本文關(guān)鍵詞：MIBG對(duì)人體肝癌細(xì)胞侵襲的影響

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【摘要】：目的：通過使用間碘芐胍(meta-iodobenzylguanidine, MIBG)干預(yù)精氨酸特異性單腺苷二磷酸核糖基化(arginine-specific mono-ADP-r ibosylation)作用來探究其對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲的影響及其機(jī)制。方法：本實(shí)驗(yàn)只要采用人體肝癌組織的石蠟切片和新鮮人體肝癌組織做體內(nèi)實(shí)驗(yàn)；肝癌HepG2細(xì)胞株做體外實(shí)驗(yàn)。1.人體肝癌組織：收集重慶醫(yī)科大學(xué)病理教研室肝癌手術(shù)切除本39例,其中有臨床轉(zhuǎn)移病例(17例)和無臨床轉(zhuǎn)移病例(22例)做免疫組化檢測ART1和integrin α 7中的表達(dá)；在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院手術(shù)室收集6例新鮮的肝癌組織做RT-PCR實(shí)驗(yàn),檢測伴轉(zhuǎn)移的肝癌組織(3例)和無轉(zhuǎn)移的肝癌組織(3例)中ART1和integrin α 7的mRNA表達(dá)。2.肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞培養(yǎng)：做細(xì)胞免疫熒光法來檢測肝癌細(xì)胞HepG2中是否有精氨酸特異性腺苷二磷酸核糖基化轉(zhuǎn)移酶1(arginine-specific adenosinediphospate-ribosyltansferase 1,ART1)的表達(dá)；MTT比色實(shí)驗(yàn)來檢測不同濃度MIBG對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2的抑制率,找出MIBG對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2抑制的最適濃度；劃痕實(shí)驗(yàn)檢測MIBG對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2遷移能力的影響；Transwell實(shí)驗(yàn)檢測MIBG對(duì)肝癌細(xì)胞HeG2侵襲能力的影響；Westren blot來分別檢測信號(hào)通路中ART1 integrin α 7、FAK、PI3K和uPA的蛋白表達(dá)。結(jié)果：1.免疫組化結(jié)果顯示：在病理分級(jí)Ⅲ-Ⅳ組及肝癌伴轉(zhuǎn)移組織中的ART1和integrin α 7的表達(dá)明顯高于病理分級(jí)Ⅰ-Ⅱ級(jí)組和未伴轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)。細(xì)胞膜表面和胞漿中均可見ART1和integrin α 7的表達(dá)(P0.05)。在肝癌組織內(nèi),隨著整合素α7表達(dá)強(qiáng)度升高,ART1的表達(dá)也相應(yīng)增高,兩者呈正相關(guān)(p=0.88410,P0.01)。2. RT-PCR結(jié)果顯示：肝癌伴轉(zhuǎn)移組織中ART1和integrin α 7的mRNA表達(dá)量均高于肝癌未伴轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)(P0.05)。3.免疫熒光結(jié)果顯示：HepG2在使用ART1的一抗后,再與FITC標(biāo)記的二抗結(jié)合后在熒光顯微鏡下見胞膜、胞漿均有熒光。而陰性對(duì)照的HepG2細(xì)胞中則未見熒光。提示ART1在HepG2細(xì)胞中具有表達(dá)。4.MTT比色試驗(yàn)結(jié)果顯示：隨著MIBG的給藥濃度的增加,細(xì)胞的生存率總體也成一個(gè)下降的趨勢,這就提示MIBG對(duì)HepG2細(xì)胞增殖具有一定抑制作用,而致使細(xì)胞半數(shù)抑制的MIBG濃度是200μmol/L(P0.05)。5.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：未處理對(duì)照組的HepG2細(xì)胞在24h時(shí)的細(xì)胞劃痕距離較Oh的距離明顯減少(P0.05),顯示HepG2細(xì)胞具有較強(qiáng)的遷移能力。200μmol/LMIBG處理與未處理的HepG2細(xì)胞在Oh劃痕距離較一致,而MIBG的處理組24h后,較未處理組的劃痕距離明顯增加(P0.05),表明MIBG能抑制細(xì)胞的遷移能力。6. Transwell試驗(yàn)結(jié)果顯示：MIBG處理組穿過Matrigel的細(xì)胞數(shù)為(147.2±18.23952)個(gè),較未處理組的(300.4±11.9147)個(gè)明顯減少,MIBG處理組與未處理組相比侵襲抑制率為50.99%,提示MIBG可明顯抑制HepG2細(xì)胞的侵襲能力(P0.01)。7. Westron blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：肝癌細(xì)胞HepG2中的ART1、integrin α7、FAK, PI3K和uPA的蛋白表達(dá)與未處理組比較均明顯下調(diào),并呈濃度依賴性降低。提示MIBG可能通過抑制ART1而影響integrin α 7/FAK/PI3K/uPA通路來抑制肝癌細(xì)胞HepG2的侵襲和遷移能力(P0.05)。結(jié)論：人體肝癌組織檢測可見肝癌組織分化轉(zhuǎn)移與ART1、integrin α7的表達(dá)有正相關(guān)關(guān)系,提示ART1和integrin α7可能共同協(xié)同參與了肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。而在肝癌細(xì)胞株中使用MIBG對(duì)其干擾,結(jié)果提示MIBG對(duì)HepG2細(xì)胞的遷移和侵襲能力具有抑制作用。其可能機(jī)制主要是MIBG抑制了精氨酸特異性單腺苷二磷酸核糖基化作用后,抑制Iintegrin α7β1、FAK、PI3K的蛋白表達(dá),抑制了uPA的分泌。從而使HepG2細(xì)胞侵襲受到抑制。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 ART1 間碘芐胍 侵襲 轉(zhuǎn)移 整合素α7 uPA
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-15
• 1. 材料與方法15-28
• 2. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析28
• 3. 結(jié)果28-33
• 4. 討論33-36
• 全文小結(jié)36-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 文章附圖41-47
• 文獻(xiàn)綜述47-57
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 致謝57-58
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文58

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