本文關(guān)鍵詞：SPIO-ShRNA探針體外轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞的最佳濃度及外加磁場對(duì)其轉(zhuǎn)染率的影響

  更多相關(guān)文章： 分子探針 RNAi SKOV3細(xì)胞 最佳濃度 分子探針 磁場 SKOV3細(xì)胞 轉(zhuǎn)染

【摘要】：第一部分SPIO-ShRNA雙功能分子探針體外轉(zhuǎn)染卵SKOY3細(xì)胞的最佳濃度研究目的：不同質(zhì)量濃度的SPIO-ShRNA雙功能分子探針體外轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞,通過觀察細(xì)胞形態(tài)及EGFR表達(dá),尋找分子探針最佳轉(zhuǎn)染濃度。方法：將探針鐵濃度分別為5mg/L、15mg/L、30mg/L、45mg/L、 75mg/L、100mg/L轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞后,采用熒光顯微鏡觀察探針表達(dá)情況,透射電鏡及普魯士藍(lán)染色直接觀察細(xì)胞形態(tài)改變及細(xì)胞內(nèi)鐵顆粒的分布,應(yīng)用原子吸收光譜儀法測量細(xì)胞內(nèi)鐵含量,流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞凋亡情況,CCK-8檢測SKOV3細(xì)胞活性,western-blot法檢測SKOV3細(xì)胞內(nèi)EGFR蛋白的表達(dá),細(xì)胞內(nèi)T2*WI信號(hào)強(qiáng)度的改變應(yīng)用MR掃描檢測。結(jié)果：在一定鐵濃度范圍內(nèi)(5mg/L-30mg/L),細(xì)胞內(nèi)鐵含量隨探針濃度增加而逐漸增大,當(dāng)探針鐵濃度為45mg/L時(shí),探針進(jìn)入SKOV3細(xì)胞量達(dá)到飽和,標(biāo)記率接近100%,細(xì)胞活性下降,細(xì)胞存活率減低,細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)受到抑制(P均0.01),MR橫斷掃描圖像顯示T2*WI信號(hào)強(qiáng)度明顯降低(P0.01)。結(jié)論：SPIO-ShRNA分子探針轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞時(shí),最優(yōu)轉(zhuǎn)染濃度為45mg/L,特異性抑制卵巢癌細(xì)胞的表達(dá),并能被MR成像所檢測,初步證實(shí)具有診斷與特異性治療的雙重功效。第二部分外加磁場對(duì)SPIO-ShRNA雙功能分子探針轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞的影響目的：探討外加磁場對(duì)SPIO-ShRNA雙功能分子探針轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞的影響。方法：質(zhì)量濃度為45mg/L分子探針轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞時(shí),并將SKOV3細(xì)胞分為3組：未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞組(空白對(duì)照組),SPIO-ShRNA分子探針轉(zhuǎn)染的細(xì)胞組(陰性對(duì)照組),培養(yǎng)皿底部外加磁場的SPIO-ShRNA分子探針轉(zhuǎn)染的細(xì)胞組(實(shí)驗(yàn)組)。流式細(xì)胞儀檢測卵巢癌SKOV3細(xì)胞轉(zhuǎn)染率,CCK-8觀察細(xì)胞增殖及活性,熒光定量PCR以及western-blot分別檢測表皮生長因子受體(EGFR) mRNA及蛋白表達(dá)量,磁共振(MR)掃描檢測各組細(xì)胞內(nèi)T2*WI信號(hào)強(qiáng)度變化。結(jié)果：與陰性對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞轉(zhuǎn)染率[(79.20±3.31)%]顯著增加(P-0.001)；實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞活性(P=0.011)、EGFR蛋白及mRNA表達(dá)量均明顯降低(P均0.01)；實(shí)驗(yàn)組的MR圖像信號(hào)強(qiáng)度明顯降低(P=0.0004)。結(jié)論：外加磁場可以誘導(dǎo)SPIO-ShRNA分子探針進(jìn)入卵巢癌SKOV3細(xì)胞,從而提高其轉(zhuǎn)染率。
【關(guān)鍵詞】：分子探針 RNAi SKOV3細(xì)胞 最佳濃度 分子探針 磁場 SKOV3細(xì)胞 轉(zhuǎn)染
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31;R445.2
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-16
• 參考文獻(xiàn)14-16
• 第一部分 SP10-ShRNA雙功能分子探針體外轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞的最佳濃度研究16-32
• 1 材料與方法16-19
• 2 結(jié)果19-29
• 3 討論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-32
• 第二部分 外加磁場對(duì)SP10-shRNA分子探針轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞的影響32-41
• 1 材料及方法32-34
• 2 結(jié)果34-38
• 3 討論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-41
• 全文總結(jié)41-43
• 文獻(xiàn)綜述43-51
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 致謝51-52
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章目錄52
• 攻讀碩士學(xué)位期間參加會(huì)議52

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本文編號(hào)：733451