本文關鍵詞：RBM10抑制人肺腺癌細胞生長及其相關機制的實驗研究

  更多相關文章： RBM10 肺腺癌 A549細胞 H1299細胞 MTT 克隆形成 細胞周期

【摘要】：目的:RBM是新近發(fā)現(xiàn)的結構功能相似的RNA結合基序蛋白家族,可能與m RNA的剪接、翻譯和穩(wěn)定性有關。RBM10與RBM5是RBM的重要成員,目前研究表明,RBM10與RBM5結構相似,具有高度同源性,是潛在的腫瘤抑制基因�，F(xiàn)有證據(jù)表明RBM5是肺腺癌的抑癌基因,可以抑制肺腺癌細胞的生長增殖。然而,RBM10是否抑制肺腺癌細胞的生長增殖尚未可知。為了研究RBM10在肺腺癌發(fā)病機制中的作用,我們搜集了41例原發(fā)肺腺癌患者的肺癌組織及癌旁正常肺組織標本(取自同一患者),采用RT-PCR和Western blot方法分別觀察RBM10在肺腺癌組織中m RNA及蛋白的表達情況,同時分析其表達水平與肺腺癌患者臨床病理特點的相關性。同時通過體外實驗進一步觀察重組慢病毒感染肺腺癌A549及H1299細胞株,觀察穩(wěn)定RBM10過表達對肺腺癌細胞增殖和細胞周期的影響,目的為明確RBM10在肺腺癌發(fā)病中作用的分子機制,為探尋肺癌治療新靶點及分子靶向治療奠定基礎。研究方法:1.采用半定量RT-PCR及Western blot方法分別檢測41例人肺腺癌組織RBM10 m RNA及蛋白的表達情況,統(tǒng)計分析RBM10的蛋白表達水平和臨床病理特點(包括性別、年齡、吸煙史、淋巴結轉移、肺癌TMN分期)的相關性。2.將重組慢病毒同時感染兩種肺腺癌A549及H1299細胞株,獲得穩(wěn)定RBM10過表達細胞株。3.采用細胞增殖實驗(MTT)檢測穩(wěn)定RBM10過表達對A549及H1299細胞株增殖的影響。4.采用細胞克隆實驗檢測穩(wěn)定RBM10過表達對A549及H1299細胞株克隆形成能力的影響。5.通過流式細胞儀檢測穩(wěn)定RBM10過表達對A549和H1299細胞生長周期的影響。結果:(1)與癌旁組織相比,RBM10 m RNA和蛋白在肺腺癌組織中表達水平顯著降低,甚至缺失,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。RBM10蛋白在人肺腺癌組織中表達水平與患者年齡、性別、吸煙史及淋巴結轉移等臨床病理指標無相關性;而與TNM分期呈負相關(P0.05)。(2)成功構建了穩(wěn)定RBM10過表達的A549和H1299細胞株。(3)MTT結果表明穩(wěn)定RBM10過表達顯著抑制A549和H1299細胞株增殖。(4)細胞克隆實驗表明穩(wěn)定RBM10過表達顯著抑制A549和H1299細胞株克隆形成能力。(5)細胞周期實驗表明穩(wěn)定RBM10過表達可使A549細胞周期阻滯于G0/G1期,而H1299細胞周期阻滯于S期。結論:(1)RBM10在人肺腺癌癌組織中表達下調(diào),與肺腺癌組織的TNM分期呈負相關,提示RBM10缺失可能參與肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展等過程。(2)利用穩(wěn)定RBM10過表達的體外A549和H1299細胞株模型,發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定RBM10過表達抑制肺腺癌細胞生長,使肺腺癌細胞的克隆形成能力減弱,細胞周期阻滯。提示RBM10表達上調(diào)抑制肺腺癌生長。
【關鍵詞】：RBM10 肺腺癌 A549細胞 H1299細胞 MTT 克隆形成 細胞周期
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文縮寫詞表11-12
• 第1章 緒論12-16
• 1.1 RBM12-13
• 1.2 RBM10基因的結構特點及與其他RBM同源基因的聯(lián)系13-14
• 1.2.1 RBM10基因的結構特點13
• 1.2.2 RBM10與其他RBM同源基因的聯(lián)系13-14
• 1.3 RBM10與疾病及腫瘤的關系14-16
• 第2章 實驗研究與方法16-24
• 2.1 RBM10在肺腺癌組織中的表達16-21
• 2.1.1 主要儀器16-17
• 2.1.2 主要試劑17
• 2.1.3 樣本來源17-18
• 2.1.4 RBM10引物設計與合成18
• 2.1.5 RT-PCR18-19
• 2.1.6 Western Blot19-20
• 2.1.7 統(tǒng)計學方法20-21
• 2.2 穩(wěn)定RBM10過表達基因對肺腺癌細胞系生長的作用及機制21-24
• 2.2.1 主要儀器21
• 2.2.2 主要試劑21
• 2.2.3 慢病毒感染A549及H1299細胞株21-22
• 2.2.4 MTT實驗22
• 2.2.5 細胞克隆實驗22
• 2.2.6 流式細胞術檢測細胞的周期22-23
• 2.2.7 統(tǒng)計學方法23-24
• 第3章 實驗結果24-30
• 3.1 RBM10在肺腺癌組織中的表達24-26
• 3.2 穩(wěn)定RBM10過表達對肺腺癌細胞系生長的抑制作用及機制研究26-30
• 3.2.1 用GFP檢測A549及H1299細胞株的感染效率（100×）26
• 3.2.2 穩(wěn)定RBM10過表達抑制A549及H1299細胞株的增殖26-27
• 3.2.3 穩(wěn)定RBM10過表達抑制A549及H1299細胞株的克隆形成27-28
• 3.2.4 穩(wěn)定RBM10過表達誘導A549細胞G0/G1期細胞周期阻滯，，H1299細胞S期細胞周期阻滯28-30
• 第4章 討論30-33
• 第5章 結論33-34
• 參考文獻34-38
• 作者簡介及在研究生期間所獲得的研究結果38-39
• 致謝39

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號：719206