本文關(guān)鍵詞：卵巢癌浸潤(rùn)NK細(xì)胞與腫瘤血管生成的相關(guān)性研究

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【摘要】：[研究背景和目的]上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer, EOC) (以下簡(jiǎn)稱卵巢癌)是婦科最常見(jiàn)的惡性腫瘤,具有死亡率高、預(yù)后差等特點(diǎn),且五年生存率不到30%。卵巢癌血管豐富,腫瘤增長(zhǎng)速度快,惡性程度高是其生物學(xué)特點(diǎn)。目前,抗腫瘤血管生成治療已引入卵巢癌的常規(guī)治療,主要包括2種藥物(重組人血管內(nèi)皮抑素、貝伐珠單抗),且取得了較好療效。但面對(duì)卵巢癌當(dāng)前的嚴(yán)峻形勢(shì),繼續(xù)尋找合理有效的靶點(diǎn),研發(fā)新藥仍是提高卵巢癌患者生存率,延長(zhǎng)其生存期的關(guān)鍵。傳統(tǒng)上認(rèn)為,自然殺傷細(xì)胞(nature killer cell, NK)的特點(diǎn)就在于它不需要腫瘤特異性抗原的識(shí)別,可直接殺傷腫瘤細(xì)胞,因而其在抗腫瘤免疫治療中具有重要地位[1-3]。然而,有研究[4]報(bào)道顯示,根據(jù)NK細(xì)胞膜表面CD56分子表達(dá)水平的不同,可將其分為兩類：(1)CD56dimCD16bright,占NK細(xì)胞的90%左右,其主要功能是細(xì)胞毒性作用；(2)CD56brightCD16dim,占NK細(xì)胞5-10%,這類NK細(xì)胞的主要功能是促進(jìn)血管生成,它能分泌VEGF、PIGF、IL-8等促血管生成細(xì)胞因子,并通過(guò)這些因子發(fā)揮其促進(jìn)腫瘤血管生成的作用。尤其在胎盤(pán)的生長(zhǎng)過(guò)程中,表型為CD56SuperbrightCD16dim,其促血管生成作用更為明顯,故又被稱為胎盤(pán)NK細(xì)胞Decidual natural killer cells, dNK)。因此,本研究的目的是驗(yàn)證卵巢癌浸潤(rùn)NK細(xì)胞與腫瘤血管生成的相關(guān)性,為卵巢癌的治療提供新思路。[方法]1.選取并收集2015年1月至2016年1月于昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院(云南省腫瘤醫(yī)院)婦瘤科就診,未接受輔助治療、經(jīng)手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的上皮性卵巢癌標(biāo)本31例,采集臨床資料(包括年齡、組織病理分型、組織分級(jí)、臨床分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)。另取因其他疾病(主要為宮頸癌)手術(shù)切除的正常卵巢組織30例作為對(duì)照,選取原則為組織病理學(xué)確診卵巢組織未受累。采用流式細(xì)胞儀對(duì)卵巢癌和正常卵巢組織中CD56brightCD16dimNK細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),免疫熒光法檢測(cè)VEGF、MVD及α-SMA表達(dá)水平,從而分析CD56brightCD16dimNK細(xì)胞與VEGF、MVD、α-SMA在上皮性卵巢癌臨床病理特征問(wèn)的關(guān)系及其之間的相關(guān)性,探索它們?cè)诼殉舶┌l(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用,并探討CD56brightCD16dimNK細(xì)胞與腫瘤血管生成的關(guān)系。2.選取人卵巢癌細(xì)胞系SKOV3細(xì)胞,建立小鼠卵巢癌荷瘤模型,分為3組,分別用生理鹽水(0.2m1/只)、重組人血管內(nèi)皮抑素(3mg/kg,1次/日)、貝伐珠單抗(5mg/kg,2次/周)處理,2周后每只小鼠取癌組織、癌旁組織、癌周組織3個(gè)樣本,采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)NK1.1+細(xì)胞,免疫熒光技術(shù)檢測(cè)、EGF、MVD及α-SMA表達(dá)水平,分析卵巢癌浸潤(rùn)NK細(xì)胞與腫瘤血管生成的關(guān)系,并初步探討重組人血管內(nèi)皮抑素、貝伐珠單抗抗腫瘤血管生成的相關(guān)機(jī)制。3.統(tǒng)計(jì)方法：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x士s)表示,采用Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)行正態(tài)分布檢驗(yàn),采用Levene檢驗(yàn)行方差齊性檢驗(yàn)。多組樣本比較采用單因素方差分析、x2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法,兩組樣本比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或t’檢驗(yàn)。參數(shù)間相關(guān)性分析采用Pearson檢驗(yàn)。以α=0.05(雙側(cè))作為檢驗(yàn)水準(zhǔn),P0.05定為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。[結(jié)果]1.正常卵巢和卵巢癌組織中VEGF、MVD、α-SMA的表達(dá)1) VEGF在正常卵巢和卵巢癌組織中的表達(dá)VEGF主要定位于細(xì)胞漿或細(xì)胞膜,呈紅色熒光顆粒。VEGF在上皮性卵巢癌組織的陽(yáng)性表達(dá)率為87.1%(27/31),正常卵巢組織的陽(yáng)性表達(dá)率為23.33%(7/23),卵巢癌組織中VEGF表達(dá)強(qiáng)度明顯高于正常卵巢組織,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。VEGF在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)與患者的年齡、卵巢癌病理分型、組織分級(jí)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。2)α-SMA在正常卵巢和卵巢癌組織中的表達(dá)α-SMA主要定位在間質(zhì)細(xì)胞質(zhì),呈紅色熒光顆粒。α-SMA在上皮性卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為74.19%(23/31),正常卵巢組織的陽(yáng)性率為26.7%(8/30),卵巢癌組織中α-SMA強(qiáng)度明顯高于正常卵巢組織,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。卵巢癌組織中α-SMA陽(yáng)性表達(dá)率與患者的年齡、卵巢癌病理分型、臨床分期、組織分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。3)MVD在正常卵巢和卵巢癌組織中的表達(dá)MVD主要定位在細(xì)胞質(zhì),呈現(xiàn)綠色熒光顆粒。上皮性卵巢癌組織MVD值為21.95±3.37,正常卵巢組織MVD值為8.82±1.38,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000),并且卵巢癌組織中MVD值明顯高于正常卵巢組織。卵巢癌組織MVD值與患者的年齡、卵巢癌病理分型、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān),而與組織分級(jí)有關(guān)。低分化組織中MVD值最高,高分化組織中MVD值第二,中分化組織中MVD值最低,中分化與高、低分化之間有差異,高、低分化之間MVD值無(wú)差異。2.CD56brightCD16dimNK細(xì)胞在正常卵巢和卵巢癌組織中占淋巴細(xì)胞的比率上皮性卵巢癌組織CD56brightCD16dimNK細(xì)胞比率為(71.88+11.76)%,正常卵巢組織CD56brightCD16dimNK細(xì)胞比率為(19.22+11.64)%,兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),并且在卵巢癌組織中CD56brightCD16dimNK細(xì)胞比率明顯高于正常卵巢組織。卵巢癌患者CD56bright16dimNK細(xì)胞比率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為I、II期的CD56bright16dimNK細(xì)胞比率小于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅲ, Ⅳ期組,而與年齡、組織分級(jí)、病理分型無(wú)關(guān)。CD56bright16dimNK細(xì)胞和MVD在上皮性卵巢癌中的表達(dá)具有相關(guān)性(r=0.621,P=0.022),并且其二者之間呈正相關(guān)關(guān)系。3.人卵巢癌荷瘤鼠中NK1.1+細(xì)胞占淋巴細(xì)胞比率生理鹽水組癌組織NK1.1+細(xì)胞比率為(4.34±1.56)%,重組人血管內(nèi)皮抑素組癌組NK1.1+細(xì)胞比率為(6.22±0.29)%,貝伐珠單抗組癌組織NK1.1+表達(dá)為(6.08±1.45)%,3組進(jìn)行比較,生理鹽水組與貝伐珠單抗、重組人血管內(nèi)皮抑素組癌組均有差異(P=0.028、0.036),貝伐珠單抗與重組人血管內(nèi)皮抑素組無(wú)差異(P=0.883)。相比較生理鹽水組,貝伐珠單抗組和重組人血管內(nèi)皮抑素組的NK1.1+細(xì)胞數(shù)明顯增多。[結(jié)論]1.卵巢癌組織中CD56bright16dimNK細(xì)胞占淋巴淋巴比率明顯高于正常卵巢組織。卵巢癌組織CD56bright16dimNK細(xì)胞比率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān),而與年齡、組織分級(jí)、病理分型無(wú)關(guān)。2. CD56bright16dimNK細(xì)胞和MVD在上皮性卵巢癌中的表達(dá)具有相關(guān)性,并且呈正相關(guān)關(guān)系。CD56bright16dimNK細(xì)胞與腫瘤血管生成有相關(guān)性,可能成為卵巢癌生物學(xué)治療的新靶點(diǎn)。3.貝伐珠單抗和重組人血管內(nèi)皮抑素能增加NK1.1+細(xì)胞占淋巴細(xì)胞比率。
【關(guān)鍵詞】：自然殺傷細(xì)胞 卵巢癌 血管生成 VEGF MVD
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 縮略詞表(以字母順序排列)6-8
• 中文摘要8-12
• 英文摘要12-16
• 前言16-22
• 第一部分 上皮性卵巢癌浸潤(rùn)NK細(xì)胞與血管生成的關(guān)系22-43
• 前言22-23
• 材料與方法23-29
• 結(jié)果29-38
• 討論38-42
• 結(jié)論42-43
• 第二部分 重組人血管內(nèi)皮抑素、貝伐珠單抗對(duì)裸鼠人卵巢癌皮下移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用43-61
• 前言43-45
• 材料與方法45-49
• 結(jié)果49-58
• 討論58-60
• 結(jié)論60-61
• 本實(shí)驗(yàn)的創(chuàng)新之處61
• 本實(shí)驗(yàn)的局限之處61
• 本課題的進(jìn)一步規(guī)劃61-62
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 綜述66-72
• 參考文獻(xiàn)70-72
• 論文發(fā)表情況72
• 碩士期間獲獎(jiǎng)情況72-73
• 致謝73

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本文編號(hào)：718353