本文關(guān)鍵詞：重樓活性單體PP-26對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞的增殖抑制作用及其機(jī)制

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【摘要】：研究目的:研究重樓活性單體PP-26對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)及其機(jī)制,為重樓活性單體PP-26的臨床抗腫瘤應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)支持。研究方法:1.噻唑藍(lán)法(MTT法)檢測(cè)不同濃度的重樓活性單體PP-26對(duì)人肝癌HepG2、胰腺癌SW1990、前列腺癌LNCaP及人正常肝L02細(xì)胞的增殖抑制作用,以及采用IC20濃度的PP-26聯(lián)合不同濃度的氟尿嘧啶(5-FU)對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞的藥物敏感性檢測(cè);2.Hoechst 33258染色法檢測(cè)重樓活性單體PP-26對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)的改變;Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測(cè)重樓活性單體PP-26對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞凋亡的影響;3.碘化丙錠(PI)單染流式細(xì)胞儀檢測(cè)重樓活性單體PP-26對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞周期的影響;4.蛋白免疫印跡法(Western blotting法)檢測(cè)重樓活性單體PP-26對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白、Bcl-2家族蛋白和細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響,以及對(duì)Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響。研究結(jié)果:1.MTT法檢測(cè)顯示,重樓活性單體PP-26能顯著抑制肝癌HepG2、胰腺癌SW1990及前列腺癌LNCaP細(xì)胞增殖,并呈劑量-效應(yīng)關(guān)系,而對(duì)人正常肝L02細(xì)胞的毒性相對(duì)較小。不同濃度的PP-26作用于肝癌HepG2、胰腺癌SW1990及前列腺癌LNCaP細(xì)胞24 h的IC50分別為:6.94±0.72,2.53±0.14,4.20±0.37μmol/L;不同濃度的PP-26作用于人正常肝L02、肝癌Hep G2、胰腺癌SW1990及前列腺癌LNCaP細(xì)胞48 h的IC50分別為:6.98±0.99,1.91±0.45,1.90±0.07,2.45±0.11μmol/L;不同濃度的PP-26作用于人正常肝L02、肝癌HepG2、胰腺癌SW1990及前列腺癌LNCaP細(xì)胞72 h的IC50分別為:4.22±0.23,1.54±0.06,1.57±0.09,2.01±0.07μmol/L,可見(jiàn)PP-26對(duì)人正常肝L02細(xì)胞的細(xì)胞毒作用低于癌細(xì)胞;以IC20濃度的PP-26聯(lián)合不同濃度的5-FU顯著增強(qiáng)對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞的增殖抑制作用,提高HepG2細(xì)胞對(duì)5-FU的敏感性。2.Hochest33258染色檢測(cè)顯示,3.2μmol/L及6.4μmol/L的重樓活性單體PP-26作用于HepG2細(xì)胞24 h后,熒光顯微鏡觀察細(xì)胞核出現(xiàn)固縮、邊聚、碎裂以及凋亡小體形成等凋亡的形態(tài)學(xué)改變;Annexin V-FITC/PI雙染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,HepG2細(xì)胞總凋亡率隨著PP-26濃度的增加而增加,呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。3.碘化丙啶(PI)單染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示,隨著作用于肝癌HepG2細(xì)胞的重樓活性單體PP-26濃度的增加,G2期細(xì)胞的比例逐漸增加,說(shuō)明PP-26可以使肝癌HepG2細(xì)胞阻滯于G2期;同時(shí)Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示,細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin B1及細(xì)胞周期依賴(lài)蛋白激酶-4(CDK4)表達(dá)水平隨著PP-26作用濃度的增加而下降,而Myt1、p21、p-cdc2(Tyr15)表達(dá)增高,說(shuō)明細(xì)胞周期阻滯于G2期。4.Western blotting結(jié)果顯示,在肝癌HepG2細(xì)胞中,凋亡相關(guān)蛋白caspase 9、caspase 3、PARP隨著PP-26濃度的增加表達(dá)下調(diào),促凋亡蛋白Bax的表達(dá)上調(diào),而抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1表達(dá)下調(diào);同時(shí),隨著PP-26作用濃度的增加,磷酸化的Akt(p-Akt)的表達(dá)下調(diào)而總Akt表達(dá)變化不明顯,Akt下游的GSK3β和Foxo3磷酸化水平也下降,說(shuō)明重樓活性單體PP-26通過(guò)抑制Akt信號(hào)通路激活細(xì)胞線粒體凋亡途徑而誘導(dǎo)Hep G2細(xì)胞凋亡。結(jié)論:1.重樓活性單體PP-26可在體外顯著抑制肝癌HepG2、胰腺癌SW1990、前列腺癌LNCaP細(xì)胞增殖,而對(duì)正常人肝LO2細(xì)胞的增殖抑制作用不明顯,并能夠提高肝癌HepG2細(xì)胞對(duì)氟尿嘧啶的敏感性。2.重樓活性單體PP-26誘導(dǎo)肝癌HepG2細(xì)胞周期阻滯于G2期。3.重樓活性單體PP-26可能通過(guò)抑制Akt信號(hào)通路,激活細(xì)胞線粒體凋亡途徑而誘導(dǎo)肝癌HepG2細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：重樓 肝癌 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞周期 Akt
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-9
• 前言9-25
• 實(shí)驗(yàn)材料和方法25-37
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-47
• 討論47-51
• 結(jié)論51-52
• 展望及不足52-53
• 縮略詞表53-54
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 發(fā)表文章58-59
• 致謝59

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本文編號(hào)：732367