本文關(guān)鍵詞：GSK-3β對卵巢癌細胞SKOV3化療耐藥性的影響及其機制研究

  更多相關(guān)文章： 糖原合成酶激酶3β 卵巢癌 順鉑 紫杉醇 耐藥性

【摘要】：目的:卵巢癌的化療耐藥性是導致其臨床療效欠佳的重要因素之一,故明確其耐藥的分子機制,并且探尋有效逆轉(zhuǎn)卵巢癌耐藥的分子靶點以及研制耐藥逆轉(zhuǎn)劑成為目前卵巢癌研究的熱點和難點。糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase,GSK-3β)是近年來備受關(guān)注的腫瘤治療的分子靶點之一,因此本研究擬探討糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)對卵巢癌化療耐藥性的影響及其可能的機制,為其成為逆轉(zhuǎn)卵巢癌耐藥的分子靶點提供理論依據(jù)。方法:首先運用氯化鋰(Lithium chloride,LiCl)增加失活性GSK-3β即p-GSK-3β(ser9)的水平,構(gòu)建高表達p-GSK-3β(ser9)的卵巢癌細胞模型。隨后采用MTT法篩選合適的LiCl濃度和作用時間作為后續(xù)實驗LiCl的預處理,同樣用MTT法分別檢測順鉑和紫杉醇的半數(shù)抑制濃度(IC50)。接著使用流式細胞儀檢測LiCl處理前后SKOV3細胞內(nèi)p-GSK-3β(ser9)的表達量。最后聯(lián)合免疫熒光技術(shù)觀察LiCl預處理對卵巢癌細胞SKOV3內(nèi)p-GSK-3β(ser9)定位情況的影響。結(jié)果:依據(jù)MTT結(jié)果選擇LiCl 20 mmol/L處理6 h作為構(gòu)建高表達p-GSK-3β(ser9)的卵巢癌細胞模型的條件。LiCl預處理后,24、48、72 h SKOV3細胞順鉑的半數(shù)抑制濃度從(20.37±0.56)、(7.79±0.72)、(2.8±0.32)μg/ml增加至(27.57±0.81)(t=12.66,P=0.0002)、(12.15±1.00)(t=6.13,P=0.0036)、(5.84±0.64)(t=7.36,P=0.0019)μg/ml,差異均有統(tǒng)計學意義。LiCl 20mmol/L預處理后,24、48、72h SKOV3細胞紫杉醇的半數(shù)抑制濃度從(10.11±0.87)、(1.07±0.17)、(0.03±0.01)μg/ml增加至(12.54±0.88)(t=3.4,P=0.02)、(2.22±0.3)(t=5.78,P=0.0045)、(0.093±0.03)(t=3.45,P=0.026)μg/ml,差異均有統(tǒng)計學意義。流式的結(jié)果顯示,LiCl預處理后SKOV3細胞內(nèi)p-GSK-3β(ser9)的平均熒光強度由661.67±37.63增加到1191.33±30.37,失活性磷酸化GSK-3β的水平顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義。免疫熒光的結(jié)果則提示,LiCl預處理后SKOV3細胞內(nèi)p-GSK-3β(ser9)的水平有所上調(diào),并且細胞核內(nèi)的上調(diào)效應較為明顯。結(jié)論:LiCl預處理后GSK-3β失活性磷酸化水平的增加極有可能是導致卵巢癌細胞化療耐藥性的增強的原因之一,尤其是細胞核內(nèi)p-GSK-3β(ser9)水平的上調(diào)可能與卵巢癌細胞化療耐藥性的增強密切相關(guān),因此GSK-3β有望成為逆轉(zhuǎn)卵巢癌化療耐藥的分子靶點之一。
【關(guān)鍵詞】：糖原合成酶激酶3β 卵巢癌 順鉑 紫杉醇 耐藥性
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 英漢縮略詞對照表9-10
• 前言10-13
• 參考文獻11-13
• 1 材料與方法13-16
• 1.1 實驗材料13
• 1.2 主要實驗試劑13
• 1.3 主要實驗儀器13
• 1.4 實驗方法13-16
• 1.4.1 細胞培養(yǎng)13-14
• 1.4.2 MTT檢測LiCl對細胞增殖的影響14
• 1.4.3 MTT測定順鉑和紫杉醇的半數(shù)抑制濃度（IC50）14
• 1.4.4 流式細胞儀檢測磷酸化GSK-3β表達14-15
• 1.4.5 免疫熒光檢測GSK-3β定位15
• 1.4.6 統(tǒng)計學方法15-16
• 2 結(jié)果16-20
• 2.1 Li Cl對SKOV3細胞增殖活性的影響16
• 2.2 Li Cl對SKOV3細胞順鉑和紫杉醇半數(shù)抑制濃度（IC50）的影響16-17
• 2.3 SKOV3細胞內(nèi)磷酸化GSK-3β表達量17-18
• 2.4 SKOV3細胞內(nèi)磷酸化GSK-3β的定位18-20
• 3 討論20-23
• 3.1 卵巢癌耐藥的現(xiàn)狀及特點20
• 3.2 糖原合酶激酶 3β(GSK-3β)在腫瘤耐藥中的作用20-22
• 3.3 GSK-3β對卵巢癌增殖和耐藥性的影響及可能機制22-23
• 4 結(jié)論23-24
• 4.1 LiCl可以有效構(gòu)建卵巢癌細胞模型23-24
• 4.2 GSK-3β失活會增強卵巢癌細胞化療耐藥性24
• 4.3 失活性GSK-3β在卵巢癌細胞內(nèi)定位的改變可能增強卵巢癌細胞耐藥性參考文獻24
• 參考文獻24-27
• 綜述27-39
• 參考文獻35-39
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文目錄39-40
• 致謝40

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本文編號：732589