本文關(guān)鍵詞：RBM10抑制人肺腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)及其相關(guān)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： RBM10 肺腺癌 A549細(xì)胞 H1299細(xì)胞 MTT 克隆形成 細(xì)胞周期

【摘要】：目的:RBM是新近發(fā)現(xiàn)的結(jié)構(gòu)功能相似的RNA結(jié)合基序蛋白家族,可能與m RNA的剪接、翻譯和穩(wěn)定性有關(guān)。RBM10與RBM5是RBM的重要成員,目前研究表明,RBM10與RBM5結(jié)構(gòu)相似,具有高度同源性,是潛在的腫瘤抑制基因。現(xiàn)有證據(jù)表明RBM5是肺腺癌的抑癌基因,可以抑制肺腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖。然而,RBM10是否抑制肺腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖尚未可知。為了研究RBM10在肺腺癌發(fā)病機(jī)制中的作用,我們搜集了41例原發(fā)肺腺癌患者的肺癌組織及癌旁正常肺組織標(biāo)本(取自同一患者),采用RT-PCR和Western blot方法分別觀察RBM10在肺腺癌組織中m RNA及蛋白的表達(dá)情況,同時(shí)分析其表達(dá)水平與肺腺癌患者臨床病理特點(diǎn)的相關(guān)性。同時(shí)通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步觀察重組慢病毒感染肺腺癌A549及H1299細(xì)胞株,觀察穩(wěn)定RBM10過(guò)表達(dá)對(duì)肺腺癌細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響,目的為明確RBM10在肺腺癌發(fā)病中作用的分子機(jī)制,為探尋肺癌治療新靶點(diǎn)及分子靶向治療奠定基礎(chǔ)。研究方法:1.采用半定量RT-PCR及Western blot方法分別檢測(cè)41例人肺腺癌組織RBM10 m RNA及蛋白的表達(dá)情況,統(tǒng)計(jì)分析RBM10的蛋白表達(dá)水平和臨床病理特點(diǎn)(包括性別、年齡、吸煙史、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肺癌TMN分期)的相關(guān)性。2.將重組慢病毒同時(shí)感染兩種肺腺癌A549及H1299細(xì)胞株,獲得穩(wěn)定RBM10過(guò)表達(dá)細(xì)胞株。3.采用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(MTT)檢測(cè)穩(wěn)定RBM10過(guò)表達(dá)對(duì)A549及H1299細(xì)胞株增殖的影響。4.采用細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)穩(wěn)定RBM10過(guò)表達(dá)對(duì)A549及H1299細(xì)胞株克隆形成能力的影響。5.通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)穩(wěn)定RBM10過(guò)表達(dá)對(duì)A549和H1299細(xì)胞生長(zhǎng)周期的影響。結(jié)果:(1)與癌旁組織相比,RBM10 m RNA和蛋白在肺腺癌組織中表達(dá)水平顯著降低,甚至缺失,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。RBM10蛋白在人肺腺癌組織中表達(dá)水平與患者年齡、性別、吸煙史及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理指標(biāo)無(wú)相關(guān)性;而與TNM分期呈負(fù)相關(guān)(P0.05)。(2)成功構(gòu)建了穩(wěn)定RBM10過(guò)表達(dá)的A549和H1299細(xì)胞株。(3)MTT結(jié)果表明穩(wěn)定RBM10過(guò)表達(dá)顯著抑制A549和H1299細(xì)胞株增殖。(4)細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)表明穩(wěn)定RBM10過(guò)表達(dá)顯著抑制A549和H1299細(xì)胞株克隆形成能力。(5)細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)表明穩(wěn)定RBM10過(guò)表達(dá)可使A549細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期,而H1299細(xì)胞周期阻滯于S期。結(jié)論:(1)RBM10在人肺腺癌癌組織中表達(dá)下調(diào),與肺腺癌組織的TNM分期呈負(fù)相關(guān),提示RBM10缺失可能參與肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展等過(guò)程。(2)利用穩(wěn)定RBM10過(guò)表達(dá)的體外A549和H1299細(xì)胞株模型,發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定RBM10過(guò)表達(dá)抑制肺腺癌細(xì)胞生長(zhǎng),使肺腺癌細(xì)胞的克隆形成能力減弱,細(xì)胞周期阻滯。提示RBM10表達(dá)上調(diào)抑制肺腺癌生長(zhǎng)。
【關(guān)鍵詞】：RBM10 肺腺癌 A549細(xì)胞 H1299細(xì)胞 MTT 克隆形成 細(xì)胞周期
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文縮寫(xiě)詞表11-12
• 第1章 緒論12-16
• 1.1 RBM12-13
• 1.2 RBM10基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及與其他RBM同源基因的聯(lián)系13-14
• 1.2.1 RBM10基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)13
• 1.2.2 RBM10與其他RBM同源基因的聯(lián)系13-14
• 1.3 RBM10與疾病及腫瘤的關(guān)系14-16
• 第2章 實(shí)驗(yàn)研究與方法16-24
• 2.1 RBM10在肺腺癌組織中的表達(dá)16-21
• 2.1.1 主要儀器16-17
• 2.1.2 主要試劑17
• 2.1.3 樣本來(lái)源17-18
• 2.1.4 RBM10引物設(shè)計(jì)與合成18
• 2.1.5 RT-PCR18-19
• 2.1.6 Western Blot19-20
• 2.1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法20-21
• 2.2 穩(wěn)定RBM10過(guò)表達(dá)基因?qū)Ψ蜗侔┘?xì)胞系生長(zhǎng)的作用及機(jī)制21-24
• 2.2.1 主要儀器21
• 2.2.2 主要試劑21
• 2.2.3 慢病毒感染A549及H1299細(xì)胞株21-22
• 2.2.4 MTT實(shí)驗(yàn)22
• 2.2.5 細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)22
• 2.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的周期22-23
• 2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法23-24
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-30
• 3.1 RBM10在肺腺癌組織中的表達(dá)24-26
• 3.2 穩(wěn)定RBM10過(guò)表達(dá)對(duì)肺腺癌細(xì)胞系生長(zhǎng)的抑制作用及機(jī)制研究26-30
• 3.2.1 用GFP檢測(cè)A549及H1299細(xì)胞株的感染效率（100×）26
• 3.2.2 穩(wěn)定RBM10過(guò)表達(dá)抑制A549及H1299細(xì)胞株的增殖26-27
• 3.2.3 穩(wěn)定RBM10過(guò)表達(dá)抑制A549及H1299細(xì)胞株的克隆形成27-28
• 3.2.4 穩(wěn)定RBM10過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)A549細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞周期阻滯，，H1299細(xì)胞S期細(xì)胞周期阻滯28-30
• 第4章 討論30-33
• 第5章 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-38
• 作者簡(jiǎn)介及在研究生期間所獲得的研究結(jié)果38-39
• 致謝39

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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本文編號(hào)：719206