本文關(guān)鍵詞：沉默UVRAG基因?qū)Χ┍蛘T導(dǎo)K562細(xì)胞中caspase3的表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 二烯丙基二硫 K562細(xì)胞 凋亡 抗紫外線相關(guān)基因 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3

【摘要】：目的研究抑制UVRAG基因介導(dǎo)的自噬在DADS誘導(dǎo)白血病K562細(xì)胞凋亡的變化,初步探討DADS誘導(dǎo)K562細(xì)胞發(fā)生凋亡及自噬之間的相互關(guān)系。方法1)K562細(xì)胞培養(yǎng)體系進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。不同濃度20mg/L、40mg/L、80mg/LDADS作用K562細(xì)胞12小時(shí)后提取細(xì)胞蛋白,采用蛋白印跡技術(shù)(Western Blotting)檢測凋亡相關(guān)基因caspase-3的表達(dá)。2)將構(gòu)建成功并篩選出最有效干擾抑制UVRAG基因的siRNA序列片段采用lipofectamine TM2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染白血病K562細(xì)胞24小時(shí),利用QT-PCR檢測UVRAG mRNA的表達(dá)水平以此觀察干擾效果。3)將轉(zhuǎn)染成功的白血病K562細(xì)胞以40mg/LDADS處理12小時(shí),采用蛋白印跡技術(shù)檢測凋亡相關(guān)基因caspase-3的表達(dá)。結(jié)果1.以不同濃度的DADS(20、40、80mg/L)處理K562細(xì)胞12h后,通過westernbloting檢測到:與空白組相比,DADS藥物處理組凋亡相關(guān)基因caspase-3的蛋白表達(dá)量呈增多的趨勢(P0.05),但藥物處理組之間的差異不明顯(P0.05)。2.QT-PCR顯示:與空白組、陰性對(duì)照組及陽性對(duì)照組相比,沉默UVRAG基因后mRNA的產(chǎn)物明顯下降,證實(shí)了沉默UVRAG基因的小干擾實(shí)驗(yàn)成功,而40mg/LDADS藥物處理小干擾后的K562細(xì)胞12h,mRNA的產(chǎn)物下降更明顯。3.將40mg/LDADS處理小干擾成功的K562細(xì)胞12小時(shí)提取細(xì)胞蛋白,通過westernbloting檢測到:與空白組相比,沉默UVRAG后K562細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因caspase-3的蛋白表達(dá)量明顯減少(P0.05)。結(jié)論1.提示了DADS所誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬依賴于細(xì)胞內(nèi)固有的UVRAG基因的表達(dá)水平。2.抑制UVRAG介導(dǎo)的自噬可能也抑制DADS誘導(dǎo)K562細(xì)胞發(fā)生凋亡。
【關(guān)鍵詞】：二烯丙基二硫 K562細(xì)胞 凋亡 抗紫外線相關(guān)基因 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.7
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 引言8-11
• 材料與方法11-20
• 一、材料11-14
• 二、方法14-20
• 結(jié)果20-23
• 討論23-26
• 結(jié)論26-27
• 主要縮略英文索引27-28
• 參考文獻(xiàn)28-32
• 文獻(xiàn)綜述32-39
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文39-40
• 致謝40

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