發(fā)布時(shí)間：2017-08-24 04:12

  本文關(guān)鍵詞：SFRP5在胰腺癌中的表達(dá)意義及其shRNA慢病毒載體的構(gòu)建

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【摘要】：目的:探討SFRP5基因在胰腺癌組織中的表達(dá)情況及其與臨床病理因素和預(yù)后的關(guān)系,設(shè)計(jì)和構(gòu)建人SFRP5-sh RNA慢病毒載體,并進(jìn)行鑒定和包裝,為下一步探索SFRP5在胰腺癌細(xì)胞系中的作用機(jī)理提供實(shí)驗(yàn)材料。方法:收集蘭州大學(xué)第一醫(yī)院普外科2010年至2013年間的胰腺癌石蠟包埋切塊。選擇病理診斷明確、病理和隨訪(fǎng)資料完整的71例標(biāo)本,采用免疫組化方法,檢測(cè)SFRP5在胰腺癌及癌旁組織中的表達(dá)情況,并分析SFRP5的表達(dá)情況與臨床病理因素及患者預(yù)后的關(guān)系;利用Western-bloting和q RT-PCR方法,提取新鮮組織中的蛋白和m RNA,檢測(cè)SFRP5蛋白和SFRP5 m RNA在胰腺癌新鮮組織中的表達(dá)情況。根據(jù)Gen Bank上公布的人SFRP5基因信息,構(gòu)建SFRP-sh RNA慢病毒干擾載體,通過(guò)293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝,并測(cè)定病毒滴度。結(jié)果:SFRP5蛋白在胰腺癌組織中的表達(dá)明顯低于癌旁組織(40.8%vs85.7%,P0.05),SFRP5蛋白表達(dá)與胰腺癌患者的TNM分期(P0.05)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P0.05)、胰周侵犯(P0.05)及預(yù)后具有相關(guān)性,并且是胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。成功構(gòu)建SFRP5-sh RNA慢病毒載體,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后在熒光顯微鏡下可見(jiàn)綠色熒光,并進(jìn)行病毒包裝,純化出慢病毒顆粒,測(cè)得其滴度1*109 TU/ml。結(jié)論:SFRP5蛋白在胰腺癌中表達(dá)消失,是影響胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素,SFRP5低表達(dá)、存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期晚及存在胰周侵犯的患者預(yù)后較差。通過(guò)RNA干擾技術(shù),成功構(gòu)建人SFRP5-sh RNA慢病毒載體,包裝后獲得較高的病毒滴度,其感染的胰腺癌細(xì)胞系將為后續(xù)的胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：SFRP5 胰腺癌 慢病毒
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.9
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-5
• 中英文對(duì)照表5-8
• 前言8-11
• 第一部分 SFRP5在胰腺癌中的表達(dá)意義11-34
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料11-13
• 1.1.1 組織標(biāo)本11-12
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材12
• 1.1.3 主要儀器12-13
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法13-20
• 1.2.1 主要試劑的配制13-14
• 1.2.2 Western-Blot法檢測(cè)胰腺癌及癌旁組織中SFRP5蛋白的表達(dá)14-16
• 1.2.3 q RT-PCR法檢測(cè)胰腺癌及癌旁組織中SFRP5 m RNA的表達(dá)16-18
• 1.2.4 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)胰腺癌組織中SFRP5蛋白的表達(dá)18-19
• 1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法19-20
• 1.3 結(jié)果20-30
• 1.3.1 胰腺癌及癌旁組織中SFRP5蛋白的表達(dá)20-21
• 1.3.2 胰腺癌及癌旁組織中SFRP5 m RNA的表達(dá)21
• 1.3.3 免疫組化分析結(jié)果21-23
• 1.3.4 SFRP5蛋白表達(dá)與臨床病理因素之間的關(guān)系23-24
• 1.3.5 SFRP5蛋白表達(dá)與胰腺癌預(yù)后的關(guān)系24-30
• 1.4 討論30-33
• 1.5 小結(jié)33-34
• 第二部分 SFRP5-sh RNA慢病毒載體的構(gòu)建34-47
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料34-35
• 2.1.1 慢病毒載體信息34-35
• 2.1.2 試劑35
• 2.1.3 儀器35
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法35-40
• 2.2.1 sh RNA靶點(diǎn)的選擇35-36
• 2.2.2 sh RNA引物的設(shè)計(jì)36
• 2.2.3 RNAi慢病毒重組質(zhì)粒的構(gòu)建36-37
• 2.2.4 慢病毒包裝37-39
• 2.2.5 Lentivirus滴度測(cè)定39-40
• 2.3 結(jié)果40-45
• 2.3.1 SFRP5基因信息40-41
• 2.3.2 SFRP5 si RNA基因序列41
• 2.3.3 SFRP5-sh RNA載體質(zhì)粒圖譜41-42
• 2.3.4 SFRP5-sh RNA慢病毒載體質(zhì)粒測(cè)序42-43
• 2.3.5 慢病毒共轉(zhuǎn)染 293T細(xì)胞43-44
• 2.3.6 慢病毒滴度測(cè)定44-45
• 2.4 討論45-46
• 2.5 小結(jié)46-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 在學(xué)期間研究成果52-53
• 綜述53-60
• 參考文獻(xiàn)57-60
• 致謝60

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1 李波;胰腺癌綜合治療現(xiàn)狀[J];中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2000年06期

2 李凱炎,高如岳,王玲;胰腺癌超聲顯像診斷體會(huì)[J];中國(guó)超聲診斷雜志;2001年05期

3 王綿,趙戰(zhàn)勝,周紅,張力輝;胰腺癌伴發(fā)糖尿病15例分析[J];河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2001年03期

4 冀文茹,烏恩,施琳,李超美;胰腺癌胰腺炎CD44V6,RB,C-myc基因檢測(cè)分析[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年03期

5 徐冬梅,孫勝英,王建文;胰腺癌73例分析[J];中國(guó)誤診學(xué)雜志;2001年10期

6 ;胰腺腫瘤[J];國(guó)外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2001年02期

7 ;胰腺腫瘤[J];國(guó)外科技資料目錄(醫(yī)藥衛(wèi)生);2002年01期

8 鄧曉春,莫云凌;胰腺癌臨床研究進(jìn)展[J];腫瘤學(xué)雜志;2002年03期

9 呂自來(lái),孫清慧,于德國(guó);胰腺癌10例誤診原因分析[J];臨床醫(yī)藥實(shí)踐;2003年05期

10 周政文,張曉梅;60例胰腺癌臨床分析[J];醫(yī)學(xué)臨床研究;2004年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 周小漁;劉朝陽(yáng);盧琪;戴翼;;兒童胰腺腫瘤5例臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)小兒外科學(xué)術(shù)會(huì)論文集[C];2010年

2 王芹秀;雷成功;;胰腺腫瘤的超聲診斷及臨床評(píng)價(jià)[A];中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下）[C];2004年

3 王煥民;祝秀丹;秦紅;;小兒胰腺腫瘤的外科治療[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)小兒外科學(xué)術(shù)會(huì)論文集[C];2010年

4 孫叢;周存升;;螺旋CT在胰腺腫瘤診斷中的臨床應(yīng)用[A];慶祝山東省醫(yī)學(xué)影像學(xué)研究所建所30周年學(xué)術(shù)論文專(zhuān)刊[C];2005年

5 金肖丹;宋洪亮;陳海川;;腹腔鏡治療胰腺腫瘤(附1例報(bào)告)[A];2005年浙江省外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

6 馬黎明;;胰腺癌的影像學(xué)診斷及進(jìn)展[A];首屆全國(guó)分子核醫(yī)學(xué)暨分子影像學(xué)學(xué)術(shù)交流會(huì)資料匯編[C];2006年

7 靳大勇;樓文輝;匡天濤;王單松;許雪峰;;胰腺腫瘤根治切除術(shù)308例分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)胰腺外科學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2006年

8 鄭茂松;許東興;蔣羽;林杰成;;胰腺癌164例治療臨床探討[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)胰腺外科學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2006年

9 沈潔;金璋;王海英;陳增邊;;三維立體定向放射治療胰腺癌35例分析[A];2007年浙江省放射腫瘤治療學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)暨腫瘤放射治療規(guī)范和新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2007年

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中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 保健時(shí)報(bào)特約專(zhuān)家 郝純毅;偷偷隱藏的胰腺癌[N];保健時(shí)報(bào);2007年

2 廣州復(fù)大腫瘤醫(yī)院 徐克成　穆峰;丹麥訪(fǎng)病之旅：聚焦胰腺癌的治療[N];健康報(bào);2008年

3 郝純毅 北京腫瘤醫(yī)院肝膽胰外二科主任醫(yī)師;酗酒和吸煙最傷胰腺[N];大眾科技報(bào);2011年

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5 保健時(shí)報(bào)記者 王朝建 通訊員 王懿輝;中年突發(fā)糖尿病當(dāng)心胰腺癌[N];保健時(shí)報(bào);2012年

6 上海市腫瘤醫(yī)院胰腺肝膽外科主任醫(yī)師 虞先o，

本文編號(hào)：729119