本文關鍵詞：姜黃素對5-FU誘導胃癌SGC-7901細胞凋亡作用的增強效應與機理研究

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【摘要】：目的1.探討姜黃素與5-FU聯(lián)合應用對體外培養(yǎng)人胃癌SGC-7901細胞生長的抑制作用;了解一定劑量姜黃素與較低劑量5FU聯(lián)用對SGC-7901細胞的生長抑制作用能否達到較高劑量5-FU單用的效果。2.探討姜黃素與5-FU聯(lián)合應用對體外培養(yǎng)人胃癌SGC-7901細胞的凋亡誘導作用;了解一定劑量姜黃素與較低劑量5FU聯(lián)用誘導SGC-7901細胞凋亡的作用能否達到較高劑量5-FU單用的效果。3.探討姜黃素與5-FU聯(lián)合應用對體外培養(yǎng)人胃癌SGC-7901細胞的周期影響作用;了解姜黃素與較低劑量5-FU聯(lián)用誘導SGC-7901細胞周期的影響能否達到較高劑量5-FU單用的效果。4.初步揭示姜黃素與5-FU聯(lián)用誘導胃癌SGC-7901細胞凋亡的的作用機制,為臨床上聯(lián)合應用姜黃素和5-FU治療胃癌、提供實驗依據。方法1.利用基于酶標儀的MTT方法檢測姜黃素(20μmol/L)和5-FU(10、20、40μmol/L)單獨或聯(lián)合應用對體外培養(yǎng)人胃癌SGC-7901細胞生長與增殖的影響。2.利用PI單染的流式細胞檢測法和基于AV-FITC/PI雙染的流式細胞檢測法分析姜黃素及其聯(lián)合5-FU對胃癌SGC-7901細胞凋亡和增殖周期的影響。3.利用基于酶標儀的比色法檢測姜黃素及其聯(lián)合5-FU對胃癌SGC-7901細胞凋亡蛋白酶Caspase-3和Caspase-8活性的影響。4.利用Western blot方法檢測姜黃素及其與5-FU聯(lián)用對人胃癌SGC-7901細胞凋亡相關蛋白Bcl-2和Bax表達的影響。結果1、姜黃素聯(lián)合5-FU對SGC-7901細胞增殖的抑制作用:與對照組相比,各實驗組能顯著抑制SGC-7901細胞增殖(*P0.05);姜黃素聯(lián)合低劑量5-FU的抑制率高于中劑量的5-FU單用(*P0.05);姜黃素聯(lián)合中劑量5-FU的抑制率高于高劑量的5-FU單用(*P0.05)。2、姜黃素聯(lián)合5-FU對SGC-7901細胞凋亡的影響:各實驗組SGC-7901細胞的凋亡率都顯著高于對照組(*P0.05);姜黃素聯(lián)合低劑量5-FU組細胞的凋亡率為39.3%,顯著高于中劑量5-FU單用組的26.4%(*P0.05);姜黃素聯(lián)合中劑量5-FU組細胞的凋亡率為43.9%,顯著高于高劑量5-FU單用組的31.9%(*P0.05)。3、姜黃素聯(lián)合5-FU對SGC-7901細胞增殖周期的影響:與對照組相比,姜黃素和5-FU均可引起SGC-7901細胞在S期的阻滯(*P0.05);姜黃素聯(lián)合低劑量5-FU組與中劑量5-FU單用組相比,處于S期的細胞比例由41.2%上升至42%(*P0.05);姜黃素聯(lián)合中劑量5-FU組與高劑量5-FU單用組相比,處于S期的細胞比例由的45.6%上升至53.8%(*P0.05)。4、姜黃素聯(lián)合5-FU對SGC-7901細胞凋亡蛋白酶Caspase-3和Caspase-8活性的影響:與對照組相比,姜黃素和5-FU組均可引起SGC-7901細胞Caspase-3、Caspase-8相對活性的顯著增加;姜黃素聯(lián)合低劑量5-FU組與中劑量5-FU單用組相比,Caspase-3的相對活性百分比由0.14倍(1.14±0.08)增加至0.18倍(1.18±0.09),Caspase-8的相對活性百分比由0.10倍(1.10±0.09)增加至0.13倍(1.13±0.07)(*P0.05);姜黃素聯(lián)合中劑量5-FU組與高劑量5-FU單用組相比,Caspase-3、Caspase-8相對活性分別由原來的0.35倍(1.35±0.03)、0.19倍(1.19±0.01)增加至0.4倍(1.40±0.03)、0.28倍(1.28±0.09)(*P0.05)。5、姜黃素聯(lián)合5-FU對SGC-7901細胞凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax表達的影響:與對照組相比,實驗組的Bax蛋白表達顯著增加,而(*P0.05);姜黃素聯(lián)合低劑量5-FU組與中劑量5-FU單用組相比,Bax蛋白表達顯著增加(相對值分別為2.56±0.09;1.33±0.01),而Bcl-2蛋白表達顯著降低(相對值分別為0.76±0.04;0.88±0.05);姜黃素聯(lián)合中劑量5-FU組與高劑量5-FU單用組相比,Bax蛋白表達顯著增加(相對值分別為3.27±0.06;2.19±0.05),而Bcl-2蛋白表達顯著降低(相對值分別為0.33±0.01;0.53±0.02)(*P0.05)。結論1、姜黃素與低劑量5-FU聯(lián)用對體外培養(yǎng)的胃癌SGC-7901細胞的的生長抑制和促凋亡作用能夠達到高劑量5-FU單用的效果;2、姜黃素與低劑量5-FU聯(lián)用對胃癌SGC-7901細胞的凋亡蛋白酶Caspase-3和Caspase-8相對活性的增強效應顯著高于高劑量5-FU單用的效果;3、姜黃素與低劑量5-FU聯(lián)用與高劑量5-FU單用對體外培養(yǎng)的胃癌SGC-7901細胞的Bax蛋白表達顯著增加、Bcl-2蛋白表達顯著降低。
【關鍵詞】：姜黃素 5-FU 胃癌 細胞凋亡 細胞周期 實驗研究
【學位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-13
• 中英文對照縮略詞表13-14
• 前言14-17
• 材料與方法17-34
• 1、藥物與試劑17
• 2、主要儀器17-18
• 3、主要試劑的配制18-20
• 4、細胞株20
• 5、主要研究方法20-34
• 5.1、人胃癌SGC-7901 細胞的培養(yǎng)20-21
• 5.2、對實驗用藥濃度的確立——基于酶標儀的MTT法21-23
• 5.3、對胃癌細胞生長抑制作用的檢測——基于酶標儀的MTT法23-24
• 5.4、胃癌細胞凋亡的檢測—基于AV-FITC/PI雙染的流式細胞檢測法24-26
• 5.5、胃癌細胞細胞周期的檢測—基于PI單染的流式細胞檢測法26-28
• 5.6、凋亡蛋白酶Caspase-3 與Caspase-8 活性檢測——基于酶標儀的比色法28
• 5.7、Bcl-2、Bax蛋白表達的檢測——基于Western blot法28-34
• 結果34-40
• 1. 姜黃素聯(lián)合 5-FU對SGC-7901 細胞增殖的抑制作用34-35
• 2. 姜黃素聯(lián)合 5-FU對SGC-7901 細胞凋亡的影響35-36
• 3. 姜黃素聯(lián)合 5-FU對SGC-7901 細胞周期的影響36-38
• 4. 姜黃素聯(lián)合5-FU對SGC-7901細胞Caspase-3、Caspase-8 活性的影響38-39
• 5. 姜黃素聯(lián)合 5-FU對SGC-7901 細胞Bcl-2、Bax蛋白表達的影響39-40
• 討論40-49
• 結語49-50
• 參考文獻50-55
• 附錄 綜述55-68
• 參考文獻62-68
• 在校期間論文發(fā)表情況68-69
• 致謝69

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