本文關(guān)鍵詞：MiR-3665、miR-375和miR-4530在食管鱗狀細(xì)胞癌中甲基化及其與預(yù)后的研究

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【摘要】：目的通過檢測食管鱗癌患者癌組織與癌旁組織中hsa-mi R-3665、hsa-mi R-375和hsami R-4530基因啟動子區(qū)的甲基化水平,來探討hsa-mi R-3665、hsa-mi R-375和hsami R-4530分別與食管鱗癌患者的臨床資料及預(yù)后的關(guān)系,找出影響食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后相關(guān)的micro RNA,為食管鱗癌預(yù)后判斷提供依據(jù)。方法1、收集145例2012年07月至2014年07月福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院、漳州市第一醫(yī)院和安溪縣醫(yī)院就診的食管鱗狀細(xì)胞癌患者的新鮮癌組織與癌旁組織(距離癌組織3cm),以及相應(yīng)的臨床資料和隨訪資料,隨訪時(shí)間至2015年05月09日止。2、設(shè)計(jì)hsa-mi R-3665、hsa-mi R-375和hsa-mi R-4530基因甲基化引物,采用甲基化敏感性高分辨率溶解曲線檢測上述食管鱗癌患者的癌組織與癌旁組織的甲基化水平。結(jié)合上述臨床資料和隨訪資料,找出與食管鱗癌患者臨床參數(shù)及預(yù)后有關(guān)的micro RNA。3、MTT法測定濃度為5μM、10μM、20μM、50μM和100μM的EGCG作用后Eca109細(xì)胞生長情況,運(yùn)用析因分析其與濃度、時(shí)間關(guān)系;以濃度為20μM的EGCG作用食管癌Eca109細(xì)胞,實(shí)時(shí)定量RT-PCR測定篩出的micro RNA表達(dá)量,檢測20μM EGCG與甲基化抑制劑1μM DAC兩者的甲基化水平。結(jié)果1、設(shè)計(jì)出四對相應(yīng)的甲基化引物,其中hsa-mi R-3665(2)中甲基化水平高的癌組織相應(yīng)的癌旁組織甲基化水平也高,關(guān)聯(lián)性分析得出差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c2=14.800,P=0.022)。2、與臨床資料的比較,臨床參數(shù)中TNM分期與hsa-mi R-3665(2)甲基化水平有關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.024),大多患者處于TNM分期II期和III期且甲基化水平處于50%~100%之間;殘端受侵、TNM分期、術(shù)后感染、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與hsa-mi R-375甲基化水平有關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.024,P=0.016,P0.001和P=0.017),無殘端受侵、無術(shù)后感染、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比有殘端受侵、有術(shù)后感染、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者多且甲基化水平高,TNM分期情況同hsa-mi R-3665(2);而食管鱗癌患者浸潤程度、殘端受侵、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與hsa-mi R-4530甲基化水平有關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.026,P=0.038和P=0.015),大多患者處于浸潤程度T3且甲基化水平處于0%~50%,殘端受侵、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移甲基化情況與hsa-mi R-375相同。3、hsa-mi R-3665(2)和hsa-mi R-375中各甲基化水平組間two-stage檢驗(yàn)結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(TSPV=0.014,TSPV0.001)。進(jìn)行COX多因素回歸模型分析結(jié)果顯示:mi R-4530甲基化水平與預(yù)后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.040)。4、EGCG在不同作用時(shí)間和不同作用濃度下,對食管癌細(xì)胞抑制情況不同。實(shí)時(shí)定量RT-PCR顯示作用48 h和72 h后,EGCG和DAC的hsa-mi R-3665(2)表達(dá)上調(diào),甲基化水平的檢測結(jié)果也顯示與對照相比兩者在48 h和72 h時(shí)甲基化水平均降低。結(jié)論1、hsa-mi R-3665在食管鱗癌癌組織與癌旁組織的甲基化水平存在關(guān)聯(lián)性,且甲基化水平高的癌組織相應(yīng)的癌旁組織甲基化水平也高。2、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌hsa-mi R-375和hsa-mi R-4530甲基化水平比有轉(zhuǎn)移的高。hsa-mi R-3665(2)和hsa-mi R-375與TNM分期有關(guān),大多患者在TNM分期II期和III期且甲基化水平處于50%~100%。hsa-mi R-4530甲基化水平與浸潤程度有關(guān),大多患者在浸潤程度T3且甲基化水平處于0%~50%。無殘端受侵的食管鱗癌hsa-mi R-375和hsa-mi R-4530比有殘端受侵患者多且甲基化水平高,無術(shù)后感染的食管鱗癌hsa-mi R-375比有術(shù)后感染患者多且甲基化水平高。3、hsa-mi R-3665(2)、hsa-mi R-375和mi R-4530甲基化水平可能是影響食管鱗癌預(yù)后的表觀遺傳學(xué)因素。4、EGCG在不同作用時(shí)間和不同作用濃度下,對食管癌細(xì)胞抑制情況不同,其作用機(jī)制可能與hsa-mi R-3665啟動子區(qū)甲基化水平有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：食管鱗狀細(xì)胞癌 microRNAs 甲基化 表沒食子兒茶素沒食子酸酯 預(yù)后
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 英漢縮略詞表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-28
• 1 材料13-15
• 1.1 組織與細(xì)胞來源13
• 1.2 試劑與器材13-15
• 2 方法15-28
• 2.1 隨訪研究15-22
• 2.2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)22-28
• 結(jié)果28-57
• 1 隨訪研究28-48
• 1.1 食管鱗癌患者臨床資料的一般情況28-30
• 1.2 食管鱗癌患者隨訪情況30-31
• 1.3 甲基化引物設(shè)計(jì)31-32
• 1.4 食管鱗癌標(biāo)準(zhǔn)品甲基化情況32-35
• 1.5 食管鱗癌癌組織與癌旁組織甲基化水平比較35-40
• 1.6 食管鱗癌患者microRNA甲基化水平與臨床資料的比較40-46
• 1.7 MicroRNA甲基化水平與食管鱗癌預(yù)后的單因素分析46-47
• 1.8 MicroRNA甲基化水平與食管鱗癌預(yù)后的多因素分析47-48
• 2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)48-57
• 2.1 MTT法檢測食管癌細(xì)胞的抑制率48-53
• 2.2 測定 20μM EGCG和 1μM DAC處理后microRNA表達(dá)量53
• 2.3 檢測 20μM EGCG和 1μM DAC處理后microRNA甲基化水平53-57
• 討論57-61
• 結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 綜述 166-74
• 參考文獻(xiàn)71-74
• 綜述 274-85
• 參考文獻(xiàn)81-85
• 致謝85

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本文編號：705747