發(fā)布時間：2017-08-24 17:05

  本文關鍵詞：siRNA沉默Wip1基因?qū)θ四懝馨㏎BC939細胞的影響

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【摘要】：背景和目的膽管癌(Cholangiocarcinoma, CCA)是一種起源于膽管上皮細胞的惡性程度極高的消化道腫瘤,在人類消化道惡性腫瘤總病例中約占2%-3%左右。1840年Durand Fardel首次報道膽管癌,是肝臟和膽道系統(tǒng)惡性腫瘤中較為常見的一種,約占肝膽系腫瘤的10%-15%。膽管癌在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率約為1.2/10萬,但近十年內(nèi)膽管癌發(fā)病率趨勢呈現(xiàn)為逐年升高,在我國其發(fā)病率上升速度是每年遞增5%,是上升速度最快的消化道腫瘤。由于膽管癌特殊的解剖位置及其向周圍組織、血管、神經(jīng)浸潤的特殊的病理特征,且膽管癌患者缺乏早期特異性的臨床表現(xiàn)和有效的診斷手段,以至于很多病人就診時多數(shù)已處于癌癥的中晚期,即已發(fā)生微轉移、淋巴結轉移或遠處轉移。盡管近年來外科手術、化療、放療等治療手段在膽管癌治療中取得了較大的進步,但其仍是難以達到腫瘤根治的效果。切除率低,對常規(guī)放化療手段不敏感,病死率高是膽管癌目前治療的現(xiàn)狀,世界范圍內(nèi)膽管癌術后患者3年生存率僅為35%至50%,5年生存率不到10%,而我國膽管癌術后5年生存率僅為5%左右�，F(xiàn)膽管癌治療是以手術切除為首選的外科綜合治療,但僅手術切除無法達到根治的效果,而且很多完成手術的病人在術后2年內(nèi)復發(fā),這些均嚴重制約手術效果和病人預后。因此,研究膽管癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉移的機制,了解膽管癌進展過程中可能的分子步驟,找尋臨床膽管癌病人的治療、預后分析和適宜靶點十分必要。野生型p53誘導的蛋白磷酸酶1(wild type p53 induced protein phosphatases, Wip1)是新近發(fā)現(xiàn)的一種絲／蘇氨酸酶活性的蛋白磷酸酶,為原癌基因的一種,位于人染色體17q22／q24區(qū)域,它在多種腫瘤中存在高表達,能夠促進腫瘤生長,并且與患者預后密切相關。但尚未有關于Wip1基因在人膽管癌細胞中表達的研究。RNA干擾(RNA interference,RNAi)是生物界普遍存在的一種抵御外來基因和病毒感染的保守進化機制,是一種轉錄后基因調(diào)控的研究方法。其作用機制是細胞內(nèi)mRNA與siRNA特異結合、由RISC介導使靶向結合mRNA的降解,阻止其翻譯作用,從而導致基因沉默,具有極高的有效性和靶向性,是在mRNA水平上引起基因沉默的機制。因RNA干擾具有快速、高效、高特異性等優(yōu)點,該技術已經(jīng)廣泛地應用于基因功能鑒定等生命科學的各個領域。本研究設計并合成能沉默Wip1基因表達的siRNA,轉染到人膽管癌QBC939細胞株,檢測轉染后其對人膽管癌QBC939細胞生物學行為的影響。方法設計并合成能使Wip1基因沉默的siRNA,通過脂質(zhì)體介導并轉染人膽管癌QBC939細胞,該實驗分為siRNA轉染組和空白對照組。用Western blot和qRT-PCR分別檢測siRNA轉染組和空白對照組膽管癌QBC939細胞中Wip1基因的蛋白表達水平及mRNA表達水平,用CCK-8法檢測siRNA轉染組和空白對照組膽管癌QBC939細胞增殖的變化,用劃痕實驗檢測siRNA轉染組和空白對照組膽管癌QBC939細胞遷移能力的改變,用Transwell實驗檢測siRNA轉染組和空白對照組膽管癌QBC939侵襲、遷移能力的改變。應用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行分析,兩組間比較用t檢驗,以P0.05為差異有統(tǒng)計學意義,P0.01為差異非常顯著。結果將沉默Wip1基因的siRNA轉染入膽管癌QBC939細胞后,與空白對照組相比,Wipl的蛋白和]mRNA表達水平明顯降低(P0.05)；CCK-8檢測結果顯示轉染后第三天細胞增殖能力較空白對照組降低(P0.05),轉染后第四天細胞增殖能力較空白對照組顯著降低(P0.01)；遷移及侵襲細胞數(shù)均明顯少于空白對照組(P0.05)。結論靶向設計的siRNA經(jīng)細胞轉染后能有效降低膽管癌QBC939細胞Wip1蛋白和mRNA的表達水平,抑制膽管癌QBC939細胞的增殖并降低細胞的遷移及侵襲力。
【關鍵詞】：膽管癌 Wip1基因 siRNA 細胞生物學特性
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.8
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 英文縮寫及符號說明12-14
• 前言14-17
• 材料與方法17-31
• 結果31-35
• 討論35-40
• 結論40-41
• 參考文獻41-46
• 致謝46-47
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學術論文47-48
• 學位論文評閱及答辯情況表48

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1 孟興凱,楊成旺;膽管癌的診斷及治療進展[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學院學報;2002年02期

2 李蓉,蔡中起,張靜;膽管癌診治進展[J];臨床肝膽病雜志;2002年04期

3 黎靖,馮春紅,張旭,雷正明;膽管癌病理誤診一例[J];中華肝膽外科雜志;2003年09期

4 吳高松,羅先文,吳劍宏,鄒聲泉,裘法祖;先天性膽總管囊腫膽汁對膽管癌細胞系的作用[J];中華消化雜志;2004年01期

5 孔琦,黃強;膽管癌分子生物學研究進展[J];肝膽外科雜志;2004年05期

6 彭創(chuàng);湯恢煥;;膽管癌的分子生物學進展[J];國際病理科學與臨床雜志;2007年02期

7 李惠珍;Aqeel ahmed;傅華群;;膽管癌的早期診斷[J];江西醫(yī)藥;2008年12期

8 王健東;全志偉;;膽管癌基礎研究現(xiàn)狀[J];中國實用外科雜志;2008年04期

9 鄒聲泉;鄭順貞;;膽管癌分子生物學的研究現(xiàn)狀及其意義[J];腹部外科;2008年02期

10 顧勁揚;仇毓東;周建新;丁義濤;;膽管癌發(fā)病機制及治療進展[J];肝膽外科雜志;2010年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周娉婷;房萌;高春芳;;膽管癌N糖標志物發(fā)現(xiàn)及其機制研究[A];第一次全國中西醫(yī)結合檢驗醫(yī)學學術會議暨中國中西醫(yī)結合學會檢驗醫(yī)學專業(yè)委員會成立大會論文匯編[C];2014年

2 張豐深;馬寬生;何振平;董家鴻;;細胞凋亡相關基因與膽管癌臨床病理的關系[A];2001'全國腫瘤外科學術會議論文匯編[C];2001年

3 張豐深;馬寬生;何振平;董家鴻;;CCK、Gastrin對bcl-2基因家族的調(diào)節(jié)作用[A];2001'全國腫瘤外科學術會議論文匯編[C];2001年

4 余建華;崔云甫;;膽管癌發(fā)病機制研究進展[A];中國抗癌協(xié)會膽道腫瘤專業(yè)委員會成立大會暨第一屆全國膽道腫瘤學術會議論文集[C];2009年

5 張豐深;馬寬生;何振平;董家鴻;;CCK,Gastrin對凋亡基因的調(diào)節(jié)作用[A];第七屆全國腫瘤生物治療學術會議論文集[C];2001年

6 馬寬生;張豐深;何振平;董家鴻;;CCK,Gastrin對膽管癌細胞凋亡的作用[A];第七屆全國腫瘤生物治療學術會議論文集[C];2001年

7 韓鵬;邱乒乒;戴燕燕;練惠輝;李文崗;陳清西;;河蜆活性物質(zhì)對肝癌、膽管癌細胞生長的影響[A];華東六省一市生物化學與分子生物學會2008年學術交流會論文摘要匯編[C];2008年

8 李薇;曾祥元;李昆;;膽管癌QBC939細胞株對人臍靜脈內(nèi)皮細胞VEGF和b-FGF表達的影響[A];中國微循環(huán)學會2014年全國學術會議大會匯編[C];2014年

9 張昆松;梁力建;殷曉煜;;Wnt通路相關因子在膽管癌細胞系中的表達及其siRNA干擾實驗[A];中國抗癌協(xié)會膽道腫瘤專業(yè)委員會成立大會暨第一屆全國膽道腫瘤學術會議論文集[C];2009年

10 馬寬生;張豐深;何振平;董家鴻;;CCK、Gastrin在beauvericin誘導膽管癌細胞凋亡中的作用[A];2001'全國腫瘤外科學術會議論文匯編[C];2001年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陳漢橋;大連醫(yī)科大學附屬一院膽管癌基因治療研究獲重要進展[N];中國醫(yī)藥報;2006年

2 陳漢橋;基因治膽管癌研究有進展[N];健康報;2006年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 韓鵬;膽管癌藥物的篩選及作用機理的研究[D];廈門大學;2009年

2 陳紹勤;膽管癌蛋白組學研究[D];華中科技大學;2009年

3 錢振宇;膽管癌與乙型和丙型肝炎病毒感染的相關性研究[D];復旦大學;2003年

4 塔西烏（Elh.Issoufou Mahaman Tassiou）;膽管癌術前診斷技術研究[D];復旦大學;2003年

5 鄭秀海;膽囊收縮素在膽管癌神經(jīng)周圍浸潤轉移中的作用及其分子機制[D];第三軍醫(yī)大學;2005年

6 羅劍;重組腺病毒載體介導的人P27～（kip1）基因治療膽管癌的實驗性研究[D];華中科技大學;2006年

7 任延剛;不可切除的膽管癌非外科治療療效系統(tǒng)評價[D];中國醫(yī)科大學;2007年

8 司麗娟;膽管癌術前定性診斷方法的研究[D];吉林大學;2008年

9 舒藝;膽管癌差異甲基化位點初步篩選的研究[D];華中科技大學;2011年

10 曹智剛;溫熱治療膽管癌的相關實驗研究[D];中國醫(yī)科大學;2006年

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1 董陽民;SENP1對膽管癌細胞增殖與徖移能力的影響以及SENP1在膽管癌標本中的表達情況[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 樸鶴云;矢車菊素-3-葡萄糖苷對人膽管癌QBC939細胞的影響[D];延邊大學;2015年

3 李志鋒;骨橋蛋白與CD44v6在膽管癌中的表達及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學;2015年

4 黃朝君;γ-氨基丁酸在膽管癌細胞中的作用機制及相關效應基因的探討[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

5 薛立新;Hedgehog信號轉導通路在膽管癌中作用機制初步研究[D];瀘州醫(yī)學院;2011年

6 趙殿堂;siRNA沉默Wip1基因?qū)θ四懝馨㏎BC939細胞的影響[D];山東大學;2015年

7 張磊;銅綠假單胞菌制劑抗膽管癌作用的實驗研究[D];昆明醫(yī)學院;2010年

8 閻晶璐;膽管癌的危險因素與發(fā)病機理研究現(xiàn)狀綜述[D];北京中醫(yī)藥大學;2011年

9 張磊;高效液相色譜—質(zhì)譜法在篩選膽管癌腫瘤標志物中的應用[D];重慶醫(yī)科大學;2011年

10 羅英;層粘連蛋白極其受體在膽管癌中的表達與侵襲、轉移和預后的相關性研究[D];軍醫(yī)進修學院;2001年

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