本文關(guān)鍵詞：SPIO-ShRNA探針體外轉(zhuǎn)染卵巢癌細胞的最佳濃度及外加磁場對其轉(zhuǎn)染率的影響

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【摘要】：第一部分SPIO-ShRNA雙功能分子探針體外轉(zhuǎn)染卵SKOY3細胞的最佳濃度研究目的：不同質(zhì)量濃度的SPIO-ShRNA雙功能分子探針體外轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細胞,通過觀察細胞形態(tài)及EGFR表達,尋找分子探針最佳轉(zhuǎn)染濃度。方法：將探針鐵濃度分別為5mg/L、15mg/L、30mg/L、45mg/L、 75mg/L、100mg/L轉(zhuǎn)染SKOV3細胞后,采用熒光顯微鏡觀察探針表達情況,透射電鏡及普魯士藍染色直接觀察細胞形態(tài)改變及細胞內(nèi)鐵顆粒的分布,應用原子吸收光譜儀法測量細胞內(nèi)鐵含量,流式細胞術(shù)觀察細胞凋亡情況,CCK-8檢測SKOV3細胞活性,western-blot法檢測SKOV3細胞內(nèi)EGFR蛋白的表達,細胞內(nèi)T2*WI信號強度的改變應用MR掃描檢測。結(jié)果：在一定鐵濃度范圍內(nèi)(5mg/L-30mg/L),細胞內(nèi)鐵含量隨探針濃度增加而逐漸增大,當探針鐵濃度為45mg/L時,探針進入SKOV3細胞量達到飽和,標記率接近100%,細胞活性下降,細胞存活率減低,細胞內(nèi)蛋白表達受到抑制(P均0.01),MR橫斷掃描圖像顯示T2*WI信號強度明顯降低(P0.01)。結(jié)論：SPIO-ShRNA分子探針轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細胞時,最優(yōu)轉(zhuǎn)染濃度為45mg/L,特異性抑制卵巢癌細胞的表達,并能被MR成像所檢測,初步證實具有診斷與特異性治療的雙重功效。第二部分外加磁場對SPIO-ShRNA雙功能分子探針轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細胞的影響目的：探討外加磁場對SPIO-ShRNA雙功能分子探針轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細胞的影響。方法：質(zhì)量濃度為45mg/L分子探針轉(zhuǎn)染卵巢癌細胞時,并將SKOV3細胞分為3組：未轉(zhuǎn)染的細胞組(空白對照組),SPIO-ShRNA分子探針轉(zhuǎn)染的細胞組(陰性對照組),培養(yǎng)皿底部外加磁場的SPIO-ShRNA分子探針轉(zhuǎn)染的細胞組(實驗組)。流式細胞儀檢測卵巢癌SKOV3細胞轉(zhuǎn)染率,CCK-8觀察細胞增殖及活性,熒光定量PCR以及western-blot分別檢測表皮生長因子受體(EGFR) mRNA及蛋白表達量,磁共振(MR)掃描檢測各組細胞內(nèi)T2*WI信號強度變化。結(jié)果：與陰性對照組比較,實驗組的細胞轉(zhuǎn)染率[(79.20±3.31)%]顯著增加(P-0.001)；實驗組的細胞活性(P=0.011)、EGFR蛋白及mRNA表達量均明顯降低(P均0.01)；實驗組的MR圖像信號強度明顯降低(P=0.0004)。結(jié)論：外加磁場可以誘導SPIO-ShRNA分子探針進入卵巢癌SKOV3細胞,從而提高其轉(zhuǎn)染率。
【關(guān)鍵詞】：分子探針 RNAi SKOV3細胞 最佳濃度 分子探針 磁場 SKOV3細胞 轉(zhuǎn)染
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31;R445.2
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-16
• 參考文獻14-16
• 第一部分 SP10-ShRNA雙功能分子探針體外轉(zhuǎn)染卵巢癌細胞的最佳濃度研究16-32
• 1 材料與方法16-19
• 2 結(jié)果19-29
• 3 討論29-30
• 參考文獻30-32
• 第二部分 外加磁場對SP10-shRNA分子探針轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細胞的影響32-41
• 1 材料及方法32-34
• 2 結(jié)果34-38
• 3 討論38-39
• 參考文獻39-41
• 全文總結(jié)41-43
• 文獻綜述43-51
• 參考文獻47-51
• 致謝51-52
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表文章目錄52
• 攻讀碩士學位期間參加會議52

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本文編號：733451