發(fā)布時(shí)間：2017-08-23 12:42

  本文關(guān)鍵詞：長(zhǎng)鏈非編碼RNA在無功能垂體腺瘤中的差異表達(dá)研究

  更多相關(guān)文章： lncRNA 基因芯片 無功能垂體腺瘤 石蠟包埋組織

【摘要】：研究目的:長(zhǎng)鏈非編碼RNAs(long noncoding RNAs,lncRNAs)在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展起到重要作用,而它對(duì)垂體腺瘤的發(fā)病機(jī)制仍不清楚。本次研究我們使用福爾馬林固定的石蠟包埋(formalin-fixed and paraffin-embedded,FFPE)組織并利用基因芯片技術(shù)來研究lncRNA在無功能垂體腺瘤(non-functioning pituitary adenomas,NFPA)和正常人垂體中的表達(dá)差異并初步探討相關(guān)的生物學(xué)作用。材料方法:分別提取5例無功能垂體腺瘤和5例正常垂體石蠟組織的總RNA,質(zhì)檢合格后合成雙鏈cDNA,用affymetrix公司的HTA2.0芯片進(jìn)行掃描,并用統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行分析得到兩者之間的lncRNA及mRNA的表達(dá)譜。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q RT-PCR)擴(kuò)大樣本來驗(yàn)證差異較為明顯的10個(gè)lncRNAs的表達(dá)。利用Pathways、Gene Ontology(GO)分析差異表達(dá)的mRNA的功能,以及建立共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)圖對(duì)lncRNA進(jìn)行相關(guān)功能分析。結(jié)果:(1)在兩組石蠟組織中共同檢測(cè)到30020種lncRNAs和25994種mRNAs。其中,顯著差異表達(dá)上調(diào)的有87種lncRNAs和54種mRNAs,顯著差異表達(dá)下調(diào)的有26種lncRNAs和26中mRNAs(fold-change≥2.0,p0.05)。(2)我們從差異表達(dá)的113個(gè)lncRNAs中選取了10個(gè)lncRNAs(n337303、n340496、n334406、n332607、n333074、n332409、n334366、n335657、n409198和MEG3)來驗(yàn)證芯片的可信度。經(jīng)過qRT-PCR驗(yàn)證,lncRNA n337303、n340496、n334406、n332607、n333074和n332409表達(dá)上調(diào),lncRNA n334366、n335657、n409198和MEG3表達(dá)下調(diào),其結(jié)果與芯片結(jié)果基本一致。(3)GO分析顯示在差異表達(dá)上調(diào)的mRNAs中,“respiratory electron transport chain”、“vesicle”及“cytochrome-c oxidase activity”分別在分子生物學(xué)進(jìn)程、細(xì)胞組件和分子功能三方面富集最顯著;在差異表達(dá)下調(diào)的mRNAs中,“peptide hormone processing”、“extracellular region”及“hormone activity”分別在分子生物學(xué)進(jìn)程、細(xì)胞組件和分子功能三方面富集最顯著。Pathway分析顯示分別有99條pathway與差異表達(dá)上調(diào)的mRNAs有關(guān),同時(shí)有24條pathway與差異表達(dá)下調(diào)的mRNAs有關(guān)。(4)關(guān)聯(lián)性分析中(相關(guān)系數(shù)≥0.9),得到與所選的10個(gè)差異表達(dá)的lncRNAs共表達(dá)的mRNAs有57種,并建立了lncRNA-mRNA共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)。結(jié)論:(1)用lncRNA表達(dá)譜芯片來篩選石蠟包埋的無功能垂體腺瘤組織的差異表達(dá)基因是一種有效的檢測(cè)方法。(2)成功利用lncRNA表達(dá)譜芯片揭示了在無功能垂體腺瘤中存在差異表達(dá)的lncRNA基因,并用qRT-PCR驗(yàn)證了部分lncRNA基因,從而說明了lncRNA表達(dá)譜芯片結(jié)果的可靠性。(3)這些lncRNA基因可能成為無功能垂體腺瘤的早期診斷標(biāo)記物及潛在基因治療靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：lncRNA 基因芯片 無功能垂體腺瘤 石蠟包埋組織
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R736.4
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-15
• 參考文獻(xiàn)11-15
• 1 實(shí)驗(yàn)材料15-18
• 2 實(shí)驗(yàn)方法18-30
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-55
• 4 討論55-59
• 5 全文小結(jié)59-60
• 參考文獻(xiàn)60-63
• 綜述63-72
• 參考文獻(xiàn)67-72
• 英文縮寫一覽表72-73
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文73-74
• 致謝74-76

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