發(fā)布時(shí)間：2017-08-23 12:25

  本文關(guān)鍵詞：Nras突變引起小鼠白血病的研究

  更多相關(guān)文章： Nras基因突變小鼠 端粒酶敲除小鼠 G-CSF 白血病 輻照 骨髓移植

【摘要】：Nras基因突變引起人類白血病,但是具體機(jī)制不清楚。造血系統(tǒng)特異的Nras基因突變條件敲入小鼠在六個(gè)月時(shí)發(fā)生白血病。研究發(fā)現(xiàn),Nras信號(hào)通路對(duì)粒細(xì)胞和單核細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)高度敏感。GM-CSF與G-CSF都可以促進(jìn)外周血中性粒細(xì)胞生存增殖。G-CSF能促進(jìn)干細(xì)胞增殖,但G-CSF介導(dǎo)的干細(xì)胞增殖是否可以促進(jìn)白血病的發(fā)生是未知的。我們把G-CSF試劑注射到移植Nras基因突變小鼠體內(nèi),觀察G-CSF是否可以促進(jìn)Nras基因突變條件敲入小鼠迅速發(fā)生白血病。結(jié)果顯示注射G-CSF沒有明顯地促進(jìn)Nras突變引起的白血病作用。有證據(jù)表明在年老的造血微環(huán)境可以促進(jìn)干細(xì)胞的增殖,但是衰老的微環(huán)境是否能快速誘發(fā)白血病的發(fā)生是未知的。第二代端粒酶敲除小鼠(G2Terc-/-)端粒縮短,引起的造血干細(xì)胞微環(huán)境的衰老。為研究造血干細(xì)胞微環(huán)境衰老對(duì)Nras突變引起白血病的作用。我們把Nras基因突變小鼠的骨髓細(xì)胞移植到致死劑量照射的G2Terc-/-小鼠體內(nèi)。但是G2Terc-/-小鼠很快死亡,分析沒有發(fā)現(xiàn)白血病的表型出現(xiàn)�？赡苁且�?yàn)镚2Terc-/-小鼠為早衰模型,對(duì)致死劑量輻射(160kv,4m A--0.2Gy/min,40min)非常敏感,最終導(dǎo)致G2Terc-/-小鼠獲得白血病前死亡。通過上述實(shí)驗(yàn),得出結(jié)論G-CSF試劑注射Nras基因突變小鼠體內(nèi)并沒有促發(fā)白血病。由于G2Terc-/-小鼠對(duì)致死劑量照射敏感,因此無(wú)法確定衰老微環(huán)境是否促發(fā)Nras突變引起的白血病。
【關(guān)鍵詞】：Nras基因突變小鼠 端粒酶敲除小鼠 G-CSF 白血病 輻照 骨髓移植
【學(xué)位授予單位】：杭州師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.7
【目錄】：

• 致謝7-8
• 摘要8-9
• Abstract9-10
• 1.引論10-18
• 2. 材料與方法18-37
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、試劑及相關(guān)儀器18-20
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物18
• 2.1.2 試劑18-19
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器19-20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-37
• 2.2.1 G2 Terc-/-基因敲除小鼠的建立及PCR方法鑒定G2 Terc-/-和Nras/Vav-icre小鼠基因型20-25
• 2.2.1.1 G2Terc-/-基因敲除小鼠的建立20-22
• 2.2.1.2 鹽析法提DNA方法22
• 2.2.1.3 G2基因敲除小鼠及Nras/Vav-icre小鼠PCR方法鑒定小鼠基因型22-25
• 2.2.2 小鼠骨髓細(xì)胞的分離，，脾臟和胸腺，淋巴結(jié)的稱重25-27
• 2.2.2.1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備25
• 2.2.2.2 小鼠骨髓細(xì)胞的分離25-26
• 2.2.2.3 脾臟和胸腺，淋巴結(jié)組織的稱重26-27
• 2.2.3 外周血檢測(cè)27-28
• 2.2.4 Giemsa染色方法28
• 2.2.5 受體小鼠輻照28-29
• 2.2.6 骨髓細(xì)胞凍存與復(fù)蘇29-30
• 2.2.7 流式細(xì)胞儀分析骨髓造血干/祖細(xì)胞比例30-32
• 2.2.8 全骨髓移植32
• 2.2.9 磁珠法富集造血干細(xì)胞及進(jìn)一步染色分選32-33
• 2.2.10 G-CSF促進(jìn)骨髓干細(xì)胞體外克隆形成實(shí)驗(yàn)33
• 2.2.11 G-CSF腹腔注射實(shí)驗(yàn)33-34
• 2.2.12 流式細(xì)胞儀分析小鼠骨髓細(xì)胞中淋系細(xì)胞和髓系細(xì)胞34-35
• 2.2.13 流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血中各系細(xì)胞數(shù)量和比例35
• 2.2.14 Nras骨髓細(xì)胞移植到WT受體小鼠制備實(shí)驗(yàn)35-37
• 3.結(jié)果分析37-55
• 3.1 PCR鑒定基因型37-38
• 3.2 Nras基因突變小鼠6個(gè)月時(shí)發(fā)生白血病的重復(fù)實(shí)驗(yàn)38-42
• 3.2.1 體重及其器官的稱重38-39
• 3.2.2 白細(xì)胞數(shù)目檢測(cè)39-40
• 3.2.3 Giemsa染色40
• 3.2.4 骨髓干細(xì)胞流式分析圖40-41
• 3.2.5 骨髓B.M細(xì)胞流式分析41-42
• 3.3 輻照劑量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)42-43
• 3.4 G-CSF藥效測(cè)試的體外實(shí)驗(yàn)43-44
• 3.5 G-CSF藥效測(cè)試的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)44-45
• 3.6 Nras-WT小鼠注射G-CSF實(shí)驗(yàn)45-46
• 3.7 NRAS基因突變小鼠細(xì)胞移植到G2小鼠體內(nèi)46-55
• 3.7.1 體重及其器官的稱重47-48
• 3.7.2 血球計(jì)數(shù)分析48-49
• 3.7.3 骨髓干細(xì)胞流式分析49
• 3.7.4 骨髓T,B,M細(xì)胞流式分析49-52
• 3.7.5 骨髓細(xì)胞MPP.GMP.MEP.CLP流式分析52-55
• 4.討論55-57
• 5. 結(jié)論與展望57-59
• 參考文獻(xiàn)59-64

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;附屬瑞金醫(yī)院中法聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室探究白血病發(fā)生機(jī)制新思路[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年08期

2 王鳳文;;國(guó)內(nèi)白血病研究概況[J];廣西衛(wèi)生;1979年04期

3 陸華中;;白血病治愈的可能性與前景[J];醫(yī)學(xué)與哲學(xué);1990年03期

4 梁實(shí);雷國(guó)學(xué);;對(duì)白血病發(fā)生發(fā)展及其治療的思考[J];醫(yī)學(xué)與哲學(xué);1992年11期

5 褚建新;白血病發(fā)病機(jī)理的研究進(jìn)展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;1995年03期

6 ;白血病[J];國(guó)外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;1997年05期

7 趙成會(huì);;白血病最愛襲擊兒童[J];醫(yī)藥與保健;2009年03期

8 萍蓉;關(guān)于白血病的話題——訪北京協(xié)和醫(yī)院血液專家李蓉生教授[J];百科知識(shí);1997年06期

9 寧兆民;;白血病的地域分布[J];祝您健康;2000年03期

10 徐錦華,張永平,張曉春,喬慧,吳曉東;265例成人白血病危險(xiǎn)因素的多元Logistic回歸分析[J];中國(guó)公共衛(wèi)生;2000年07期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 杜秀敏;郇天笑;白增亮;;基因多態(tài)性對(duì)白血病發(fā)生發(fā)展的影響[A];遺傳學(xué)進(jìn)步與人口健康高峰論壇論文集[C];2007年

2 鄭春榮;彭映;徐東升;孫銘陽(yáng);;青少年白血病流行病學(xué)分析[A];全國(guó)兒科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2008年

3 張晶;施旭光;藍(lán)紹穎;;南通市成人白血病危險(xiǎn)因素的1:2病例對(duì)照研究[A];華東地區(qū)第十次流行病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨華東地區(qū)流行病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議20周年慶典論文匯編[C];2010年

4 羅靜;曾東風(fēng);梁雪;孔佩艷;;供者細(xì)胞白血病的研究進(jìn)展[A];第11次中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文匯編[C];2007年

5 馬軍;;白血病的治療進(jìn)展[A];第15屆全國(guó)腫瘤內(nèi)科治療學(xué)習(xí)班及學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

6 段峗;開金龍;夏小軍;李雪松;姚金華;;慶陽(yáng)市中醫(yī)院10年276例白血病發(fā)病情況分析[A];甘肅省中醫(yī)藥學(xué)會(huì)2010年會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2010年

7 李冬云;陳信義;田劭丹;;難治性急性白血病診斷與治療[A];全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合血液學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

8 蘇偉年;;急性非淋巴細(xì)胞白血病顱內(nèi)浸犯一例報(bào)導(dǎo)[A];2006年華東六省一市暨浙江省放射學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

9 陳開瀾;劉新月;楊海燕;;血管緊張素Ⅱ及其受體對(duì)白血病細(xì)胞增殖的影響及初步研究[A];第11次中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文匯編[C];2007年

10 高力;陳幸華;張曦;高蕾;劉耀;張誠(chéng);彭賢貴;司英健;王慶余;;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子在白血病患者血清中的濃度及其臨床意義[A];第11次中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文匯編[C];2007年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 褚建新;白血病并不偏愛兒童[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

2 褚建新;白血病不偏愛兒童[N];健康報(bào);2003年

3 武漢協(xié)和醫(yī)院 石威　(醫(yī)學(xué)博士);白血病和裝修房子的關(guān)系[N];家庭醫(yī)生報(bào);2009年

4 童春容 北京市道培醫(yī)院血液科主任;三種因素或致白血病[N];大眾科技報(bào);2011年

5 廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院 銀春林　肖楊(專家指導(dǎo));哪些因素可致白血病[N];家庭醫(yī)生報(bào);2009年

6 本報(bào)記者　 郭靜 通訊員　陳颯 崔偉歷;白血病面面觀[N];廣東科技報(bào);2006年

7 岳陽(yáng);我國(guó)科學(xué)家在白血病 研究領(lǐng)域獲突破性進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2010年

8 本報(bào)記者 王峰;讓孩子遠(yuǎn)離白血病的陰影[N];中國(guó)消費(fèi)者報(bào);2002年

9 記者 胡德榮;我國(guó)學(xué)者發(fā)現(xiàn)白血病新致病基因[N];健康報(bào);2011年

10 河北省秦皇島市腫瘤醫(yī)院放療科 趙成會(huì);謹(jǐn)防“血癌”襲擊兒童[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2013年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張國(guó)基;微波在白血病無(wú)損探測(cè)中的應(yīng)用研究[D];華南理工大學(xué);1999年

2 張伶;VEGF反義寡核苷酸抗白血病血管新生和增強(qiáng)白血病源性樹突狀細(xì)胞功能的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

3 胡曉霞;白血病環(huán)境對(duì)正常造血干/祖細(xì)胞功能的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

4 趙月瑩;白血病NASCT患者CTL克隆細(xì)胞的初步研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2012年

5 劉新月;白藜蘆醇抗白血病效應(yīng)及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2006年

6 張琨;氯化甲基汞對(duì)白血病的治療作用及其機(jī)制的研究[D];吉林大學(xué);2007年

7 嚴(yán)匡華;急性髓系白血病細(xì)胞體外衍生的樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)抗自身白血病特異性T細(xì)胞反應(yīng)[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

8 荊春霞;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子在白血�。[瘤）發(fā)病中的作用[D];暨南大學(xué);2007年

9 馬小彤;白血病診療免疫基礎(chǔ)的若干探索[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

10 王亮;G-CSF誘導(dǎo)移植物抗白血病效應(yīng)治療異基因造血干細(xì)胞移植后復(fù)發(fā)白血病的臨床和實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳文材;白血病危險(xiǎn)因素及住院費(fèi)用變化趨勢(shì)研究[D];蘭州大學(xué);2015年

2 連雪琪;多壁碳納米管體內(nèi)應(yīng)用對(duì)小鼠免疫應(yīng)答和白血病發(fā)生發(fā)展的影響[D];蘇州大學(xué);2015年

3 安瑞;Nras突變引起小鼠白血病的研究[D];杭州師范大學(xué);2015年

4 靳容;某核設(shè)施周圍人群白血病發(fā)病調(diào)查[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

5 陳東周;安徽省渦陽(yáng)縣1992～2001年白血病流行病學(xué)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2004年

6 蔡學(xué)瑜;小鼠微小殘留白血病模型的構(gòu)建及生物學(xué)特性研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2007年

7 李曉莉;近幾十年山東省白血病死亡率變化及大蒜素抗白血病的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2009年

8 吳雙;1241例白血病流行特征及直接經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)評(píng)價(jià)[D];蘭州大學(xué);2014年

9 董征;小鼠粒單細(xì)胞白血病模型的建立及相關(guān)白血病基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2009年

10 聶波;RT-PCR檢測(cè)WT1基因在白血病患者中的表達(dá)及臨床意義[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2003年

本文編號(hào)：725050