本文關鍵詞：FTY720對腫瘤免疫微環(huán)境的調節(jié)作用及其機制研究

  更多相關文章： 腸炎相關結直腸癌 髓源抑制性細胞 粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子 1-磷酸鞘氨醇 FTY720

【摘要】：背景FTY720作為新型免疫抑制劑,在自身免疫病等炎癥相關疾病中顯示良好的治療效果,已被被美國FDA批準用于多發(fā)性硬化病的臨床治療。目前的研究表明,FTY720的主要作用機制是通過結合1-磷酸鞘氨醇(S1P)受體,促使其內化,阻斷或下調S1P介導的信號傳遞,從而發(fā)揮功能性拮抗劑的作用,阻滯效應性淋巴細胞于淋巴器官中,減少病灶組織中的效應細胞的浸潤,從而抑制疾病的發(fā)生發(fā)展。近年來的研究發(fā)現(xiàn),FTY720對腫瘤細胞同樣有著良好的抑制效果,能夠促進癌細胞的凋亡。然而,大量研究證實,腫瘤微環(huán)境,特別是腫瘤免疫微環(huán)境在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用。腫瘤細胞能夠分泌多種生長因子/趨化因子,刺激骨髓或髓外造血器官中髓系細胞的異常分化和增生,造成具有免疫抑制功能的不成熟的髓系細胞MDSC在各器官和腫瘤周圍的大量聚集,破壞機體的免疫監(jiān)視,這被認為是腫瘤免疫微環(huán)境形成的關鍵步驟。因此,我們提出以下科學問題:FTY720作為公認的免疫調節(jié)劑,是否影響腫瘤免疫微環(huán)境,特別是MDSC的累積,進而調控癌細胞的生長?為此,我們將在已建立的多個荷瘤模型中,評價FTY720的效應。并以MDSC的異常增生為研究著力點,探究FTY720對髓外造血和MDSC累積的影響及其機制。目的探討FTY720在腫瘤生長中的作用及其機制。方法在UC相關結直腸癌(CAC)的小鼠模型模型和移植瘤模型上,每天口服FTY720(1mg/kg/天),直至實驗。同時,設立FTY720末期治療組(CAC建模后開始口服FTY720,劑量同上,直至實驗)。每天測量腫瘤尺寸,計算腫瘤體積。分離脾臟組織,病理分析和流式細胞術判斷髓外造血,同時借助流式細胞術檢測各組織器官中的MDSC數(shù)量。ELISA和定量RT-PCR檢測血漿中和細胞內GM-CSF含量。FACS分選MDSC,予以S1P和相應的激動劑/拮抗劑體外刺激,定量RT-PCR檢測GM-CSF表達;2.建立CT26和B16移植瘤模型;3.建立CAC模型的評價體系;4.通過灌胃途徑評價藥物對腫瘤生長的影響5.由病理切片判斷髓外造血情況;6.檢測小鼠外周血、脾臟、骨髓以及結腸病灶部位MDSC的含量;7.FACS或磁珠分選外周血MDSC;8.檢測小鼠血漿以及MDSC中GM-CSF表達水平。9.FACS和QPCR檢測CAC模型中S1P受體的表達;10.S1P以及S1P受體拮抗劑和激動劑體外刺激MDSC對GM-CSF釋放的影響。結果FTY720小鼠的腫瘤負荷明顯增加。進一步研究發(fā)現(xiàn),荷瘤小鼠MDSC細胞高表達,可有效抑制淋巴細胞的增殖。進一步研究FTY720驅動髓外造血和MDSC累積的機制發(fā)現(xiàn)FTY720灌胃后GM-CSF高表達。腹腔注射GM-CSF抗體,可明顯阻斷FTY720效應,S1P受體3激動劑刺激MDSC可顯著促進GM-CSF的表達,S1PR1激動劑刺激則無此效應�？诜1PR3激動劑Cym5541可促進CAC模型小鼠的髓外造血和MDSC累積。結論我們證實了FTY720可促進腫瘤的生長和進展。對其作用機制研究發(fā)現(xiàn),口服FTY720可顯著促進脾臟的髓外造血從而導致MDSC(尤其是G-MDSC)在外周(外周血、脾臟)和腫瘤部位的大量累積。GM-CSF是FTY720促使髓外造血過程中的重要因子。FTY720/S1P主要通過與S1PR3結合增加GM-CSF的表達從而促進MDSC的累積。
【關鍵詞】：腸炎相關結直腸癌 髓源抑制性細胞 粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子 1-磷酸鞘氨醇 FTY720
【學位授予單位】：河南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.3
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 縮略詞表8-12
• 前言12-16
• 第一部分:FTY720對腫瘤生長的效應評價16-22
• 1.1 引言16
• 1.2 材料16-17
• 1.2.1 實驗動物16
• 1.2.2 細胞系16
• 1.2.3 儀器16-17
• 1.2.4 試劑17
• 1.3 方法17-18
• 1.3.1 AOM+DSS聯(lián)合誘導的UC相關大腸癌小鼠模型的建立17
• 1.3.2 小鼠CAC模型的評價體系17
• 1.3.3 CT26和B16移植瘤小鼠模型的建立17
• 1.3.4 FTY720或S1PR激動/拮抗劑給藥途徑劑量的確定17-18
• 1.3.5 統(tǒng)計分析18
• 1.4 結果18-21
• 1.4.1 在UC相關大腸癌模型上全程以及末期口服FTY720對小鼠腫瘤生長的影響18-20
• 1.4.2 移植瘤小鼠模型上口服FTY720對腫瘤生長的影響20-21
• 1.5 討論21-22
• 第二部分：FTY720增強荷瘤小鼠的髓外造血和MDSC的累積22-40
• 1.1 引言22
• 1.2 材料22-23
• 1.2.1 實驗動物22-23
• 1.2.2 細胞系23
• 1.2.3 儀器23
• 1.2.4 試劑23
• 1.3 方法23-29
• 1.3.1 AOM+DSS聯(lián)合誘導的UC相關大腸癌小鼠模型的建立23
• 1.3.2 CT26和B16移植瘤模型的建立23
• 1.3.3 FTY720或S1PR激動/拮抗劑給藥途徑劑量的確定23
• 1.3.4 病理和免疫組化23-24
• 1.3.5 FACS檢測脾臟、骨髓中c-kit+的表達含量24-25
• 1.3.6 小鼠直結腸上皮細胞的分離25
• 1.3.7 小鼠結直腸固有層細胞分離25
• 1.3.8 小鼠外周血中MDSC的檢測25
• 1.3.9 小鼠脾臟中MDSC的檢測25-26
• 1.3.10小鼠骨髓中MDSC的檢測26
• 1.3.11小鼠腸道部位MDSC的檢測26
• 1.3.12 FACS分選脾臟、骨髓、結腸部位的MDSC26-27
• 1.3.13 磁珠分選脾臟、骨髓、結腸部位的MDSC27
• 1.3.14 實時定量PCR(Quantitative RT-PCR)27-28
• 1.3.15 全血細胞計數(shù)28
• 1.3.16 高效液相色譜檢測腸培養(yǎng)上清中28
• 1.3.17 統(tǒng)計分析28-29
• 1.4 結果29-38
• 1.4.1 FTY720增強荷瘤小鼠的髓外造血29-31
• 1.4.2 CAC小鼠外周血中MDSC數(shù)量的檢測31-34
• 1.4.3 在CAC模型上口服FTY720對MDSC累積的影響34-38
• 1.4.4 FT720上調MDSC中i NOS2表達38
• 1.5 討論38-40
• 第三部分：FTY720通過促進GM-CSF的分泌增強髓外造血和MDSC累積40-52
• 1.1 引言40
• 1.2 材料40
• 1.2.1 實驗動物40
• 1.2.2 儀器40
• 1.2.3 試劑40
• 1.3 方法40-42
• 1.3.1 AOM+DSS聯(lián)合誘導的UC相關大腸癌小鼠模型的建立40-41
• 1.3.2 FTY720或S1PR激動/拮抗劑給藥途徑劑量的確定41
• 1.3.3 病理和免疫組化41
• 1.3.4 小鼠外周血、脾臟、骨髓以及結腸部位MDSC的檢測41
• 1.3.5 磁珠分選脾臟、骨髓、結腸部位的MDSC41
• 1.3.6 實時定量PCR(Quantitative RT-PCR)41
• 1.3.7 S1P以及S1PR激動劑或拮抗劑對G-MDSC的體外刺激試驗41
• 1.3.8 GM-CSF中和抗體體內阻斷FTY720效應41
• 1.3.9 酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）41-42
• 1.3.10 統(tǒng)計分析42
• 1.4 結果42-51
• 1.4.1 GM-CSF是聯(lián)系FTY720與髓外造血MDSC累積的關鍵因子42-45
• 1.4.2 S1P與S1PR3結合促進G-MDSC釋放GM-CSF45-48
• 1.4.3 S1PR3選擇性激動劑cym5541增強荷瘤小鼠髓外造血和MDSC累積48-50
• 1.4.4 S1PR3選擇性激動劑cym5541可促進移植瘤小鼠的髓外造血和MDSC的累積50-51
• 1.5 討論51-52
• 小結52-56
• 參考文獻56-60
• 綜述60-66
• 參考文獻63-66
• 攻讀學位期間主要的研究成果66-67
• 致謝67-69

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 王莉;梅銘惠;孫煦化;陳紅松;張恒輝;;轉錄因子Foxp3在腫瘤免疫微環(huán)境中的作用[J];山東醫(yī)藥;2010年52期

2 蘭志偉;趙浩亮;賀杰峰;張志強;;胸腺五肽對大鼠肝癌免疫微環(huán)境中T細胞及其亞群的影響[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2014年06期

3 張磊昌;陳利生;張森;龍軍先;黃永紅;鐘武;高楓;曹云飛;;CD4~+IL-9~+細胞在大腸癌免疫微環(huán)境中的分布及臨床意義[J];中華腫瘤防治雜志;2014年06期

4 張志強;賀杰峰;張瑜;蘭志偉;趙浩亮;;大鼠肝癌免疫微環(huán)境中Treg與IL-10水平的變化及意義[J];當代醫(yī)學;2014年04期

5 樓姣英;曹穎;金哲;;中藥對SiHa-CTL-Treg共培養(yǎng)體系中CTL細胞CTLA-4、PD-1蛋白的影響[J];北京中醫(yī)藥大學學報;2014年04期

6 于妍妍;曹穎;金哲;林彤;;清毒栓對高危型HPV感染患者陰道免疫微環(huán)境調節(jié)作用的研究[J];北京中醫(yī)藥;2014年08期

7 何浪;宋海星;曾順澤;彭果;鄭廣榮;張俊剛;姜青貴;王丹;;乳腺癌外周血單個核細胞與間質免疫微環(huán)境的關系研究[J];免疫學雜志;2012年06期

8 ;[J];;年期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 丁怡慧;張鍇;胡悅;劉莉;;肺癌免疫微環(huán)境中的腫瘤相關巨噬細胞[A];中國腫瘤內科進展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

2 陳紅松;;肝癌免疫微環(huán)境與肝癌聯(lián)合免疫治療[A];中華醫(yī)學會第十六次全國病毒性肝炎及肝病學術會議論文匯編[C];2013年

3 賈友超;臧愛民;商琰紅;楊華;宋子正;王志宇;;惡性腫瘤免疫微環(huán)境中Th22細胞研究進展[A];中國腫瘤內科進展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

4 周闖;董瓊珠;周海軍;王驥;賈戶亮;欽倫;;基于癌周免疫微環(huán)境的預測模型的建立與驗證[A];第十三屆中國科協(xié)年會第18分會場-癌癥流行病趨勢和防控策略研討會論文集[C];2011年

5 樓姣英;金哲;;宮頸HR-HPV感染與局部免疫微環(huán)境的關系[A];全國中西醫(yī)結合生殖系統(tǒng)炎癥性疾病專題學術會議論文及摘要集[C];2013年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 陳龍;SLC-CCR7信號軸在肝癌免疫微環(huán)境中的作用機制研究[D];復旦大學;2014年

2 燕翔;NSCLC免疫微環(huán)境及全身免疫狀況對預后的影響研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2012年

3 高強;免疫微環(huán)境與肝細胞癌復發(fā)轉移及“免疫微環(huán)境分子預測模型”的建立與驗證[D];復旦大學;2008年

4 劉含智;腫瘤轉移的免疫生物學機制和免疫治療[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 李媛媛;FTY720對腫瘤免疫微環(huán)境的調節(jié)作用及其機制研究[D];河南大學;2015年

2 楊柳曉;腫瘤浸潤淋巴細胞與肝癌預后及其與“免疫微環(huán)境分子預測模型”的關系[D];復旦大學;2009年

3 蘭志偉;胸腺五肽對大鼠肝癌免疫微環(huán)境中T細胞亞群和DC細胞的影響[D];山西醫(yī)科大學;2014年

4 黃博;乙型肝炎病毒載量與抗病毒治療對肝癌免疫微環(huán)境及預后的影響[D];第二軍醫(yī)大學;2012年

5 張志強;大鼠肝癌免疫微環(huán)境中Treg細胞與TGF-β1、IL-10水平的相關性分析[D];山西醫(yī)科大學;2014年

6 劉立;胰腺癌免疫微環(huán)境與臨床病理的關系及對預后的影響[D];鄭州大學;2011年

，

本文編號：713073