本文關(guān)鍵詞：激素難治性前列腺癌耐藥機(jī)制的初步研究

  更多相關(guān)文章： 激素依賴性前列腺癌 激素難治性前列腺癌 機(jī)制 番茄紅素

【摘要】：前列腺癌是一種最常見的男性惡性腫瘤,其死亡率在男性惡性腫瘤中高居第二位。中國男性的前列腺癌發(fā)病率雖低于西方一些國家,但是最近幾年來由于環(huán)境等因素的變化,使得前列腺癌的發(fā)病率也在不斷增加。前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過程主要依靠雄激素受體,因此,雄激素去勢療法成為手術(shù)療法和放射治療之外的第三種標(biāo)準(zhǔn)治療法。但是前列腺癌患者接受18-24個月的雄激素去勢治療后,大部分患者對雄激素去勢治療不再有效,而轉(zhuǎn)變?yōu)榧に仉y治性前列腺癌(Hormone Refractory Prostate Cancer,HRPC),且容易發(fā)生骨轉(zhuǎn)移,使治療變得更加困難,死亡率也大大增加。因此對于HRPC轉(zhuǎn)化機(jī)制的研究成為國內(nèi)外前列腺癌治療的研究熱點(diǎn)。但是前列腺癌激素耐藥的轉(zhuǎn)化過程涉及的因素很多,目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的大量與前列腺癌產(chǎn)生耐藥性相關(guān)的基因及信號通路都不能充分說明其耐藥機(jī)制,需要進(jìn)一步深入研究。此外,大部分HRPC的研究都以DU145、PC3等激素難治性細(xì)胞為模型,因其不表達(dá)內(nèi)源性雄激素受體不能完全模擬臨床HRPC的轉(zhuǎn)化過程,因此,得到的信息是非常有限和不完整的,HRPC的形成機(jī)理尚不明確。本研究選擇了具有人前列腺癌功能分化特征的,并有較強(qiáng)的雄激素依賴性的LNCa P細(xì)胞系,通過去雄激素的培養(yǎng)環(huán)境誘導(dǎo)建立雄激素抵抗性細(xì)胞模型LNCa P-HR,從而模擬臨床上前列腺癌在接受激素去勢治療后轉(zhuǎn)變?yōu)榧に仉y治性前列腺癌的過程,以便用來探究HRPC轉(zhuǎn)變過程中的細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)相關(guān)機(jī)制。首先,利用基因芯片技術(shù)對LNCa P和LNCa P-HR細(xì)胞模型進(jìn)行全基因表達(dá)譜的比較分析,結(jié)果得到表達(dá)上調(diào)基因20個,下調(diào)基因206個。對差異表達(dá)基因的功能進(jìn)行歸類分析,結(jié)果顯示上調(diào)的基因主要涉及細(xì)胞內(nèi)部基因調(diào)控、表達(dá)、代謝、可變剪切等功能,而表達(dá)下調(diào)的基因主要與膜蛋白、跨膜蛋白、離子結(jié)合、細(xì)胞間信號傳導(dǎo)及基因表達(dá)調(diào)控等功能相關(guān)。結(jié)合生物學(xué)過程、差異表達(dá)基因的功能及已發(fā)表的文獻(xiàn),分析可能的信號通路,為探究HRPC的發(fā)生機(jī)制提供方向。根據(jù)基因芯片生物信息學(xué)分析結(jié)果,對PI3K/AKT途徑、MAPK/ERK、MAPK/P38等信號通路關(guān)鍵蛋白進(jìn)行檢測,western blot結(jié)果顯示,與LNCa P相比,LNCa P-HR的AKT下游的NF-κB蛋白表達(dá)升高,但AKT和P-AKT蛋白的表達(dá)均無顯著變化,提示NF-κB可能是激素耐藥相關(guān)信號通路中的關(guān)鍵位點(diǎn),但它的激活不是通過PI3K/AKT信號通路實現(xiàn)的,可能通過其他的信號通路激活。MAPK信號通路關(guān)鍵蛋白的western blot結(jié)果顯示,LNCa P-HR與LNCa P相比,ERK、P-ERK蛋白表達(dá)均無明顯的變化,而P38、P-P38表達(dá)顯著增高,提示MAPK/ERK信號通路在HRPC轉(zhuǎn)化過程中沒有發(fā)揮功能,而MAPK/p38信號通路在LNCa P轉(zhuǎn)變?yōu)長NCa P-HR過程中則可能具有重要作用。以LNCa P和LNCa P-HR細(xì)胞作為激素依賴和激素難治性前列腺癌模型,對多種小分子抑制劑和天然產(chǎn)物進(jìn)行篩選,發(fā)現(xiàn)番茄紅素(Lycopene)作為一種天然的類胡蘿卜素,能夠明顯的抑制前列腺癌細(xì)胞尤其是激素難治性細(xì)胞的增殖。細(xì)胞增殖實驗結(jié)果顯示,80μmol/L的番茄紅素能有效抑制LNCa P細(xì)胞增殖,而40μmol/L的番茄紅素就能有效抑制LNCa P-HR細(xì)胞,提示番茄紅素能夠更有效的抑制激素難治性前列腺癌細(xì)胞生長。進(jìn)一步探究番茄紅素發(fā)揮此作用的相關(guān)信號通路,結(jié)果顯示番茄紅素可以上調(diào)LNCa P和LNCa P-HR細(xì)胞P38、P-P38的表達(dá),但對ERK、AKT、NF-κB的表達(dá)無明顯作用,提示番茄紅素可能通過MAPK/p38信號途徑發(fā)揮抑瘤作用,該現(xiàn)象與前述HRPC轉(zhuǎn)化的可能信號通路相符合。有研究報道MAPK/P38信號通路在卵巢癌、乳腺癌耐藥機(jī)制中發(fā)揮了重要的作用,但在前列腺癌的耐藥機(jī)制中尚無報道。本研究結(jié)果為HRPC機(jī)制的研究及HRPC的治療提供了新的方向。
【關(guān)鍵詞】：激素依賴性前列腺癌 激素難治性前列腺癌 機(jī)制 番茄紅素
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-13
• 中英文對照詞表13-14
• 第1章 緒論14-21
• 1.1 前列腺癌14-16
• 1.1.1 前列腺癌的分類14-15
• 1.1.2 前列腺癌的分級15-16
• 1.1.3 前列腺癌的診斷及治療16
• 1.2 激素難治性前列腺癌16-17
• 1.3 激素難治性前列腺癌轉(zhuǎn)變機(jī)制17-19
• 1.3.1 雄激素受體信號通路17-18
• 1.3.2 非雄激素受體信號途徑18-19
• 1.4 番茄紅素19
• 1.5 立題依據(jù)19-21
• 第2章 材料與試劑21-25
• 2.1 實驗材料21-23
• 2.1.1 實驗儀器21-22
• 2.1.2 實驗試劑22-23
• 2.1.3 細(xì)胞系23
• 2.2 主要試劑配制23-25
• 2.2.1 RPMI1640培養(yǎng)液配制23
• 2.2.2 PBS配制23
• 2.2.3 0.25%胰酶配制23
• 2.2.4 SDS-PAGE電泳緩沖液配制（10×）23-24
• 2.2.5 Western blot轉(zhuǎn)膜液配制（10×）24
• 2.2.6 TBS緩沖液配制（10×）24
• 2.2.7 TBST緩沖液配制24
• 2.2.8 封閉液配制24
• 2.2.9 10%（W/V)SDS溶液配制24
• 2.2.10 10%（W/V)過硫酸銨（APS）溶液配制24
• 2.2.11 上樣緩沖液24
• 2.2.12 番茄紅素溶液配制24-25
• 第3章 實驗方法25-35
• 3.1 激素難治性前列腺癌細(xì)胞模型的建立25-27
• 3.1.1 前列腺癌LNCaP細(xì)胞的培養(yǎng)25
• 3.1.2 激素難治性前列腺癌LNCaP-HR細(xì)胞的誘導(dǎo)與培養(yǎng)25-26
• 3.1.3 去雄激素與氟他胺共培養(yǎng)的LNCaP-HR+F細(xì)胞的誘導(dǎo)與培養(yǎng)26
• 3.1.4 LNCaP、LNCa P-HR、LNCaP-HR+F細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察26
• 3.1.5 細(xì)胞增殖能力的檢測26
• 3.1.6 LNCaP-HR和LNCaP-HR+F細(xì)胞對氟他胺的抵抗性26-27
• 3.1.7 細(xì)胞侵襲能力的檢測27
• 3.2 激素難治性前列腺癌基因表達(dá)的檢測27-29
• 3.2.1 細(xì)胞RNA的提取27-28
• 3.2.2 基因芯片掃描28-29
• 3.2.3 基因芯片中差異表達(dá)基因的統(tǒng)計29
• 3.2.4 基因芯片中差異表達(dá)基因的聚類分析29
• 3.2.5 基因芯片中差異表達(dá)基因作用通路及潛在耐藥基因分析29
• 3.3 激素難治性前列腺癌相關(guān)通路關(guān)鍵蛋白的檢測29-31
• 3.3.1 前列腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)29
• 3.3.2 細(xì)胞總蛋白的提取29-30
• 3.3.3 LNCaP和LNCa P-HR細(xì)胞AKT、P-AKT、NF-κB蛋白表達(dá)變化30-31
• 3.3.4 LNCaP和LNCa P-HR細(xì)胞ERK、P-ERK蛋白表達(dá)變化31
• 3.3.5 LNCaP和LNCa P-HR細(xì)胞P38、P-P38蛋白表達(dá)變化31
• 3.4 小分子藥物及天然產(chǎn)物對激素難治性前列腺癌細(xì)胞的增殖影響31-32
• 3.4.1 細(xì)胞懸液的制備31-32
• 3.4.2 種板32
• 3.4.3 加藥32
• 3.4.4 檢測32
• 3.5 番茄紅素對激素難治性前列腺癌細(xì)胞增殖的影響32-33
• 3.5.1 細(xì)胞懸液的制備32-33
• 3.5.2 種板33
• 3.5.3 加藥33
• 3.5.4 檢測33
• 3.6 番茄紅素對激素難治性前列腺癌相關(guān)通路關(guān)鍵蛋白的影響33-34
• 3.6.1 前列腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)33
• 3.6.2 番茄紅素作用后LNCa P和LNCa P-HR細(xì)胞總蛋白的提取33-34
• 3.6.3 番茄紅素作用后LNCaP和LNCa P-HR細(xì)胞AKT、P-AKT蛋白表達(dá)變化34
• 3.6.4 番茄紅素作用后LNCaP和LNCa P-HR細(xì)胞ERK蛋白表達(dá)變化34
• 3.6.5 番茄紅素作用后LNCaP和LNCa P-HR細(xì)胞P38蛋白表達(dá)變化34
• 3.7 統(tǒng)計學(xué)分析34-35
• 第4章 實驗結(jié)果35-51
• 4.1 激素難治性前列腺癌細(xì)胞模型的建立35-38
• 4.1.1 前列腺癌LNCaP、LNCaP-HR、LNCaP-HR+F細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察35
• 4.1.2 細(xì)胞增殖能力的變化35-36
• 4.1.3 LNCaP-HR和LNCaP-HR+F細(xì)胞對氟他胺的抵抗性36-37
• 4.1.4 細(xì)胞侵襲能力的變化37-38
• 4.2 激素難治性前列腺癌基因表達(dá)變化38-44
• 4.2.1 激素難治性LNCa P細(xì)胞差異表達(dá)基因的統(tǒng)計38-39
• 4.2.2 基因芯片中差異表達(dá)基因的聚類分析39
• 4.2.3 基因芯片中差異表達(dá)基因作用通路及潛在耐藥基因分析39-44
• 4.3 激素難治性前列腺癌相關(guān)通路關(guān)鍵蛋白的檢測44-46
• 4.3.1 LNCaP和LNCa P-HR細(xì)胞AKT、P-AKT、NF-κB蛋白表達(dá)變化44-45
• 4.3.2 LNCaP和LNCa P-HR細(xì)胞ERK、P-ERK蛋白表達(dá)變化45
• 4.3.3 LNCaP和LNCa P-HR細(xì)胞P38、P-P38蛋白表達(dá)變化45-46
• 4.4 小分子藥物及天然產(chǎn)物對激素難治性前列腺癌細(xì)胞增殖的影響46-48
• 4.5 番茄紅素對激素難治性前列腺癌細(xì)胞增殖的影響48-49
• 4.6 番茄紅素對激素難治性前列腺癌相關(guān)通路關(guān)鍵蛋的影響49-51
• 4.6.1 番茄紅素對LNCa P-HR細(xì)胞AKT、P-AKT蛋白表達(dá)的影響49-50
• 4.6.2 番茄紅素對LNCa P-HR細(xì)胞ERK蛋白表達(dá)的影響50
• 4.6.3 番茄紅素對LNCa P-HR細(xì)胞P38蛋白表達(dá)的影響50-51
• 第5章 討論51-54
• 第6章 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 致謝59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張帶榮;;番茄紅素防治前列腺癌的研究進(jìn)展[J];中國臨床藥理學(xué)雜志;2014年10期

2 孫棟勛;蔡志毅;;EGFR/PI3K/Akt細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路與腫瘤[J];檢驗醫(yī)學(xué);2014年07期

3 韓蘇軍;張思維;陳萬青;李長嶺;;中國前列腺癌發(fā)病現(xiàn)狀和流行趨勢分析[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2013年04期

4 朱圣生;劉向云;孫祖越;;前列腺特異性抗原衍生體及前列腺癌高特異性生物標(biāo)志研究現(xiàn)狀[J];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2013年01期

5 彭善麗;黃衛(wèi)寧;張根義;;番茄紅素生物利用率的研究進(jìn)展[J];食品科學(xué);2010年07期

6 謝佳樂;張甫生;羅雪雅;明志強(qiáng);陳洪源;;番茄紅素的生物學(xué)功能及制取方法[J];食品與藥品;2006年08期

7 藍(lán)志相,梁建波,玉海,李信眾,韋華玉,劉剛;PSA、PSAD、PSAT在前列腺偶發(fā)癌診斷中的的意義[J];醫(yī)學(xué)文選;2004年05期

8 何朝宏,許長寶,朱國鴻,郝斌,吳國清,王梅,王友志,時秋英;前列腺癌患者PSA、PSAD、PSAT測定[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2003年02期

9 施侶元;仇成軒;;前列腺癌流行病學(xué)研究進(jìn)展[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2001年01期

10 徐磊;王國民;;中晚期前列腺癌的治療現(xiàn)狀和進(jìn)展[J];國際泌尿系統(tǒng)雜志;2007年06期

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本文編號：724118