本文關(guān)鍵詞：γδT細(xì)胞殺傷并誘導(dǎo)SW620和HCT116細(xì)胞凋亡的研究

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【摘要】：研究目的:通過體外擴(kuò)增健康志愿者外周血γδT細(xì)胞與結(jié)腸癌細(xì)胞共培養(yǎng),研究γδT細(xì)胞體外殺傷結(jié)腸癌細(xì)胞株SW620和HCT116的細(xì)胞毒作用,并探討γδT細(xì)胞聯(lián)合重組人白介素-2(recombinant human interleukin-2,rh IL-2)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的作用。方法:(1)采集健康志愿者外周血,應(yīng)用Ficoll密度梯度離心法分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMNC),置于含1umol唑來(lái)膦酸(zoledronate,Zol)及100 IU/ml rh IL-2的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)擴(kuò)增γδT細(xì)胞,第7-10天免疫磁珠法分選收集后應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)γδTCR陽(yáng)性細(xì)胞比率。(2)收獲的γδT細(xì)胞與SW 620和HCT 116分別按不同的效靶比進(jìn)行共培養(yǎng),用乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)釋放法測(cè)定對(duì)癌細(xì)胞的抑制率,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其致凋亡率。(3)選擇γδT細(xì)胞(效靶比10:1)聯(lián)合不同濃度的rh IL-2與靶細(xì)胞共培養(yǎng),用LDH釋放法測(cè)定對(duì)癌細(xì)胞的抑制率。(4)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定5-FU抑制結(jié)腸癌細(xì)胞株SW 620和HCT 116的半數(shù)致死量;LDH釋放法檢測(cè)γδT細(xì)胞聯(lián)合IL-2和/或5-FU(半數(shù)致死量)對(duì)SW 620和HCT 116的抑制率,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡率。結(jié)果:(1)應(yīng)用Zol及rh IL-2在體外培養(yǎng)擴(kuò)增γδT細(xì)胞可獲得較高并穩(wěn)定的產(chǎn)率,培養(yǎng)10天的細(xì)胞經(jīng)免疫磁珠分選收獲的細(xì)胞中γδTCR陽(yáng)性的細(xì)胞達(dá)98.45%。(2)γδT細(xì)胞對(duì)細(xì)胞株SW 620和HCT 116具有細(xì)胞毒性作用,其抑制增殖作用與致凋亡率均與γδT細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的效靶比相關(guān)。細(xì)胞作用6 h后,效靶比為40:1的γδT細(xì)胞對(duì)SW 620和HCT 116細(xì)胞增殖抑制率最高,分別達(dá)12.55±0.76%和9.36±0.61%;效靶比為40:1組的γδT細(xì)胞對(duì)SW 620和HCT 116誘導(dǎo)凋亡作用最強(qiáng),凋亡率分別達(dá)18.26±0.63%和26.46±0.33%。(3)γδT細(xì)胞聯(lián)合rh IL-2后對(duì)靶細(xì)胞的細(xì)胞毒作用增加且與IL-2濃度呈劑量-時(shí)間依賴相關(guān)。IL-2為400 IU/ml濃度時(shí)對(duì)SW 620和HCT 116作用24 h后抑制率分別為8.48±0.31%和18.53±0.75%,聯(lián)合γδT細(xì)胞組抑制率為14.17±0.60%和20.82±0.90%。(4)5-FU作用于SW 620 48 h的半數(shù)致死量濃度約為400 ug/ml,5-FU作用于HCT 116 48 h半數(shù)致死量的濃度約為4 ug/ml,5-FU抑制HCT 116細(xì)胞增殖的效率優(yōu)于SW 620。較低效靶比的γδT細(xì)胞和低濃度的IL-2均可增強(qiáng)5-FU殺傷癌細(xì)胞作用,提高抑制率和凋亡率。γδT細(xì)胞和IL-2聯(lián)合5-FU對(duì)SW 620和HCT 116作用48小時(shí)的抑制率分別為60.62±1.14%和61.20±1.36%,誘導(dǎo)凋亡率分別為60.08±0.98%和67.31±0.11%。結(jié)論:健康志愿者來(lái)源的PBMNC在Zol及rh IL-2的作用下可穩(wěn)定擴(kuò)增γδT細(xì)胞,這些γδT細(xì)胞對(duì)SW 620和HCT 116有殺傷作用,能抑制上述細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡。而低效靶比的γδT細(xì)胞和低濃度的IL-2均可增強(qiáng)5-FU殺傷癌細(xì)胞的作用,三者聯(lián)合對(duì)癌細(xì)胞的細(xì)胞毒作用最強(qiáng)。
【關(guān)鍵詞】：γδT細(xì)胞 結(jié)腸癌 5-氟尿嘧啶 白介素-2
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.35
【目錄】：

• 英文縮略語(yǔ)3-4
• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-11
• 材料與方法11-18
• 結(jié)果18-32
• 討論32-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-44
• 綜述44-53
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 致謝53

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本文編號(hào)：718632