本文關(guān)鍵詞：兒荼素通過抑制ASICs對胃癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響

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【摘要】：目的:胃癌是最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率依然很高。在中國,大約三分之二的胃癌患者是到晚期才被診斷出來。由于它對化學(xué)治療和放射治療等一些常規(guī)的腫瘤治療方法不敏感,所以目前仍主要通過手術(shù)方法來治療胃癌,但是腫瘤細(xì)胞具有遷移和侵襲的特點(diǎn),腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是影響預(yù)后的主要原因,它不但是術(shù)后復(fù)發(fā)之根本,甚至使部分患者失去了手術(shù)的可能,因此腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是其難以治愈的關(guān)鍵,但胃癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制仍然不清楚。酸敏感離子通道(Acid-sensing ion channels,ASICs)是細(xì)胞外由H+調(diào)控的離子通道。研究表明在神經(jīng)細(xì)胞中有ASICs的表達(dá),也有研究表明在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞和唾液腺癌細(xì)胞中也有ASICs的表達(dá),神經(jīng)膠質(zhì)瘤的惡化程度與ASICs的表達(dá)呈正比,并且ASICs對腫瘤發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移產(chǎn)生影響,運(yùn)用ASICs的阻斷劑阿米洛利抑制了神經(jīng)膠質(zhì)瘤的遷移。兒茶素(Catechin,Cat)為一種純植物提取物。研究表明,兒茶素具有較明顯的抑制腫瘤發(fā)生和抗突變作用,可以通過抑制腫瘤血管生成來抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移,也可以通過下調(diào)Akt信號和鈣黏素的表達(dá)抑制癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。令我們感興趣的是胃癌細(xì)胞中有沒有ASICs的表達(dá),ASICs對胃癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響,以及兒茶素會不會通過ASICs影響胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲。鑒于此,本研究運(yùn)用細(xì)胞免疫化學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測ASICs在胃癌中的表達(dá),運(yùn)用侵襲實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)等方法初步探討ASICs在胃癌細(xì)胞遷移和侵襲中的作用,運(yùn)用全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)檢測ASICs電流;通過加藥前后分析兒茶素是否作用于新的靶點(diǎn)對胃癌遷移和侵襲產(chǎn)生影響。方法:1培養(yǎng)胃癌SGC7901和MGC803細(xì)胞。2設(shè)置空白對照組,兒茶素50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l、400μmol/l處理組,MTT比色法檢測各組細(xì)胞的吸光度。探討兒茶素對胃癌細(xì)胞SGC7901和MGC803生存率的影響。3設(shè)置空白對照組,兒茶素50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l,阿米洛利50μmol/l、100μmol/l處理組,采用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù),檢測胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901各組中ASIC1的表達(dá)情況。4設(shè)置空白對照組,兒茶素50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l,阿米洛利50μmol/l、100μmol/l處理組,細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901各組的遷移能力。5設(shè)置空白對照組,兒茶素50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l,阿米洛利50μmol/l、100μmol/l處理組,細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901各組的侵襲能力。6設(shè)置空白對照組、兒茶素400μmol/l、阿米洛利100μmol/l處理組,采用膜片鉗實(shí)驗(yàn)技術(shù),觀察胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901中ASICs開放情況和電流的大小。結(jié)果:1 MTT方法檢測不同濃度的兒茶素對胃癌細(xì)胞SGC7901和MGC803存活率的影響:設(shè)置空白對照組,兒茶素50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l、400μmol/l藥物處理組,計(jì)算細(xì)胞存活率。在SGC7901細(xì)胞中,細(xì)胞存活率的結(jié)果分別為90.90±1.275、77.78±3.298、64.78±3.309、26.06±6.440(%);在MGC803細(xì)胞中,結(jié)果分別為90.12±3.241、75.58±3.971、58.82±3.720、21.54±2.414(%)。兒茶素可以降低胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901的存活率,但當(dāng)兒茶素達(dá)到400μmol/l時,細(xì)胞的存活率降至50%以下。2免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901中ASIC1表達(dá)的陽性率:在胃癌細(xì)胞SGC7901和MGC803中均存在ASIC1之表達(dá),并且胃癌細(xì)胞SGC7901中ASIC1的陽性表達(dá)率高于MGC803中ASIC1的陽性表達(dá)率(P0.05);與空白對照組相比,50μmol/l阿米洛利組降低了胃癌細(xì)胞SGC7901和MGC803兩種細(xì)胞中ASIC1的陽性表達(dá)率(P0.05),100μmol/l阿米洛利可以顯著地降低胃癌細(xì)胞SGC7901和MGC803兩種細(xì)胞中ASIC1的陽性表達(dá)率(P0.01)。與空白對照組相比,50μmol/l、100μmol/l兒茶素可降低胃癌細(xì)胞SGC7901和MGC803中ASIC1的陽性表達(dá)率(P0.05),200μmol/l兒茶素可顯著降低胃癌細(xì)胞SGC7901和MGC803中的ASIC1的陽性表達(dá)率(P0.01),并且兒茶素對ASIC1表達(dá)的抑制作用小于阿米洛利的抑制作用(P0.05)。3細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的遷移能力:胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901均具有遷移能力,而且SGC7901細(xì)胞的遷移能力強(qiáng)于MGC803細(xì)胞的遷移能力(P0.05)。阿米洛利使胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901的遷移能力均減弱,與空白對照組相比,50μmol/l阿米洛利可以抑制胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901的遷移能力(P0.05),100μmol/l阿米洛利則可以顯著地使胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901的遷移能力減弱(P0.01),提示抑制胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901中ASIC的表達(dá)將會抑制兩種胃癌細(xì)胞的遷移能力。兒茶素使胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901的轉(zhuǎn)移能力均下降,與空白對照組相比,50μmol/l、100μmol/l兒茶素可抑制胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901之遷移能力(P0.05),200μmol/l兒茶素可顯著地使胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901的遷移能力減弱(P0.01),并且兒茶素對兩種胃癌細(xì)胞遷移能力的抑制作用小于阿米洛利的抑制作用(P0.05)。4 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的侵襲能力:胃癌細(xì)胞MGC803的侵襲能力弱于SGC7901(P0.05)。阿米洛利使兩種胃癌細(xì)胞之侵襲能力均減弱,與空白對照組相比,50μmol/l阿米洛利抑制了胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901的侵襲能力(P0.05),100μmol/l阿米洛利可以顯著地使胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901之侵襲能力減弱(P0.01),提示抑制胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901中ASIC的表達(dá)將會使其侵襲能力減弱。兒茶素可使胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901的侵襲能力均減弱,與空白對照組相比,50μmol/l、100μmol/l兒茶素對胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901之侵襲能力有抑制作用(P0.05),200μmol/l濃度兒茶素則可以顯著地抑制胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901的侵襲能力(P0.01),并且兒茶素對兩種胃癌細(xì)胞侵襲能力的抑制作用小于阿米洛利的抑制作用(P0.05)。5全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測細(xì)胞ASICs電流:在MGC803和SGC7901兩種胃癌細(xì)胞系中存在大小不等之ASICs電流,MGC803胃癌細(xì)胞的ASICs電流小于SGC7901胃癌細(xì)胞的ASICs電流(P0.05);與空白對照組相比,加入ASICs阻斷劑100μmol/l阿米洛利后,兩種細(xì)胞中檢測出的電流均被抑制(P0.05)。400μmol/l兒茶素也可以抑制MGC803和SGC7901兩種胃癌細(xì)胞的ASICs電流(P0.05),但是兒茶素抑制ASICs電流的作用要弱于阿米洛利(P0.05)。結(jié)論:1.ASICs可能參與了胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲。2.兒茶素抑制胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲,與其作用于ASICs有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 酸敏感離子通道 兒茶素 遷移 侵襲
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• Abstract8-12
• 縮略詞12-15
• 引言15-17
• 1 實(shí)驗(yàn)材料17-20
• 1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞17
• 1.2 主要試劑與藥品17-18
• 1.3 儀器設(shè)備18
• 1.4 試劑配制方法18-20
• 2 實(shí)驗(yàn)方法20-25
• 2.1 胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901的培養(yǎng)和計(jì)數(shù)20-21
• 2.1.1 胃癌MGC803和SGC7901細(xì)胞的復(fù)蘇20
• 2.1.2 胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901的培養(yǎng)20
• 2.1.3 胃癌MGC803和SGC7901細(xì)胞的的計(jì)數(shù)20-21
• 2.2 MTT法檢測胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901的生存率21
• 2.3 細(xì)胞免疫化學(xué)法檢測胃癌細(xì)胞MGC803 和SGC7901 中ASIC1 的表達(dá)21-22
• 2.4 細(xì)胞劃痕法檢測胃癌細(xì)胞MGC803 和SGC7901 的遷移能力22-23
• 2.5 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測胃癌細(xì)胞MGC803 和SGC7901 的侵襲能力23-24
• 2.6 全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)檢測胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901的ASICs電流24
• 2.6.1 電生理記錄方法24
• 2.6.2 信號采集24
• 2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析24-25
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-34
• 3.1 MTT檢測不同濃度的兒茶素對胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901存活率的影響25
• 3.2 細(xì)胞免疫化學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901中ASIC1表達(dá)陽性率25-27
• 3.3 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901的遷移能力27-29
• 3.4 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901的侵襲能力29-31
• 3.5 全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測胃癌細(xì)胞MGC803和SGC7901的ASICs電流31-34
• 4 討論34-37
• 5.結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 綜述41-63
• 參考文獻(xiàn)57-63
• 致謝63

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郜明;吳家明;陸茵;;腫瘤微環(huán)境與腫瘤的惡變[J];癌變.畸變.突變;2008年05期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 周新科;PIK3CA基因在胃癌遷移和侵襲過程中的作用及機(jī)制[D];南華大學(xué);2012年

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本文編號：714672