發(fā)布時間：2017-08-22 11:26

  本文關(guān)鍵詞：重組溶瘤腺病毒對人腫瘤細胞的體內(nèi)、外抑制作用研究

  更多相關(guān)文章： 溶瘤腺病毒 凋亡素 病毒載體 癌癥

【摘要】：近年來我國癌癥的發(fā)病率和死亡率逐年攀升,嚴重威脅著人類健康及生命。據(jù)統(tǒng)計僅2015年中國新增癌癥患者人數(shù)約為429.2萬,死亡人數(shù)約為281.4萬。目前臨床上多采用手術(shù)和放化療法治療癌癥,但因上述療法缺乏對腫瘤細胞的特異性,導(dǎo)致治療過程中正常細胞也嚴重受損,因此急需探索腫瘤治療的新方法�；蛑委熓且环N惡性腫瘤的生物療法,但關(guān)鍵問題是如何安全高效地將治療基因遞送至人體內(nèi)。目前腫瘤基因治療中腺病毒載體應(yīng)用最廣泛,溶瘤腺病毒的優(yōu)勢是僅殺傷腫瘤細胞但不傷害正常細胞,因此可作為一種抗腫瘤基因藥物加以應(yīng)用。凋亡素(Apoptin)是雞貧血病毒VP3基因編碼的一種功能蛋白,僅在腫瘤細胞內(nèi)復(fù)制;血凝素-神經(jīng)氨酸酶(HN)是新城疫病毒的一種表面蛋白,能激活細胞凋亡途徑。因此本研究構(gòu)建表達Apoptin和HN的重組腺病毒Ad-VT(Ad-Apoptin-hTERTp-E1a)和Ad-HP(Ad-HN-PEG3p-E1a),研究其是否能成為有效的抗腫瘤基因藥物。本研究分別用Ad-VT感染人骨肉瘤和正常細胞,以及用Ad-HN-PEG3p-E1a感染人胃癌細胞。通過MTT法檢測重組腺病毒對腫瘤細胞和正常細胞的增殖抑制率。體外實驗中,在熒光顯微鏡下觀察腫瘤細胞和正常細胞經(jīng)AO/EB染色、DAPI染色后的形態(tài)學(xué)變化;再利用Annexin V/PI方法通過流式細胞術(shù)和染色分析重組腺病毒對腫瘤細胞的抑制作用方式,并通過Caspase酶活性檢測以上重組腺病毒對腫瘤細胞的抑制作用途徑。體內(nèi)實驗中,采取構(gòu)建動物模型并考察腫瘤生長趨勢和平均生存期。Ad-VT和Ad-HN-PEG3p-E1a能抑制兩種腫瘤細胞增殖,并伴隨一定的時間效應(yīng)和劑量效應(yīng)關(guān)系,但對正常細胞無影響。體外實驗中驗證了以上兩種重組腺病毒能誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡,且是通過激活Caspase相關(guān)酶方式實現(xiàn)的。體內(nèi)實驗中,Ad-VT和Ad-HN-PEG3p-E1a能有效減緩瘤體生長并能延長平均生存期。結(jié)果表明,Ad-VT(Ad-Apoptin-hTERTp-E1a)和Ad-HP(Ad-HN-PEG3p-E1a)對腫瘤細胞有特異性抑制作用,對于今后腫瘤治療的臨床應(yīng)用具有一定的參考價值。
【關(guān)鍵詞】：溶瘤腺病毒 凋亡素 病毒載體 癌癥
【學(xué)位授予單位】：長春工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.5
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 英文縮略語8-9
• 第一章 緒論9-19
• 1.1 癌癥與基因治療9-10
• 1.2 基因轉(zhuǎn)移方法10
• 1.3 非病毒載體10-12
• 1.3.1 生物載體10-12
• 1.3.2 非傳統(tǒng)生物載體12
• 1.4 病毒載體12-16
• 1.4.1 腺病毒載體13-14
• 1.4.2 γ 反轉(zhuǎn)錄病毒載體和慢病毒載體14-15
• 1.4.3 皰疹病毒15
• 1.4.4 腺相關(guān)病毒15-16
• 1.5 體外細胞基因治療16-17
• 1.5.1 細胞的選擇16-17
• 1.5.2 載體的選擇17
• 1.6 基因治療面臨的挑戰(zhàn)17-19
• 1.6.1 安全性問題17-18
• 1.6.2 轉(zhuǎn)基因表達18
• 1.6.3 從實驗室研究到臨床應(yīng)用18-19
• 第二章 重組腺病毒有效抑制人腫瘤細胞增殖19-31
• 2.1 實驗材料19-20
• 2.1.1 重組腺病毒19
• 2.1.2 細胞19
• 2.1.3 試劑19-20
• 2.1.4 儀器設(shè)備20
• 2.2 實驗方法20-21
• 2.2.1 復(fù)蘇和傳代HEK-293細胞20
• 2.2.2 擴增重組腺病毒20-21
• 2.2.3 測定重組腺病毒毒價21
• 2.2.4 MTT檢測21
• 2.3 結(jié)果21-29
• 2.3.1 Ad-VT作用時間對OS-732細胞的抑制作用22-23
• 2.3.2 Ad-VT作用時間對L02細胞的抑制作用23-24
• 2.3.3 Ad-VT作用劑量對OS-732細胞的抑制作用24-26
• 2.3.4 Ad-VT作用劑量對L02細胞的抑制作用26-27
• 2.3.5 Ad-HP對SGC7901細胞的抑制作用27-29
• 2.4 討論29-31
• 第三章 重組腺病毒誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡31-41
• 3.1 實驗材料和儀器31-32
• 3.1.1 重組腺病毒31
• 3.1.2 細胞31
• 3.1.3 試劑31-32
• 3.1.4 儀器設(shè)備32
• 3.2 實驗方法32-33
• 3.2.1 AO/EB染色32
• 3.2.2 DAPI染色32
• 3.2.3 Annexin V檢測32-33
• 3.2.4 Caspase活性檢測33
• 3.3 結(jié)果33-39
• 3.3.1 AO/EB染色結(jié)果33-34
• 3.3.2 DAPI染色結(jié)果34-36
• 3.3.3 Annexin V檢測結(jié)果36-37
• 3.3.4 Caspase活性檢測結(jié)果37-39
• 3.4 討論39-41
• 第四章 重組腺病毒的體內(nèi)抑瘤作用41-46
• 4.1 實驗材料41-42
• 4.1.1 重組腺病毒41
• 4.1.2 細胞41
• 4.1.3 實驗動物41
• 4.1.4 試劑41-42
• 4.1.5 儀器設(shè)備42
• 4.2 實驗方法42-43
• 4.2.1 重組腺病毒的純化42
• 4.2.2 動物模型建立42
• 4.2.3 模型分組及治療方案42
• 4.2.4 腫瘤生長趨勢42-43
• 4.2.5 平均生存期43
• 4.3 結(jié)果43-44
• 4.3.1 腫瘤生長趨勢43
• 4.3.2 平均生存期43-44
• 4.4 討論44-46
• 第五章 結(jié)論46-47
• 致謝47-48
• 參考文獻48-54
• 作者簡介54
• 攻讀碩士學(xué)位期間研究成果54

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 何向東;王志平;;構(gòu)建溶瘤腺病毒的策略[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進展;2007年01期

2 張培影;韓從輝;郝林;賀厚光;董秉政;范濤;貢震;胡建鵬;;表達金黃色葡萄球菌腸毒素A基因的條件增殖型溶瘤腺病毒的構(gòu)建[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2009年08期

3 范濤;郝林;賀厚光;梁清;董秉政;胡建鵬;韓從輝;;表達超抗原SEA基因的溶瘤腺病毒載體的構(gòu)建與鑒定(英文)[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2010年15期

4 何婉婉;周立;劉濤;阮江星;何濱霞;李阿榮;王毅剛;;溶瘤腺病毒作為癌癥基因治療載體的研究進展及安全性評價[J];中國細胞生物學(xué)學(xué)報;2013年09期

5 周立;何婉婉;朱楨楠;楊遠勤;趙紅芳;馬步云;王毅剛;;溶瘤腺病毒靶向癌癥治療的臨床研究進展[J];中國生物工程雜志;2013年12期

6 晏陽;杜曉輝;李榮;;溶瘤腺病毒抗腫瘤策略研究進展[J];解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2013年12期

7 周小龍;唐文如;;溶瘤腺病毒治療腫瘤的研究進展[J];病毒學(xué)報;2014年03期

8 張金合;戴平;;溶瘤腺病毒的靶向性策略[J];生命的化學(xué);2006年01期

9 時輝;車國衛(wèi);;轉(zhuǎn)錄靶向性溶瘤腺病毒治療肺癌研究的現(xiàn)狀與思考[J];中華腫瘤防治雜志;2011年13期

10 譚曉華;;溶瘤腺病毒腫瘤靶向治療:從實驗室到臨床[J];中國腫瘤生物治療雜志;2012年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王瑩;王云貴;金潔;錢其軍;錢文斌;;嵌合型溶瘤腺病毒對造血干細胞體外凈化作用的研究[A];2009年浙江省中醫(yī)藥學(xué)會血液病學(xué)術(shù)年會、浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會血液病學(xué)術(shù)年會暨國家級中西醫(yī)結(jié)合血液病新進展繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

2 曹暉;蘇長青;譚淑萍;陳穎;錢其軍;;一種具有抗腫瘤活性的新型溶瘤腺病毒[A];2007年全國生化與生物技術(shù)藥物學(xué)術(shù)年會論文集[C];2007年

3 浦穎艷;方琳;沈權(quán);孫麗君;胡小翠;王艷;曹祥榮;蘇長青;;腫瘤特異性溶瘤腺病毒載體的構(gòu)建及表達的初步研究[A];江蘇省遺傳學(xué)會第七屆二次代表大會暨學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2008年

4 俞德超;;能在機體內(nèi)產(chǎn)生個性化腫瘤免疫反應(yīng)的重組溶瘤腺病毒[A];第九屆全國腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

5 方超;任臻;葉迅;陸瑾;劉芳;陳紅專;;攜帶HSP基因重組溶瘤腺病毒的腫瘤基因治療研究[A];中國藥理學(xué)會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

6 毛晨宇;滕理送;曹江;;由hTERT和cox-2啟動子調(diào)控的溶瘤腺病毒的構(gòu)建及抗瘤研究[A];第二屆中國醫(yī)學(xué)細胞生物學(xué)學(xué)術(shù)大會暨細胞生物學(xué)教學(xué)改革會議論文集[C];2008年

7 鄭駿年;劉曉昀;毛立軍;史震;劉俊杰;;表達IL-18的溶瘤腺病毒對裸鼠腎癌移植瘤生長及血管形成抑制作用[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

8 劉彥群;;攜帶人IL-18基因的溶瘤腺病毒并研究其在A375細胞中IL-18基因的表達[A];中華醫(yī)學(xué)會第14次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

9 王華;李德川;陳貴平;趙陽;李方印;;E1A,E1B雙突變?nèi)芰鱿俨《続xdAdB-3聯(lián)合Gemcitabine治療腎癌的實驗研究[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

10 王華;李德川;陳貴平;趙陽;鞠海星;李方印;;E1A,E1B雙突變?nèi)芰鱿俨《続xdAdB-3聯(lián)合Gemcitabine治療腎癌的實驗研究[A];2008年浙江省泌尿外科學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 赫東蕓;表達新城疫病毒血凝素-神經(jīng)氨酸酶基因溶瘤腺病毒體內(nèi)、外抗腫瘤作用[D];吉林大學(xué);2015年

2 冉黎;腫瘤細胞來源的微顆粒攜帶溶瘤腺病毒殺傷腫瘤細胞初步探討[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

3 胡澤斌;溶瘤腺病毒載體系統(tǒng)的構(gòu)建及其功能研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

4 王芳;膀胱組織特異性溶瘤腺病毒在動物體內(nèi)的生物分布及安全性評價[D];蘭州大學(xué);2013年

5 賀厚光;雙調(diào)控溶瘤腺病毒攜帶超抗原SEA基因治療前列腺癌基礎(chǔ)研究[D];蘇州大學(xué);2010年

6 黃曉園;新型溶瘤腺病毒M1體內(nèi)應(yīng)用的效應(yīng)和安全性研究及靶向性輸送的探索[D];華中科技大學(xué);2007年

7 齊榮;攜帶XAF1的復(fù)制型溶瘤腺病毒治療惡性腫瘤的研究[D];上海交通大學(xué);2008年

8 邱松波;攜帶hTRAIL的復(fù)制型溶瘤腺病毒治療惡性腫瘤的研究[D];武漢大學(xué);2004年

9 劉新建;攜帶mda-7/IL24的嵌合型溶瘤腺病毒對wnt信號異常腫瘤的靶向基因—病毒治療[D];上海交通大學(xué);2011年

10 韓志強;選擇性封閉腫瘤STAT3的新型溶瘤腺病毒M3的構(gòu)建及應(yīng)用[D];華中科技大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉品一;基因溶瘤腺病毒SG635-SF對卵巢癌的作用研究[D];浙江理工大學(xué);2015年

2 石鑫;重組溶瘤腺病毒RCAdC68.pⅨ-EGFP的構(gòu)建及其對結(jié)腸癌細胞增殖的影響[D];蘇州大學(xué);2015年

3 李沖;膀胱癌特異性的嵌合型溶瘤腺病毒構(gòu)建及其療效初步評價[D];蘭州大學(xué);2016年

4 魯克慶;膀胱癌組織特異性溶瘤腺病毒的安全性評估[D];蘭州大學(xué);2016年

5 趙津;重組溶瘤腺病毒對人腫瘤細胞的體內(nèi)、外抑制作用研究[D];長春工業(yè)大學(xué);2016年

6 周麗君;重組溶瘤腺病毒rAd-E1A-CDglyTK的構(gòu)建和體內(nèi)、外抑殺瘤作用的實驗研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

7 楊耿兵;新型溶瘤腺病毒靶向治療惡性腫瘤的研究[D];浙江理工大學(xué);2011年

8 李仁舉;一氧化氮對膀胱癌組織特異性溶瘤腺病毒基因治療的作用[D];蘭州大學(xué);2011年

9 胡永超;溶瘤腺病毒治療實體瘤安全性及臨床療效的初步評價[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

10 祁媚姣;超氧陰離子對膀胱癌組織特異性溶瘤腺病毒基因治療的作用[D];蘭州大學(xué);2013年

，

本文編號：718883