本文關(guān)鍵詞：siRNA沉默Wip1基因?qū)θ四懝馨㏎BC939細(xì)胞的影響

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【摘要】：背景和目的膽管癌(Cholangiocarcinoma, CCA)是一種起源于膽管上皮細(xì)胞的惡性程度極高的消化道腫瘤,在人類消化道惡性腫瘤總病例中約占2%-3%左右。1840年Durand Fardel首次報道膽管癌,是肝臟和膽道系統(tǒng)惡性腫瘤中較為常見的一種,約占肝膽系腫瘤的10%-15%。膽管癌在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率約為1.2/10萬,但近十年內(nèi)膽管癌發(fā)病率趨勢呈現(xiàn)為逐年升高,在我國其發(fā)病率上升速度是每年遞增5%,是上升速度最快的消化道腫瘤。由于膽管癌特殊的解剖位置及其向周圍組織、血管、神經(jīng)浸潤的特殊的病理特征,且膽管癌患者缺乏早期特異性的臨床表現(xiàn)和有效的診斷手段,以至于很多病人就診時多數(shù)已處于癌癥的中晚期,即已發(fā)生微轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。盡管近年來外科手術(shù)、化療、放療等治療手段在膽管癌治療中取得了較大的進(jìn)步,但其仍是難以達(dá)到腫瘤根治的效果。切除率低,對常規(guī)放化療手段不敏感,病死率高是膽管癌目前治療的現(xiàn)狀,世界范圍內(nèi)膽管癌術(shù)后患者3年生存率僅為35%至50%,5年生存率不到10%,而我國膽管癌術(shù)后5年生存率僅為5%左右�，F(xiàn)膽管癌治療是以手術(shù)切除為首選的外科綜合治療,但僅手術(shù)切除無法達(dá)到根治的效果,而且很多完成手術(shù)的病人在術(shù)后2年內(nèi)復(fù)發(fā),這些均嚴(yán)重制約手術(shù)效果和病人預(yù)后。因此,研究膽管癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制,了解膽管癌進(jìn)展過程中可能的分子步驟,找尋臨床膽管癌病人的治療、預(yù)后分析和適宜靶點十分必要。野生型p53誘導(dǎo)的蛋白磷酸酶1(wild type p53 induced protein phosphatases, Wip1)是新近發(fā)現(xiàn)的一種絲／蘇氨酸酶活性的蛋白磷酸酶,為原癌基因的一種,位于人染色體17q22／q24區(qū)域,它在多種腫瘤中存在高表達(dá),能夠促進(jìn)腫瘤生長,并且與患者預(yù)后密切相關(guān)。但尚未有關(guān)于Wip1基因在人膽管癌細(xì)胞中表達(dá)的研究。RNA干擾(RNA interference,RNAi)是生物界普遍存在的一種抵御外來基因和病毒感染的保守進(jìn)化機(jī)制,是一種轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控的研究方法。其作用機(jī)制是細(xì)胞內(nèi)mRNA與siRNA特異結(jié)合、由RISC介導(dǎo)使靶向結(jié)合mRNA的降解,阻止其翻譯作用,從而導(dǎo)致基因沉默,具有極高的有效性和靶向性,是在mRNA水平上引起基因沉默的機(jī)制。因RNA干擾具有快速、高效、高特異性等優(yōu)點,該技術(shù)已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于基因功能鑒定等生命科學(xué)的各個領(lǐng)域。本研究設(shè)計并合成能沉默Wip1基因表達(dá)的siRNA,轉(zhuǎn)染到人膽管癌QBC939細(xì)胞株,檢測轉(zhuǎn)染后其對人膽管癌QBC939細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法設(shè)計并合成能使Wip1基因沉默的siRNA,通過脂質(zhì)體介導(dǎo)并轉(zhuǎn)染人膽管癌QBC939細(xì)胞,該實驗分為siRNA轉(zhuǎn)染組和空白對照組。用Western blot和qRT-PCR分別檢測siRNA轉(zhuǎn)染組和空白對照組膽管癌QBC939細(xì)胞中Wip1基因的蛋白表達(dá)水平及mRNA表達(dá)水平,用CCK-8法檢測siRNA轉(zhuǎn)染組和空白對照組膽管癌QBC939細(xì)胞增殖的變化,用劃痕實驗檢測siRNA轉(zhuǎn)染組和空白對照組膽管癌QBC939細(xì)胞遷移能力的改變,用Transwell實驗檢測siRNA轉(zhuǎn)染組和空白對照組膽管癌QBC939侵襲、遷移能力的改變。應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析,兩組間比較用t檢驗,以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.01為差異非常顯著。結(jié)果將沉默Wip1基因的siRNA轉(zhuǎn)染入膽管癌QBC939細(xì)胞后,與空白對照組相比,Wipl的蛋白和]mRNA表達(dá)水平明顯降低(P0.05)；CCK-8檢測結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后第三天細(xì)胞增殖能力較空白對照組降低(P0.05),轉(zhuǎn)染后第四天細(xì)胞增殖能力較空白對照組顯著降低(P0.01)；遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)均明顯少于空白對照組(P0.05)。結(jié)論靶向設(shè)計的siRNA經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染后能有效降低膽管癌QBC939細(xì)胞Wip1蛋白和mRNA的表達(dá)水平,抑制膽管癌QBC939細(xì)胞的增殖并降低細(xì)胞的遷移及侵襲力。
【關(guān)鍵詞】：膽管癌 Wip1基因 siRNA 細(xì)胞生物學(xué)特性
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.8
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 英文縮寫及符號說明12-14
• 前言14-17
• 材料與方法17-31
• 結(jié)果31-35
• 討論35-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 致謝46-47
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文47-48
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表48

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