本文關鍵詞：amorfrutin A對NF-κB和STAT3雙重信號通路作用機制研究

  更多相關文章： NF-κB STAT3 炎癥 腫瘤 amorfrutin A

【摘要】：NF-κB和STAT3是聯(lián)系炎癥和癌癥的兩個主要轉錄因子,調控許多生理病理過程,如炎癥、免疫、腫瘤發(fā)生發(fā)展、增殖、凋亡、周期、侵襲和血管生成。在靜息的細胞中的NF-κB和STAT3主要存在于細胞質中,當受到適當的外界刺激如TNF-α、IL.6、LPS和EGF等,NF-κB和STAT3就會被激活,活化后的NF-κB和STAT3進入細胞核與DNA結合介導下游基因的表達。NF-κB和STAT3調控的靶基因具有高度的重疊性。amorfrutinA是從豆科灌木紫穗槐的果實中提取出的天然小分子化合物,已報道結合核受體PPARγ能改善胰島素的耐藥性、及其他的代謝和炎癥參數,而不會引起脂肪積累和其他副作用如肝毒性。雖然amorfrutin A有良好的抗糖尿病作用,然而對于NF-κB和STAT3介導的抗炎抗腫瘤作用機制尚不明確。本文就amorfrutin A在NF-κB和STAT3作用機制及其靶基因方面進行了研究.結果發(fā)現(xiàn)：amorfrutin A抑制NF-κB的活化是通過抑制TNF-α誘導的IκBα的磷酸化及降解,從而抑制p65的核易位及NF-κB結合DNA的活性等途徑實現(xiàn)的。同時也發(fā)現(xiàn)amorfrutin A是STAT3的一個抑制劑,amorfrutin A抑制TNF-a誘導的p-STAT3(Tyr705和Ser727)和STAT3的核易位及STAT3的分子伴侶HSP90α/β。進一步的研究發(fā)現(xiàn)amorfrutin A抑制STAT3的活化與其抑制JAK2/STAT3和ERK這兩個信號通路相關。接著我們又檢測了amorfrutin A對 NF-κB和STAT3下游靶基因的影響,結果表明amorfrutin A劑量型的下調TNF-α誘導的抗凋亡蛋白(Bcl2.Bcl-xL.c-IAP1、c-IAP2、survivin、XIAP.FLIP)、增殖相關蛋白(COX-2)、入侵和遷移相關蛋白(MMP-9.ICAM-1、vimentin)、血管生成蛋白(VEGF)的表達；并抑制主要的炎性細胞因子TNF-α、IL-6、IL-8和MCP-1的mRNA表達。細胞集落形成實驗和MTT都進一步證明了amorfrutin A能夠抑制增殖。而且amorfrutin A能夠促進TNF-α誘導的凋亡,并提高TNF-α誘導的caspase-3和PARP的蛋白水解過程。此外amorfrutin A劑量型地逆轉TNF-a誘導的G1/S期轉變,導致細胞停滯在G1期。同時抑制TNF-α誘導細胞周期進程正調控蛋白cyclin D1,c-Myc,Skp2的表達,并且上調細胞周期進程負調控蛋白p53,p21,p27的表達；PCR實驗結果進一步表明amorfrutin A在轉錄水平上抑制cyclinD1, c-Myc的表達�？傊覀兊难芯拷Y果表明amorfrutin A有望用于治療NF-κB和STAT3異常活化引起的炎性疾病和癌癥。
【關鍵詞】：NF-κB STAT3 炎癥 腫瘤 amorfrutin A
【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.2
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 縮略詞簡表10-15
• 第一章 前言15-22
• 1.1 炎癥和腫瘤15
• 1.2 NF-κB15-18
• 1.2.1 NF-κB的簡介15-16
• 1.2.2 NF-κB的活化16-17
• 1.2.3 NF-κB與炎癥17
• 1.2.4 NF-κB與腫瘤17-18
• 1.3 STAT318-20
• 1.3.1 STAT3的簡介18
• 1.3.2 STAT3的活化18-19
• 1.3.3 STAT3與炎癥19
• 1.3.4 STAT3與腫瘤19-20
• 1.4 NF-κB與STAT320-21
• 1.5 amorfrutin A21-22
• 第二章 材料與方法22-38
• 2.1 材料22-27
• 2.1.1 細胞系及來源22
• 2.1.2 藥物22
• 2.1.3 試劑及抗體22-25
• 2.1.4 儀器25-27
• 2.2 實驗方法27-38
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)27
• 2.2.2 amorfrutin A濃度配置27
• 2.2.3 通過Luciferase reporter assay檢測amofrutin A對NF-κB和STAT的轉錄活性的影響27-28
• 2.2.4 MTT法檢測細胞毒性28
• 2.2.5 細胞集落形成實驗28
• 2.2.6 Western blot法28-32
• 2.2.7 免疫熒光法檢測p65和STAT3的核易位32
• 2.2.8 EMSA法32-34
• 2.2.9 RNA提取及PCR34-37
• 2.2.10 細胞凋亡37
• 2.2.11 細胞周期37-38
• 第三章 結果38-57
• 3.1 amorfutin A對NF-κB信號通路的影響38-42
• 3.1.1 Luciferase reporter assay檢測結果38
• 3.1.2 MTT實驗結果38-39
• 3.1.3 Western blot檢測結果39-40
• 3.1.4 免疫熒光實驗檢測結果40
• 3.1.5 EMSA檢測結果40-41
• 3.1.6 討論41-42
• 3.1.7 結論42
• 3.2 amorfrutin A作用于STAT3信號通路研究42-47
• 3.2.1 Luciferase reporter assay檢測結果42
• 3.2.2 Western blot法檢測pSTAT3和STAT342-43
• 3.2.3 免疫熒光實驗檢測結果43
• 3.2.4 Western blot實驗檢測STAT3分子伴侶HSP9043-44
• 3.2.5 Western blot實驗檢測STAT3的上游信號通路44-46
• 3.2.6 討論46-47
• 3.2.7 結論47
• 3.3 amorfrutin A對NF-κB和STAT3下游基因的影響47-57
• 3.3.1 Western blot法檢測抗凋亡、增殖、遷移、血管生成等蛋白質的表達47-48
• 3.3.2 PCR法檢測炎性細胞因子和趨化因子48-49
• 3.3.3 細胞增殖實驗49-50
• 3.3.4 細胞凋亡實驗50-52
• 3.3.5 細胞周期實驗52-54
• 3.3.6 討論54-55
• 3.3.7 結論55-57
• 第四章 結論57-58
• 參考文獻58-64
• 致謝64

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本文編號：708822