本文關(guān)鍵詞：重樓活性單體PP-26對肝癌HepG2細胞的增殖抑制作用及其機制

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【摘要】：研究目的:研究重樓活性單體PP-26對肝癌HepG2細胞的增殖抑制效應及其機制,為重樓活性單體PP-26的臨床抗腫瘤應用提供實驗室數(shù)據(jù)支持。研究方法:1.噻唑藍法(MTT法)檢測不同濃度的重樓活性單體PP-26對人肝癌HepG2、胰腺癌SW1990、前列腺癌LNCaP及人正常肝L02細胞的增殖抑制作用,以及采用IC20濃度的PP-26聯(lián)合不同濃度的氟尿嘧啶(5-FU)對肝癌HepG2細胞的藥物敏感性檢測;2.Hoechst 33258染色法檢測重樓活性單體PP-26對肝癌HepG2細胞凋亡的形態(tài)學的改變;Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測重樓活性單體PP-26對肝癌HepG2細胞凋亡的影響;3.碘化丙錠(PI)單染流式細胞儀檢測重樓活性單體PP-26對肝癌HepG2細胞周期的影響;4.蛋白免疫印跡法(Western blotting法)檢測重樓活性單體PP-26對肝癌HepG2細胞凋亡相關(guān)蛋白、Bcl-2家族蛋白和細胞周期相關(guān)蛋白表達水平的影響,以及對Akt信號通路相關(guān)蛋白表達水平的影響。研究結(jié)果:1.MTT法檢測顯示,重樓活性單體PP-26能顯著抑制肝癌HepG2、胰腺癌SW1990及前列腺癌LNCaP細胞增殖,并呈劑量-效應關(guān)系,而對人正常肝L02細胞的毒性相對較小。不同濃度的PP-26作用于肝癌HepG2、胰腺癌SW1990及前列腺癌LNCaP細胞24 h的IC50分別為:6.94±0.72,2.53±0.14,4.20±0.37μmol/L;不同濃度的PP-26作用于人正常肝L02、肝癌Hep G2、胰腺癌SW1990及前列腺癌LNCaP細胞48 h的IC50分別為:6.98±0.99,1.91±0.45,1.90±0.07,2.45±0.11μmol/L;不同濃度的PP-26作用于人正常肝L02、肝癌HepG2、胰腺癌SW1990及前列腺癌LNCaP細胞72 h的IC50分別為:4.22±0.23,1.54±0.06,1.57±0.09,2.01±0.07μmol/L,可見PP-26對人正常肝L02細胞的細胞毒作用低于癌細胞;以IC20濃度的PP-26聯(lián)合不同濃度的5-FU顯著增強對肝癌HepG2細胞的增殖抑制作用,提高HepG2細胞對5-FU的敏感性。2.Hochest33258染色檢測顯示,3.2μmol/L及6.4μmol/L的重樓活性單體PP-26作用于HepG2細胞24 h后,熒光顯微鏡觀察細胞核出現(xiàn)固縮、邊聚、碎裂以及凋亡小體形成等凋亡的形態(tài)學改變;Annexin V-FITC/PI雙染色流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示,HepG2細胞總凋亡率隨著PP-26濃度的增加而增加,呈劑量-效應關(guān)系。3.碘化丙啶(PI)單染流式細胞術(shù)檢測顯示,隨著作用于肝癌HepG2細胞的重樓活性單體PP-26濃度的增加,G2期細胞的比例逐漸增加,說明PP-26可以使肝癌HepG2細胞阻滯于G2期;同時Western blotting檢測結(jié)果顯示,細胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin B1及細胞周期依賴蛋白激酶-4(CDK4)表達水平隨著PP-26作用濃度的增加而下降,而Myt1、p21、p-cdc2(Tyr15)表達增高,說明細胞周期阻滯于G2期。4.Western blotting結(jié)果顯示,在肝癌HepG2細胞中,凋亡相關(guān)蛋白caspase 9、caspase 3、PARP隨著PP-26濃度的增加表達下調(diào),促凋亡蛋白Bax的表達上調(diào),而抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1表達下調(diào);同時,隨著PP-26作用濃度的增加,磷酸化的Akt(p-Akt)的表達下調(diào)而總Akt表達變化不明顯,Akt下游的GSK3β和Foxo3磷酸化水平也下降,說明重樓活性單體PP-26通過抑制Akt信號通路激活細胞線粒體凋亡途徑而誘導Hep G2細胞凋亡。結(jié)論:1.重樓活性單體PP-26可在體外顯著抑制肝癌HepG2、胰腺癌SW1990、前列腺癌LNCaP細胞增殖,而對正常人肝LO2細胞的增殖抑制作用不明顯,并能夠提高肝癌HepG2細胞對氟尿嘧啶的敏感性。2.重樓活性單體PP-26誘導肝癌HepG2細胞周期阻滯于G2期。3.重樓活性單體PP-26可能通過抑制Akt信號通路,激活細胞線粒體凋亡途徑而誘導肝癌HepG2細胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：重樓 肝癌 細胞凋亡 細胞周期 Akt
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-9
• 前言9-25
• 實驗材料和方法25-37
• 實驗結(jié)果37-47
• 討論47-51
• 結(jié)論51-52
• 展望及不足52-53
• 縮略詞表53-54
• 參考文獻54-58
• 發(fā)表文章58-59
• 致謝59

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本文編號：732367