本文關鍵詞：RhoGDI2沉默對DADS誘導人白血病HL-60細胞分化的影響

  更多相關文章： 二烯丙基二硫 人白血病HL-60細胞 RhoGDI2 分化 Rac1/LIMK1通路

【摘要】：目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)是大蒜中的一種有效成分,研究發(fā)現(xiàn),DADS可以誘導人白血病HL-60細胞增殖抑制與分化,并通過蛋白質組學分析發(fā)現(xiàn)Rho鳥苷酸解離抑制因子2(RhoGDI2)明顯下調。RhoGDI2是Rho GDI家族中的重要一員,在多種腫瘤細胞中異常表達,對各種腫瘤的發(fā)展、侵襲與轉移起著雙重調節(jié)。本研究主要討論RhoGDI2沉默對DADS誘導人白血病HL-60細胞分化的影響,以闡明RhoGDI2是誘導HL-60細胞分化的關鍵靶分子,為開發(fā)新一代誘導白血病細胞分化的誘導劑具有重要的意義。方法:通過Western blot和Real-time PCR驗證DADS處理后HL-60細胞RhoGDI2的表達。通過脂質體轉染法建立RhoGDI2沉默的HL-60細胞系,通過Western blot技術和Real-time PCR技術檢測RhoGDI2的沉默效果。通過CCK-8、NBT還原實驗、細胞免疫熒光以及Transwell遷移侵襲實驗,檢測DADS處理后對各個細胞系增殖、分化及遷移侵襲等生物學行為的影響,并以全反式維甲酸(ATRA)為陽性對照。Western blot和Real-time PCR技術檢測DADS處理后各個細胞系RhoGDI2,Rac1,Pak1,Limk1的表達情況。結果:1.DADS處理后HL-60細胞RhoGDI2的表達Western blot和q RT-PCR檢測顯示,DADS處理HL-60細胞0h、12h、24h、36h后,RhoGDI2的蛋白表達及m RNA表達均呈現(xiàn)出時間依賴性的下降(P0.05)。2.構建RhoGDI2沉默HL-60細胞系由Invitrogen公司構建4組不同序列干擾質粒及空載體,分別轉入HL-60細胞。Western-blot及q RT-PCR顯示,各沉默組較空載體組,RhoGDI2 m RNA與蛋白表達均下降,其中1號序列干擾質粒轉染組沉默效果最明顯,將其作為后續(xù)實驗的RhoGDI2沉默細胞系。3.沉默RhoGDI2對DADS誘導HL-60細胞分化的影響NBT還原實驗顯示,沉默組細胞還原能力較空載體組與未轉染組明顯增強(P0.05);DADS處理后細胞還原能力明顯高于未處理組(P0.05);DADS處理與ATRA處理比較無顯著差異(P0.05)。CCK-8、Transwell遷移和侵襲實驗顯示,沉默組細胞增殖、遷移和侵襲能力較空載體組與未轉染組減弱(P0.05);DADS處理后較未處理各組細胞增殖、遷移和侵襲能力下降(P0.05);DADS處理與ATRA處理無顯著差異(P0.05);空載體組與未轉染組之間無顯著差異(P0.05)。細胞免疫熒光顯示,DADS分別處理沉默組、空載體組及未轉染組細胞24h后較未處理組,各組中CD11b蛋白表達上升,CD33蛋白表達下降。4.RhoGDI2沉默與DADS對Rac1/LIMK1信號通路的影響Western blot顯示,沉默組細胞較空載體組及未轉染組RhoGDI2、Rac1、Pak1、LIMK1蛋白表達水平均下調(P0.05);與未處理組相比較,DADS處理24h后各組細胞中RhoGDI2、Rac1、Pak1、LIMK1表達水平均下降(P0.05);DADS處理前后空載體組與未轉染組比較均無顯著差異(P0.05)。結論:1.沉默RhoGDI2可促進HL-60細胞分化;2.沉默RhoGDI2可增強DADS誘導HL-60細胞分化的作用;3.DADS通過下調RhoGDI2抑制Rac1/LIMK1信號通路,從而誘導HL-60細胞分化。
【關鍵詞】：二烯丙基二硫 人白血病HL-60細胞 RhoGDI2 分化 Rac1/LIMK1通路
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R733.7
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-13
• 第1章 緒論13-15
• 第2章 材料與方法15-25
• 2.1 實驗材料15-18
• 2.2 實驗方法18-25
• 第3章 結果25-41
• 3.1 DADS 對 HL-60細胞 RhoGDI2表達的影響25-26
• 3.2 構建 RhoGDI2 沉默的 HL-60 細胞系26-30
• 3.3 RhoGDI2 沉默與 DADS 對 HL-60 細胞生物學行為的影響30-36
• 3.4 RhoGDI2 沉默與 DADS 對 Rac1/LIMK1 通路的影響36-41
• 第4章 討論41-43
• 第5章 結論43-45
• 參考文獻45-51
• 綜述 RhoGDI2與轉移51-61
• 參考文獻56-61
• 攻讀碩士學位期間的科研成果61-63
• 致謝63

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