本文關(guān)鍵詞：MIBG對人體肝癌細胞侵襲的影響

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【摘要】：目的：通過使用間碘芐胍(meta-iodobenzylguanidine, MIBG)干預(yù)精氨酸特異性單腺苷二磷酸核糖基化(arginine-specific mono-ADP-r ibosylation)作用來探究其對肝癌細胞侵襲的影響及其機制。方法：本實驗只要采用人體肝癌組織的石蠟切片和新鮮人體肝癌組織做體內(nèi)實驗；肝癌HepG2細胞株做體外實驗。1.人體肝癌組織：收集重慶醫(yī)科大學(xué)病理教研室肝癌手術(shù)切除本39例,其中有臨床轉(zhuǎn)移病例(17例)和無臨床轉(zhuǎn)移病例(22例)做免疫組化檢測ART1和integrin α 7中的表達；在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院手術(shù)室收集6例新鮮的肝癌組織做RT-PCR實驗,檢測伴轉(zhuǎn)移的肝癌組織(3例)和無轉(zhuǎn)移的肝癌組織(3例)中ART1和integrin α 7的mRNA表達。2.肝癌細胞株HepG2細胞培養(yǎng)：做細胞免疫熒光法來檢測肝癌細胞HepG2中是否有精氨酸特異性腺苷二磷酸核糖基化轉(zhuǎn)移酶1(arginine-specific adenosinediphospate-ribosyltansferase 1,ART1)的表達；MTT比色實驗來檢測不同濃度MIBG對肝癌細胞HepG2的抑制率,找出MIBG對肝癌細胞HepG2抑制的最適濃度；劃痕實驗檢測MIBG對肝癌細胞HepG2遷移能力的影響；Transwell實驗檢測MIBG對肝癌細胞HeG2侵襲能力的影響；Westren blot來分別檢測信號通路中ART1 integrin α 7、FAK、PI3K和uPA的蛋白表達。結(jié)果：1.免疫組化結(jié)果顯示：在病理分級Ⅲ-Ⅳ組及肝癌伴轉(zhuǎn)移組織中的ART1和integrin α 7的表達明顯高于病理分級Ⅰ-Ⅱ級組和未伴轉(zhuǎn)移組織中的表達。細胞膜表面和胞漿中均可見ART1和integrin α 7的表達(P0.05)。在肝癌組織內(nèi),隨著整合素α7表達強度升高,ART1的表達也相應(yīng)增高,兩者呈正相關(guān)(p=0.88410,P0.01)。2. RT-PCR結(jié)果顯示：肝癌伴轉(zhuǎn)移組織中ART1和integrin α 7的mRNA表達量均高于肝癌未伴轉(zhuǎn)移組織中的表達(P0.05)。3.免疫熒光結(jié)果顯示：HepG2在使用ART1的一抗后,再與FITC標(biāo)記的二抗結(jié)合后在熒光顯微鏡下見胞膜、胞漿均有熒光。而陰性對照的HepG2細胞中則未見熒光。提示ART1在HepG2細胞中具有表達。4.MTT比色試驗結(jié)果顯示：隨著MIBG的給藥濃度的增加,細胞的生存率總體也成一個下降的趨勢,這就提示MIBG對HepG2細胞增殖具有一定抑制作用,而致使細胞半數(shù)抑制的MIBG濃度是200μmol/L(P0.05)。5.劃痕實驗結(jié)果顯示：未處理對照組的HepG2細胞在24h時的細胞劃痕距離較Oh的距離明顯減少(P0.05),顯示HepG2細胞具有較強的遷移能力。200μmol/LMIBG處理與未處理的HepG2細胞在Oh劃痕距離較一致,而MIBG的處理組24h后,較未處理組的劃痕距離明顯增加(P0.05),表明MIBG能抑制細胞的遷移能力。6. Transwell試驗結(jié)果顯示：MIBG處理組穿過Matrigel的細胞數(shù)為(147.2±18.23952)個,較未處理組的(300.4±11.9147)個明顯減少,MIBG處理組與未處理組相比侵襲抑制率為50.99%,提示MIBG可明顯抑制HepG2細胞的侵襲能力(P0.01)。7. Westron blot實驗結(jié)果顯示：肝癌細胞HepG2中的ART1、integrin α7、FAK, PI3K和uPA的蛋白表達與未處理組比較均明顯下調(diào),并呈濃度依賴性降低。提示MIBG可能通過抑制ART1而影響integrin α 7/FAK/PI3K/uPA通路來抑制肝癌細胞HepG2的侵襲和遷移能力(P0.05)。結(jié)論：人體肝癌組織檢測可見肝癌組織分化轉(zhuǎn)移與ART1、integrin α7的表達有正相關(guān)關(guān)系,提示ART1和integrin α7可能共同協(xié)同參與了肝癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。而在肝癌細胞株中使用MIBG對其干擾,結(jié)果提示MIBG對HepG2細胞的遷移和侵襲能力具有抑制作用。其可能機制主要是MIBG抑制了精氨酸特異性單腺苷二磷酸核糖基化作用后,抑制Iintegrin α7β1、FAK、PI3K的蛋白表達,抑制了uPA的分泌。從而使HepG2細胞侵襲受到抑制。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 ART1 間碘芐胍 侵襲 轉(zhuǎn)移 整合素α7 uPA
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-15
• 1. 材料與方法15-28
• 2. 統(tǒng)計學(xué)分析28
• 3. 結(jié)果28-33
• 4. 討論33-36
• 全文小結(jié)36-37
• 參考文獻37-41
• 文章附圖41-47
• 文獻綜述47-57
• 參考文獻53-57
• 致謝57-58
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文58

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本文編號：726634