本文關(guān)鍵詞：RhoGDI2沉默對DADS誘導(dǎo)人白血病HL-60細(xì)胞分化的影響

  更多相關(guān)文章： 二烯丙基二硫 人白血病HL-60細(xì)胞 RhoGDI2 分化 Rac1/LIMK1通路

【摘要】：目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)是大蒜中的一種有效成分,研究發(fā)現(xiàn),DADS可以誘導(dǎo)人白血病HL-60細(xì)胞增殖抑制與分化,并通過蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)Rho鳥苷酸解離抑制因子2(RhoGDI2)明顯下調(diào)。RhoGDI2是Rho GDI家族中的重要一員,在多種腫瘤細(xì)胞中異常表達(dá),對各種腫瘤的發(fā)展、侵襲與轉(zhuǎn)移起著雙重調(diào)節(jié)。本研究主要討論RhoGDI2沉默對DADS誘導(dǎo)人白血病HL-60細(xì)胞分化的影響,以闡明RhoGDI2是誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化的關(guān)鍵靶分子,為開發(fā)新一代誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化的誘導(dǎo)劑具有重要的意義。方法:通過Western blot和Real-time PCR驗(yàn)證DADS處理后HL-60細(xì)胞RhoGDI2的表達(dá)。通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法建立RhoGDI2沉默的HL-60細(xì)胞系,通過Western blot技術(shù)和Real-time PCR技術(shù)檢測RhoGDI2的沉默效果。通過CCK-8、NBT還原實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞免疫熒光以及Transwell遷移侵襲實(shí)驗(yàn),檢測DADS處理后對各個(gè)細(xì)胞系增殖、分化及遷移侵襲等生物學(xué)行為的影響,并以全反式維甲酸(ATRA)為陽性對照。Western blot和Real-time PCR技術(shù)檢測DADS處理后各個(gè)細(xì)胞系RhoGDI2,Rac1,Pak1,Limk1的表達(dá)情況。結(jié)果:1.DADS處理后HL-60細(xì)胞RhoGDI2的表達(dá)Western blot和q RT-PCR檢測顯示,DADS處理HL-60細(xì)胞0h、12h、24h、36h后,RhoGDI2的蛋白表達(dá)及m RNA表達(dá)均呈現(xiàn)出時(shí)間依賴性的下降(P0.05)。2.構(gòu)建RhoGDI2沉默HL-60細(xì)胞系由Invitrogen公司構(gòu)建4組不同序列干擾質(zhì)粒及空載體,分別轉(zhuǎn)入HL-60細(xì)胞。Western-blot及q RT-PCR顯示,各沉默組較空載體組,RhoGDI2 m RNA與蛋白表達(dá)均下降,其中1號序列干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組沉默效果最明顯,將其作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的RhoGDI2沉默細(xì)胞系。3.沉默RhoGDI2對DADS誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化的影響NBT還原實(shí)驗(yàn)顯示,沉默組細(xì)胞還原能力較空載體組與未轉(zhuǎn)染組明顯增強(qiáng)(P0.05);DADS處理后細(xì)胞還原能力明顯高于未處理組(P0.05);DADS處理與ATRA處理比較無顯著差異(P0.05)。CCK-8、Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)顯示,沉默組細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力較空載體組與未轉(zhuǎn)染組減弱(P0.05);DADS處理后較未處理各組細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力下降(P0.05);DADS處理與ATRA處理無顯著差異(P0.05);空載體組與未轉(zhuǎn)染組之間無顯著差異(P0.05)。細(xì)胞免疫熒光顯示,DADS分別處理沉默組、空載體組及未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞24h后較未處理組,各組中CD11b蛋白表達(dá)上升,CD33蛋白表達(dá)下降。4.RhoGDI2沉默與DADS對Rac1/LIMK1信號通路的影響Western blot顯示,沉默組細(xì)胞較空載體組及未轉(zhuǎn)染組RhoGDI2、Rac1、Pak1、LIMK1蛋白表達(dá)水平均下調(diào)(P0.05);與未處理組相比較,DADS處理24h后各組細(xì)胞中RhoGDI2、Rac1、Pak1、LIMK1表達(dá)水平均下降(P0.05);DADS處理前后空載體組與未轉(zhuǎn)染組比較均無顯著差異(P0.05)。結(jié)論:1.沉默RhoGDI2可促進(jìn)HL-60細(xì)胞分化;2.沉默RhoGDI2可增強(qiáng)DADS誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化的作用;3.DADS通過下調(diào)RhoGDI2抑制Rac1/LIMK1信號通路,從而誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化。
【關(guān)鍵詞】：二烯丙基二硫 人白血病HL-60細(xì)胞 RhoGDI2 分化 Rac1/LIMK1通路
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733.7
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-13
• 第1章 緒論13-15
• 第2章 材料與方法15-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料15-18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-25
• 第3章 結(jié)果25-41
• 3.1 DADS 對 HL-60細(xì)胞 RhoGDI2表達(dá)的影響25-26
• 3.2 構(gòu)建 RhoGDI2 沉默的 HL-60 細(xì)胞系26-30
• 3.3 RhoGDI2 沉默與 DADS 對 HL-60 細(xì)胞生物學(xué)行為的影響30-36
• 3.4 RhoGDI2 沉默與 DADS 對 Rac1/LIMK1 通路的影響36-41
• 第4章 討論41-43
• 第5章 結(jié)論43-45
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 綜述 RhoGDI2與轉(zhuǎn)移51-61
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 攻讀碩士學(xué)位期間的科研成果61-63
• 致謝63

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本文編號：725613