本文關(guān)鍵詞：ECRG4在乳腺癌中的表達(dá)與調(diào)控機(jī)制及其抗腫瘤作用的研究

  更多相關(guān)文章： 食管癌相關(guān)基因4 乳腺癌 甲基化 細(xì)胞增殖 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞遷移

【摘要】：目的食道癌相關(guān)基因4 (Esophageal cancer-related gene 4, ECRG4)是從人類食管上皮細(xì)胞內(nèi)分離出來的新基因,它因在食管鱗癌中的作用而首次被人們發(fā)現(xiàn)。其正式名稱為C2ORF40,基因定位于染色體2q12.2,編碼148個(gè)氨基酸殘基的多肽。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,ECRG4在食管鱗癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌和神經(jīng)膠質(zhì)瘤中均表達(dá)下調(diào),在食管鱗癌和神經(jīng)膠質(zhì)瘤中起到抑制癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲的功能。因此,在食管鱗癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌和神經(jīng)膠質(zhì)瘤中ECRG4被看作是一個(gè)潛在的抑癌基因,但ECRG4的確切功能目前尚無定論。近年來,有研究發(fā)現(xiàn)在食管鱗癌、結(jié)腸癌和神經(jīng)膠質(zhì)瘤中都伴隨著ECRG4啟動(dòng)子區(qū)CpG島高甲基化的現(xiàn)象,推測可能是這種高甲基化現(xiàn)象引起了ECRG4的基因轉(zhuǎn)錄沉默,從而導(dǎo)致ECRG4表達(dá)下調(diào)。但是,ECRG4表達(dá)調(diào)控機(jī)制仍罕見報(bào)道。2011年有研究發(fā)現(xiàn)ECRG4在乳腺癌中表達(dá)下調(diào)且與無病生存率相關(guān),本實(shí)驗(yàn)室的前期工作也發(fā)現(xiàn)在乳腺癌中ECRG4的表達(dá)是下調(diào)的,因此,我們決定針對(duì)ECRG4在乳腺癌中的表達(dá)與調(diào)控以及抗腫瘤功能進(jìn)行進(jìn)一步研究。本研究擬對(duì)ECRG4在乳腺癌組織的表達(dá)情況進(jìn)行檢測,探究在乳腺癌組織以及乳腺癌細(xì)胞系中中ECRG4基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài),探討ECRG4啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化狀態(tài)與其表達(dá)之間的關(guān)系,并初步探索ECRG4在乳腺癌中的抗腫瘤功能,以期找到新的診斷和預(yù)后指標(biāo),為以后的分子靶向治療提供理論依據(jù)。方法1.應(yīng)用半定量RT-PCR和熒光定量PCR(Q-PCR)方法檢測17例配對(duì)乳腺癌新鮮組織中內(nèi)源性ECRG4的mRNA表達(dá)水平；2. BSP (Bisulfite sequencing PCR)法檢測17例配對(duì)乳腺癌新鮮組織ECRG4啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)；3.應(yīng)用BSP和熒光定量PCR(Q-PCR)檢測5-Aza-CdR處理前后SK-BR-3和MCF-7細(xì)胞的甲基化狀態(tài)及mRNA表達(dá)情況；4.構(gòu)建ECRG4-pcDNA3.1真核表達(dá)質(zhì)粒,并用ECRG4-pcDNA3.1表達(dá)質(zhì)�；�?qū)φ湛召|(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染SK-BR-3 和 MCF-7細(xì)胞,轉(zhuǎn)染48小時(shí)后收集細(xì)胞總蛋白,Western Blotting檢測蛋白表達(dá)水平；5.MTT法檢測轉(zhuǎn)染ECRG4表達(dá)質(zhì)粒前后SK-BR-3和MCF-7細(xì)胞的增殖能力改變6.流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染ECRG4表達(dá)質(zhì)粒24 h后SK-BR-3和MCF-7細(xì)胞凋亡的改變7.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染ECRG4表達(dá)質(zhì)粒48 h后MCF-7細(xì)胞遷移能力的改變結(jié)果1. RT-PCR結(jié)果顯示有15例(15/17,88.2%)乳腺癌組織ECRG4的hRNA表達(dá)水平低于癌旁乳腺組織(P0.05)；2. RT-qPC R結(jié)果顯示有16例(16/17,94.1%)乳腺癌組織ECRG4的mRNA表達(dá)水平低于癌旁乳腺組織(P0.01)；3.在乳腺癌組織中ECRG4啟動(dòng)子區(qū)存在明顯的高甲基化現(xiàn)象；4.5-Aza-CdR處理SK-BR-3和MCF-7細(xì)胞72 h后其ECRG4啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度明顯減弱,ECRG4 mRNA的表達(dá)得以恢復(fù)和上調(diào),且具有5-Aza-CdR濃度劑量依賴性；5.過表達(dá)E CRG4抑制了乳腺癌細(xì)胞系SK-BR-3和MCF-7的增殖(P0.05)；6.過表達(dá)ECRG4抑制了乳腺癌細(xì)胞系MCF-7的遷移(P0.05)；7.過表達(dá)ECRG4能夠促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞系SK-BR-3和MCF-7的凋亡(P0.05)。結(jié)論1. ECRG4在乳腺癌中mRNA表達(dá)水平下調(diào)；2.在乳腺癌中ECRG4基因啟動(dòng)子區(qū)存在異常高甲基化,并且這種高甲基化狀態(tài)與ECRG4在乳腺癌中的mRNA表達(dá)下調(diào)相關(guān)；3.過表達(dá)ECRG4能夠抑制乳腺癌細(xì)胞系SK-BR-3和MCF-7的增殖,并促進(jìn)其凋亡；4.過表達(dá)ECRG4能夠抑制乳腺癌細(xì)胞系MCF-7的遷移。
【關(guān)鍵詞】：食管癌相關(guān)基因4 乳腺癌 甲基化 細(xì)胞增殖 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞遷移
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 致謝5-6
• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 縮略詞表12-15
• 1 前言15-19
• 2 主要的儀器設(shè)備和試劑19-22
• 3 實(shí)驗(yàn)方法22-35
• 4 結(jié)果35-51
• 5 討論51-53
• 6 結(jié)論53-54
• 7 參考文獻(xiàn)54-57
• 8 綜述57-65
• 參考文獻(xiàn)61-65
• 9 作者簡歷及在讀期間所取得科研成果65

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本文編號(hào)：720833