本文關(guān)鍵詞：Rad51C在非小細(xì)胞肺癌中的臨床表達(dá)意義及其對細(xì)胞放化療敏感性影響的機(jī)制研究

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【摘要】：目的:Rad51C蛋白參與DNA損傷修復(fù)(DNA damage response,DDR)及維持基因組穩(wěn)定性,并在在同源重組(homlogous recombination,HR)機(jī)制中承擔(dān)重要角色,參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。然而,Rad51C在肺癌中的臨床及生物學(xué)意義仍不是很明確,本研究探求Rad51C表達(dá)是否影響了接受放/化療的非小細(xì)胞肺癌病人的治療療效及其對人肺癌A549細(xì)胞放療/化療敏感性的研究。方法:首先,通過免疫組化的方法檢測Rad51C蛋白在95例非小細(xì)胞肺癌組織及32例癌旁正常肺組織的表達(dá)狀況,探討Rad51C基因在肺癌的發(fā)生、發(fā)展中的作用及其臨床預(yù)后意義。進(jìn)一步,構(gòu)建Rad51C基因穩(wěn)定干擾的A549細(xì)胞株(sh Rad51C組)和亂序目標(biāo)RNA穩(wěn)定存在的A549細(xì)胞株(Control組),而未經(jīng)任何處理的正常A549細(xì)胞作為陰性對照組(Blank組),蛋白印跡技術(shù)檢測實(shí)驗(yàn)組間Rad51C蛋白的表達(dá)并同時(shí)應(yīng)用MTT法、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測基因干擾前后細(xì)胞生長增殖是否受影響。其次,給予順鉑化療藥物或電離輻射干預(yù)后,通過MTT法、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)及免疫熒光等細(xì)胞實(shí)驗(yàn)探索Rad51C對肺癌細(xì)胞治療反應(yīng)的影響。結(jié)果:Rad51C蛋白的陽性表達(dá)在非小細(xì)胞肺癌組織和癌旁正常肺組織間存在顯著性差異(P0.01)。Kaplan Meier分析得出Rad51C蛋白在非小細(xì)胞肺癌病人組織中的高表達(dá)與病人的放/化療抵抗及更短的總生存期、無病生存期呈現(xiàn)明顯的相關(guān)性(P0.05)。下調(diào)肺腺癌A549細(xì)胞Rad51C的表達(dá)后并未影響細(xì)胞的增殖,而給予順鉑藥物干預(yù)后,sh Rad51C組的細(xì)胞增殖明顯受抑制并呈劑量依賴性,流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示經(jīng)順鉑干預(yù)后48h的sh Rad51C組細(xì)胞凋亡明顯增多(P0.01)。進(jìn)而,通過γH2AX檢測技術(shù)比較順鉑藥物干預(yù)前后不同組間DNA雙鏈損傷(double-strand break,DSB)修復(fù)水平,sh Rad51C組的γH2AX焦點(diǎn)數(shù)明顯增多。Rad51C可能通過促進(jìn)DSB損傷修復(fù)、抑制凋亡而降低了化療療效。下調(diào)肺癌A549細(xì)胞Rad51C的表達(dá)后并未抑制細(xì)胞的克隆形成,予電離輻射刺激后,克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明受照射后的sh Rad51C組細(xì)胞的克隆形成率明顯降低且細(xì)胞存活曲線明顯下降。進(jìn)而,通過免疫熒光技術(shù)檢測γH2AX焦點(diǎn)情況比較IR干預(yù)前后不同組間DSB修復(fù)差異,得出Rad51C也可通過促進(jìn)DSB修復(fù)而抵抗放療療效。結(jié)論:本研究可得出Rad51C可作為評(píng)估非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的預(yù)測因子,其高表達(dá)可預(yù)示病人對放療/化療的不敏感。同時(shí),細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究提示Rad51C可能通過促進(jìn)DSB損傷修復(fù)介導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌的放/化療抵抗。Rad51C的表達(dá)可能成為NSCLC放療增敏的有效靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：肺癌/非小細(xì)胞肺癌 Rad51C 放療/化療 DNA損傷修復(fù)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號(hào)說明10-13
• 前言13-16
• 研究現(xiàn)狀、成果13-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、免疫組化檢測Rad51C在NSCLC組織中的表達(dá)意義16-26
• 1.1 對象和方法16-18
• 1.1.1 臨床資料及組織標(biāo)本16-17
• 1.1.2 IHC主要試劑及儀器設(shè)備17
• 1.1.3 IHC主要步驟17-18
• 1.1.4 IHC結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)18
• 1.1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法18
• 1.2 結(jié)果18-23
• 1.2.1 Rad51C蛋白在NSCLC組織中的表達(dá)情況18-19
• 1.2.2 Rad51C蛋白表達(dá)水平與NSCLC臨床特征的關(guān)系19-22
• 1.2.3 Rad51C蛋白表達(dá)與NSCLC患者臨床預(yù)后的關(guān)系22-23
• 1.3 討論23-25
• 1.4 小結(jié)25-26
• 二、Rad51C蛋白表達(dá)對放/化療敏感性研究26-46
• 2.1 對象與方法26-34
• 2.1.1 材料與儀器26-28
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法28-34
• 2.2 結(jié)果34-40
• 2.2.1 蛋白印跡方法測定Rad51C-shRNA的基因沉默結(jié)果34-35
• 2.2.2 MTT法測定Rad51C-shRNA的基因沉默對細(xì)胞增殖影響35-36
• 2.2.3 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測Rad51C-shRNA的基因沉默對細(xì)胞克隆影響36
• 2.2.4 MTT法測定Rad51C表達(dá)水平影響順鉑藥物對A549細(xì)胞的生長增殖36-37
• 2.2.5 Annexin V-APC/PI流式細(xì)胞術(shù)測定Rad51C表達(dá)水平影響順鉑藥物對A549細(xì)胞的凋亡37-38
• 2.2.6 免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測Rad51C表達(dá)水平影響順鉑藥物對A549細(xì)胞的DNA損傷38-39
• 2.2.7 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測Rad51C表達(dá)水平影響放療敏感性39
• 2.2.8 熒光實(shí)驗(yàn)檢測Rad51C蛋白表達(dá)水平影響輻射線對A549細(xì)胞的DNA損傷39-40
• 2.3 討論40-43
• 2.4 小結(jié)43-44
• 2.5 問題與展望44-46
• 結(jié)論46-48
• 參考文獻(xiàn)48-54
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明54-55
• 附錄55-56
• 綜述 Rad51C基因在DNA損傷修復(fù)中的研究進(jìn)展56-65
• 綜述參考文獻(xiàn)61-65
• 致謝65-66
• 個(gè)人簡歷66

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本文編號(hào)：729590