本文關(guān)鍵詞：Ad-pre-microRNA-193b重組腺病毒的構(gòu)建及其抗白血病效應(yīng)探討

  更多相關(guān)文章： miR-193b K562細(xì)胞 bcr/abl caspase-3

【摘要】：目的構(gòu)建microRNA-193b (miR-193b)前體Ad-pre-miR-193b重組腺病毒載體,并鑒定其在慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株K562中的表達(dá)水平,進(jìn)一步探討高效表達(dá)miR-193b對(duì)K562細(xì)胞的抑制效應(yīng)及其作用機(jī)制,為后續(xù)研究miR-193b在CML動(dòng)物模型中的抗白血病效應(yīng)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1.化學(xué)合成miR-193b cDNA序列,克隆進(jìn)入pAdTrack-CMV穿梭質(zhì)粒,經(jīng)Pme I酶切線性化后轉(zhuǎn)入含腺病毒骨架質(zhì)粒pAdEasy-1的大腸桿菌BJ5183感受態(tài)中進(jìn)行同源重組,獲得pAd-miR-193b重組腺病毒質(zhì)粒,再經(jīng)PacI線性化后轉(zhuǎn)入HEK293細(xì)胞中包裝、擴(kuò)增。收集病毒后感染K562細(xì)胞(設(shè)為Ad-pre-miR-193b組),同時(shí)設(shè)空白組(K562細(xì)胞組)及空載病毒組(Ad組),采用QRT-PCR檢測(cè)K562細(xì)胞中miR-193b基因的表達(dá)水平。2.經(jīng)鑒定的Ad-pre-miR-193b重組腺病毒感染K562細(xì)胞,同時(shí)設(shè)空白組(K562細(xì)胞組)及空載病毒組(Ad組),采用QRT-PCR檢測(cè)miR-193b基因的表達(dá)水平；QRT-PCR和Western Blot分別檢測(cè)bcr/abl融合基因、BCR/ABL融合蛋白的表達(dá)水平；CCK-8法檢測(cè)K562細(xì)胞的增殖情況,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)K562細(xì)胞凋亡率。3.經(jīng)鑒定的Ad-pre-miR-193b重組腺病毒感染K562細(xì)胞后,采用Western Blot檢測(cè)凋亡蛋白caspase-3的表達(dá)水平。結(jié)果1. pAdTrack-CMV-pre-miR-193b重組穿梭質(zhì)粒和pAd-pre-miR-193b重組腺病毒質(zhì)粒經(jīng)限制性內(nèi)切酶鑒定及測(cè)序分析顯示構(gòu)建成功；重組腺病毒質(zhì)粒在HEK293細(xì)胞中包裝成功,并能夠高效轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞；與對(duì)照組相比,QRT-PCR檢測(cè)顯示重組腺病毒載體感染K562細(xì)胞后其miR-193b基因表達(dá)水平明顯增加(P0.01)。2.與對(duì)照相比,K562細(xì)胞在感染Ad-pre-miR-193b重組腺病毒后,其miR-193b表達(dá)水平顯著升高；bcr/abl融合基因及BCR/ABL蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào)(P0.05)；K562細(xì)胞增殖能力降低(P0.05)；K562細(xì)胞凋亡水平明顯上升(P＜0.05), caspase-3表達(dá)水平增高(P0.01)。結(jié)論1.成功構(gòu)建Ad-pre-miR-193b重組腺病毒,并能高效感染K562細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)miR-193b基因在細(xì)胞內(nèi)的高效表達(dá)。2.高效表達(dá)的]miR-193b可下調(diào)慢粒白血病bcr/abl融合基因和BCR/ABL融合蛋白的表達(dá)水平,抑制K562細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng),提示高效表達(dá)miR-193b可成為治療CML的有效靶點(diǎn),其作用機(jī)制可能通過(guò)上調(diào)凋亡蛋白caspase-3的表達(dá),從而抑制K562細(xì)胞增殖,促進(jìn)其凋亡。
【關(guān)鍵詞】：miR-193b K562細(xì)胞 bcr/abl caspase-3
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.7
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 第一部分 Ad-pre-miR-193b重組腺病毒的構(gòu)建及其表達(dá)鑒定15-32
• 1 材料與方法15-26
• 2 結(jié)果與分析26-30
• 3 討論30-32
• 第二部分 Ad-pre-miR-193b重組腺病毒的抗白血病效應(yīng)檢測(cè)及其機(jī)制探討32-44
• 1 材料與方法32-38
• 2 結(jié)果與分析38-42
• 3 討論42-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 全文總結(jié)47-48
• 文獻(xiàn)綜述48-56
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 致謝56-57
• 攻讀碩士研究生期間發(fā)表的文章57

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 程雁,張?jiān)伳?構(gòu)建雙重組腺病毒的新載體[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊(cè);2000年03期

2 黃盛東,張寶仁,梅舉,李白翎;人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-D的重組腺病毒制備與鑒定[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2000年05期

3 趙小東,韓峰,王艷,楊貴賓,應(yīng)革,林勇平,王璇,吳淑華;表達(dá)流感病毒神經(jīng)氨酸酶基因的重組腺病毒的構(gòu)建[J];中國(guó)病毒學(xué);2003年03期

4 陸巍,鄭樹;聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)重組腺病毒方法的建立及評(píng)價(jià)[J];中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2004年12期

5 張梅,何金生,朱梅,汪紅俊;重組腺病毒方法的改建[J];中國(guó)公共衛(wèi)生;2005年01期

6 孟舒;曹江;黃盛東;秦永文;;人血管生成素相關(guān)蛋白2重組腺病毒制備[J];中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志;2006年04期

7 吳小兵,董小巖,伍志堅(jiān),屈建國(guó),侯云德;一種快速高效分離和純化重組腺病毒伴隨病毒載體的方法[J];科學(xué)通報(bào);2000年19期

8 何金生,王健偉,溫樂(lè)英,洪濤;一種快速構(gòu)建重組腺病毒的簡(jiǎn)便方法[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2002年01期

9 劉靜杰;攜帶編碼人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165的重組腺病毒能促進(jìn)傷口愈合[J];中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué);2002年07期

10 趙軍,馮躍,孟榮貴,黃盛東;雙自殺基因融合基因重組腺病毒的制備與鑒定[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 梁紹燕;金先慶;羅慶;;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子的克隆及其重組腺病毒的構(gòu)建[A];中國(guó)西南地區(qū)第九屆小兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

2 熊俊;孫擎;胡凱猛;冀凱宏;劉厚奇;;重組腺病毒pAdEasy-1/pAdTrack-CMV-hSnaill質(zhì)粒的構(gòu)建[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

3 張春紅;黃忠;阮良基;曹漢威;;含豬生長(zhǎng)激素基因的重組腺病毒的構(gòu)建[A];第一屆中國(guó)養(yǎng)豬生產(chǎn)和疾病控制技術(shù)大會(huì)——2005中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2005年

4 李玉峰;姜平;;豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白重組腺病毒的構(gòu)建與鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2003年

5 李巧;王志剛;冉海濤;鐘世根;李興升;;載重組腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α的超聲造影劑的制備以及超聲輻照對(duì)腺病毒活性的影響[A];中國(guó)超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第八屆全國(guó)腹部超聲學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

6 胡波;王芳;;兔病毒性出血癥病毒結(jié)構(gòu)基因在重組腺病毒系統(tǒng)中的表達(dá)和鑒定[A];2007中國(guó)兔文化節(jié)“康大杯”兔業(yè)優(yōu)秀科技論文、科普作品集[C];2007年

7 靳繼德;劉鋮;哈小琴;李元敏;吳祖澤;;攜帶人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因的重組腺病毒對(duì)大鼠局灶性腦缺血治療的實(shí)驗(yàn)研究[A];全面建設(shè)小康社會(huì)：中國(guó)科技工作者的歷史責(zé)任——中國(guó)科協(xié)2003年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（上）[C];2003年

8 祝成亮;魯敏翔;胡漢寧;劉芳;周新;;熱休克蛋白72重組腺病毒包裝及其對(duì)細(xì)胞凋亡的影響[A];第四屆全國(guó)血脂分析與臨床學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第九屆全國(guó)脂蛋白學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

9 郭浩;彭毅志;辛海明;;小鼠CCR7基因重組腺病毒的構(gòu)建與鑒定[A];第八屆西南五省一市燒傷整形學(xué)術(shù)會(huì)議暨貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)燒傷整形分會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2010年

10 徐琳;陳杰;麻曉峰;高下;;構(gòu)建人pAdeasy-NT3-DsRed2融合基因重組腺病毒[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下）[C];2007年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 吳一福;重組腺病毒核糖核酸酶載體問(wèn)世[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李凱;漢灘病毒多組分新型重組腺病毒的制備及免疫學(xué)特性研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

2 陳漉;特異性抗腫瘤重組腺病毒抑癌作用研究[D];吉林大學(xué);2009年

3 李文輝;基于重組腺病毒的狂犬病毒基因工程疫苗研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2001年

4 陶陶;重組腺病毒HIF-1α基因治療腦缺血的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

5 馬臻;HBV X-HCV C融合基因重組腺病毒的構(gòu)建及對(duì)肝細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2006年

6 周繼章;雞源鸚鵡熱衣原體主要外膜蛋白（MOMP）基因重組腺病毒活載體疫苗研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

7 王瀾;重組腺病毒介導(dǎo)人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因?qū)盒阅[瘤生物治療的臨床前研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

8 梁蔚芳;聚乙二醇化干擾素α-2a與干擾素α-2a在體內(nèi)和體外的抗乙型肝炎病毒活性研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2007年

9 張林;SCL轉(zhuǎn)基因聯(lián)合SCF促Cajal間質(zhì)細(xì)胞恢復(fù)的在體實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

10 張?jiān)漆?Ad5/F35-APE1 siRNA重組腺病毒聯(lián)合光動(dòng)力療法對(duì)非小細(xì)胞肺癌治療作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 薛曉娟;表達(dá)水泡性口炎病毒G蛋白重組腺病毒的構(gòu)建與免疫原性分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 許晗;共表達(dá)PCV2 Cap蛋白和免疫增強(qiáng)因子InvC重組腺病毒甚因工程疫苗的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

3 羅麗蕓;hAIF-1重組腺病毒對(duì)A549細(xì)胞增殖和遷移的影響[D];南京師范大學(xué);2015年

4 孫慧玲;基于IGF2基因組印跡丟失的5型重組腺病毒靶向治療結(jié)直腸癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京師范大學(xué);2015年

5 夏迪;重組腺病毒Ad-Dectin-1轉(zhuǎn)染小鼠肺泡巨噬細(xì)胞及其在煙曲霉感染中的作用[D];南京大學(xué);2015年

6 舒燕;Ad-pre-microRNA-193b重組腺病毒的構(gòu)建及其抗白血病效應(yīng)探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

7 劉凱;乙腦E基因和豬白細(xì)胞介素6基因重組腺病毒的構(gòu)建與初步免疫研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

8 唐丹;嗜肝細(xì)胞重組腺病毒基因治療載體的構(gòu)建[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

9 焦月盈;表達(dá)人呼吸道合胞病毒結(jié)構(gòu)蛋白的重組腺病毒及桿狀病毒的構(gòu)建與鑒定[D];北京交通大學(xué);2011年

10 邱亞;重組腺病毒rhAdEasy-nm23-H1的構(gòu)建與鑒定及體外表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2006年

，

本文編號(hào)：708625