙胍對A549生長沒有抑制效果,但是能顯著抑制HO-1的蛋白水平。0.4mmol/L的二甲雙胍能顯著增加EGCG對A549細(xì)胞的生長抑制,凋亡和ROS的水平。二甲雙胍能通過抑制Nrf2的細(xì)胞核分布降低HO-1的水平。最后通過分析基因芯片的結(jié)果發(fā)現(xiàn)相比于肺癌組織,正常肺上皮中HO-1水平明顯增高,且正常肺上皮BEAS-2B相比于A549對EGCG更為耐受。二甲雙胍能增加EGCG對A549裸鼠移植瘤的抑制作用。EGCG能增加裸鼠移植瘤中Nrf2的水平,二甲雙胍抑制EGCG增加Nrf2的效應(yīng)。結(jié)論本研究表明,二甲雙胍能抑制A549細(xì)胞中HO-1的蛋白水平,并且能通過誘導(dǎo)凋亡和ROS的產(chǎn)生增加EGCG對A549生長的抑制。二甲雙胍能夠通過抑制細(xì)胞核內(nèi)的Nrf2水平減少HO-1的水平。此外,正常肺上皮和肺癌中HO-1的表達(dá)存在差異,因此對EGCG的敏感性不同。二甲雙胍聯(lián)合EGCG可以為臨床腫瘤治療提供了一個新方案。第二部分二甲雙胍對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞放射敏感性的影響和機(jī)制研究目的研究二甲雙胍對非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞放射敏感性的影響及其機(jī)制。方法采用克隆形成法檢測二甲雙胍和X射線對A549克隆形成的影響;采用PI法檢測二甲雙胍和X射線對A549細(xì)胞周期的影響;采用細(xì)胞凋亡試劑盒檢測二甲雙胍和X射線對A549細(xì)胞凋亡的影響;分別采用Western Blot和免疫熒光檢測二甲雙胍和X射線對HO-1蛋白及Nrf2蛋白水平的影響及對Nrf2在細(xì)胞內(nèi)亞分布的影響。結(jié)果二甲雙胍能抑制X射線對A549細(xì)胞克隆形成的抑制能力;二甲雙胍能抑制S期細(xì)胞的比例,同時減少X射線誘導(dǎo)的G2/M期阻滯;二甲雙胍能減少X射線導(dǎo)致的Nrf2細(xì)胞核轉(zhuǎn)位。結(jié)論本研究表明,二甲雙胍能增加X射線抑制A549細(xì)胞克隆形成的能力,并且能通過改變A549的細(xì)胞周期并減少X射線誘導(dǎo)的G2/M期阻滯。此外,二甲雙胍能夠通過抑制X射線誘導(dǎo)的Nrf2細(xì)胞核轉(zhuǎn)位抑制Nrf2信號通路。二甲雙胍聯(lián)合X射線可以為臨床腫瘤治療提供了一個新方案。
【關(guān)鍵詞】：二甲雙胍(metformin) 表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG) NF-E2相關(guān)因子2(Nrf2) 血紅素加氧酶-1(HO-1) 非小細(xì)胞肺癌(NSCLC) 二甲雙胍(metformin) NF-E2相關(guān)因子2(Nrf2) 非小細(xì)胞肺癌 放射敏感性
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-17
• 參考文獻(xiàn)12-17
• 第一部分二甲雙胍增加表沒食子兒茶素沒食子酸酯對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549 的敏感性17-50
• 一、材料17-22
• 二、方法22-29
• 三、結(jié) 果29-46
• 四、討論46-48
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 第二部分 二甲雙胍對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549 細(xì)胞放射敏感性的影響和機(jī)制研究50-63
• 一、材料與方法51-52
• 二、結(jié) 果52-59
• 三、討論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-63
• 本文研究結(jié)果及結(jié)論63
• 展望63-64
• 綜述 NRF2 介導(dǎo)的抗氧化反應(yīng)的分子機(jī)制64-92
• 參考文獻(xiàn)79-92
• 縮略詞表92-93
• 攻讀學(xué)位期間本人出版或公開發(fā)表的論著、論文93-94
• 致謝94-96

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 張瑜,鄒國林,彭少君;表沒食子兒茶素沒食子酸酯研究進(jìn)展[J];氨基酸和生物資源;1998年04期

2 鄒小農(nóng);;中國肺癌流行病學(xué)[J];中華腫瘤防治雜志;2007年12期

3 房娟;柏茂樹;申靜;伍治平;王熙才;;中藥抗肺癌實驗研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2011年10期

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本文編號：740455