本文關(guān)鍵詞：Bmi1干性肝癌細(xì)胞系的鑒定及其對(duì)肝癌膽管細(xì)胞樣表型轉(zhuǎn)變的影響

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【摘要】：研究背景和目的:肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)在全球范圍內(nèi)具有極差的預(yù)后,這與肝癌極其復(fù)雜的腫瘤異質(zhì)性密切相關(guān)。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn),肝癌的腫瘤異質(zhì)性主要由腫瘤細(xì)胞的干性分子決定,腫瘤細(xì)胞干性分子的表達(dá)決定了腫瘤的生物學(xué)特性,包括腫瘤細(xì)胞的增殖活性、侵襲轉(zhuǎn)移能力、化療抵抗以及對(duì)不同臨床治療方式產(chǎn)生的反應(yīng)。因此,如何對(duì)腫瘤不同的干性特征進(jìn)行界定,可以為腫瘤異質(zhì)性提供理論基礎(chǔ),為腫瘤臨床的個(gè)體化治療及復(fù)發(fā)防治提供指導(dǎo)和策略。我們前期研究發(fā)現(xiàn),慢性肝臟疾病背景下肝前體細(xì)胞(Hepatic progenitor cell,HPC)活化與術(shù)后混合型肝癌的復(fù)發(fā)和預(yù)后顯著相關(guān),腫瘤的癌旁膽管反應(yīng)(Ductular reaction,DR)的增殖狀態(tài)(Proliferative index of ductular reaction,PIDR)與肝臟中肝前體細(xì)胞的活化具有顯著的正相關(guān)性,HPC活化可影響腫瘤內(nèi)一系列干性指標(biāo)(EpCAM、CK7、CK19等)的表達(dá)(Hepatology,2012),提示癌旁的干性特征可影響到腫瘤的異質(zhì)性。因此,對(duì)癌及癌旁的干性特征進(jìn)行界定,對(duì)于臨床預(yù)后判斷及分子分型具有重要意義。我們進(jìn)一步在肝細(xì)胞癌和混合型肝癌的研究中還發(fā)現(xiàn),腫瘤內(nèi)協(xié)同出現(xiàn)EpCAM、Bmi1、CK7、CK19、Twist等干性分子表達(dá)時(shí),隨著這些干性分子表達(dá)數(shù)量的增加,腫瘤可表現(xiàn)出更高的惡性程度,患者的預(yù)后更差,而對(duì)應(yīng)的腫瘤癌旁的PIDR、HPC也出現(xiàn)了更高的活化。提示這些分子表達(dá)的多少及數(shù)量可能影響到腫瘤的異質(zhì)性,并可將它們作為預(yù)后判斷及分子分型的重要依據(jù)。我們?cè)谀[瘤復(fù)發(fā)過(guò)程中也發(fā)現(xiàn)相似的結(jié)果。在腫瘤復(fù)發(fā)行多次手術(shù)的患者中,部分患者初次手術(shù)時(shí)腫瘤表現(xiàn)為Bmi1及EpCAM等多種干性分子共同表達(dá)的特征,其癌旁HPC活化顯著增強(qiáng)。令人感興趣的是,患者復(fù)發(fā)行二次手術(shù)時(shí),腫瘤惡性程度與上述共表達(dá)干性分子密切相關(guān),有些患者還可出現(xiàn)病理類型的轉(zhuǎn)變,即由肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)變?yōu)槟懝芗?xì)胞癌或混合型肝細(xì)胞-膽管細(xì)胞癌。此外,我們研究還發(fā)現(xiàn)癌旁膽管反應(yīng)的增殖指數(shù)與干性分子bmi1的表達(dá)具有相關(guān)性,說(shuō)明bmi1可在某種程度上影響hpc的活化狀態(tài),在hcc的發(fā)生發(fā)展中可能具有重要作用。鑒于此,本課題主要對(duì)上述研究中的關(guān)鍵分子bmi1在肝癌中的作用進(jìn)行深入研究。干性分子bmi1廣泛參與細(xì)胞的增殖與分化,調(diào)控細(xì)胞衰老,從而改變細(xì)胞的生物學(xué)特性,并與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。近年來(lái),相關(guān)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)bmi1能夠通過(guò)介導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymaltransition,emt)的發(fā)生促進(jìn)乳腺癌、鼻咽癌及前列腺癌等多種實(shí)體腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移,從而影響患者的預(yù)后。那么,在高轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)率,較差的臨床預(yù)后的肝細(xì)胞癌中,干性分子bmi1與hcc的侵襲轉(zhuǎn)移是否相關(guān)呢,其具體作用及機(jī)制尚未明確,成為近年來(lái)研究肝癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后的一個(gè)熱點(diǎn)。我們前期在對(duì)混合型肝癌的研究中發(fā)現(xiàn),癌旁hpc的活化與腫瘤內(nèi)ck7、ck19的表達(dá)呈正相關(guān),說(shuō)明了hpc活化激活了腫瘤內(nèi)前體細(xì)胞/膽管細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá),使肝癌細(xì)胞獲得前體細(xì)胞/膽管細(xì)胞樣表型。另有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)hnf-1β能夠使肝癌細(xì)胞獲得但管細(xì)胞樣表型,表達(dá)膽管上皮標(biāo)記物ck7及ck19,導(dǎo)致較差的預(yù)后,并且可能與患者術(shù)后病理亞型發(fā)生轉(zhuǎn)變相關(guān)。肝細(xì)胞癌,特別是一小部分肝癌亞型,能夠同時(shí)表達(dá)肝細(xì)胞標(biāo)記物及膽管細(xì)胞標(biāo)記物,而我們?cè)谂R床上也觀察到某些肝癌在術(shù)后復(fù)發(fā)可表現(xiàn)為不同的病理亞型,但是其中的具體機(jī)制尚未明確,成為我們本課題研究的一個(gè)方向。因此,本課題旨在分析:1.bmi1干性表達(dá)肝癌細(xì)胞系的功能鑒定及其機(jī)制研究;2.不同干性分子表達(dá)huh7肝癌細(xì)胞系的鑒定及其對(duì)肝癌膽管細(xì)胞樣表型轉(zhuǎn)變的影響。通過(guò)上述研究,以期對(duì)肝癌復(fù)雜的腫瘤異質(zhì)性及對(duì)腫瘤病理類型轉(zhuǎn)變的機(jī)制進(jìn)行更深入的探討。研究方法及結(jié)果:第一部分:bmi1干性表達(dá)肝癌細(xì)胞系的功能鑒定及其機(jī)制研究。采用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建肝癌細(xì)胞系huh7及肝臟正常細(xì)胞系l02bmi1過(guò)表達(dá)細(xì)胞株以及肝癌細(xì)胞系smmc-7721bmi1干擾細(xì)胞株,觀察細(xì)胞株的生物學(xué)特性及侵襲轉(zhuǎn)移能力的變化。采用cck-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞株的增殖活性,5-fu處理后檢測(cè)細(xì)胞株化療耐藥性,克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞集落形成能力,劃痕及transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力。侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制研究中,利用real-timepcr與western-blot及細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測(cè)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程中的分子標(biāo)記物e-cadherin及vimentin的變化。結(jié)果顯示:1.干性分子bmi1能夠增強(qiáng)細(xì)胞株的增殖、耐藥性及克隆形成能力,改變細(xì)胞的生物學(xué)特性。2.過(guò)表達(dá)bmi1能夠增強(qiáng)細(xì)胞株的遷移侵襲性,real-timepcr與western-blot及細(xì)胞免疫熒光技術(shù)發(fā)現(xiàn)其機(jī)制可能是通過(guò)emt促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)移。干擾肝癌細(xì)胞系bmi1表達(dá)后則出現(xiàn)相反的結(jié)果。第二部分:不同干性分子表達(dá)huh7肝癌細(xì)胞系的鑒定及其對(duì)肝癌膽管細(xì)胞樣表型轉(zhuǎn)變的影響。采用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)分別構(gòu)建肝癌細(xì)胞系huh7bmi1高表達(dá)、epcam高表達(dá)及bmi1和epcam共高表達(dá)細(xì)胞株。采用cck-8、集落形成、transwell及裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞株的干性特征。利用western-blot技術(shù)檢測(cè)emt標(biāo)記物e-cadherin及vimentin的變化,同時(shí)檢測(cè)肝細(xì)胞標(biāo)記物hnf4a及前體細(xì)胞/膽管細(xì)胞標(biāo)記物ck19的表達(dá)情況。結(jié)果顯示:1.干性分子bmi1及epcam的表達(dá)能夠增強(qiáng)細(xì)胞的增殖、克隆形成及皮下成瘤能力,bmi1與epcam的共過(guò)表達(dá)可以明顯增強(qiáng)細(xì)胞的增殖、克隆形成及皮下成瘤能力。2.transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)bmi1細(xì)胞株與bmi1及epcam共過(guò)表達(dá)細(xì)胞株無(wú)顯著差異,但較過(guò)表達(dá)epcam細(xì)胞株具有明顯差異。進(jìn)一步用western-blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)emt標(biāo)記物證實(shí),過(guò)表達(dá)bmi1細(xì)胞株與bmi1及epcam共過(guò)表達(dá)細(xì)胞株發(fā)生emt,而過(guò)表達(dá)epcam細(xì)胞株并未出現(xiàn)此特征性改變。3.western-blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肝系膽系標(biāo)記物發(fā)現(xiàn),不同干性表達(dá)的huh7細(xì)胞株肝系標(biāo)記物hnf4a表達(dá)明顯下降,前體細(xì)胞/膽管細(xì)胞標(biāo)記物ck19表達(dá)顯著升高。結(jié)論:干性分子bmi1的表達(dá)能夠影響肝癌細(xì)胞的生物學(xué)特性,通過(guò)介導(dǎo)emt的發(fā)生促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。肝癌細(xì)胞內(nèi)不同干性分子的表達(dá)能夠增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的干性特征,干性分子激活越多,干性特征越強(qiáng)。細(xì)胞內(nèi)干性分子表達(dá)可使肝癌細(xì)胞獲得肝前體細(xì)胞/膽管細(xì)胞樣表型,能夠表達(dá)前體細(xì)胞/膽管細(xì)胞標(biāo)記物,可能與腫瘤復(fù)發(fā)病理亞型轉(zhuǎn)變相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞癌 Bmi1 干性 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 前體細(xì)胞/膽管細(xì)胞標(biāo)記物
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-12
• 第一部分 BMI1干性表達(dá)肝癌細(xì)胞系的功能鑒定及其機(jī)制研究12-34
• 前言12-14
• 實(shí)驗(yàn)方法14-20
• 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容20
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-28
• 討論28-30
• 參考文獻(xiàn)30-34
• 第二部分 不同干性分子表達(dá)HUH7肝癌細(xì)胞系的鑒定及其對(duì)肝癌膽管細(xì)胞樣表型轉(zhuǎn)變的影響34-47
• 前言34-35
• 實(shí)驗(yàn)方法35-37
• 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容37
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-43
• 討論43-45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 綜述47-56
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 附錄56-67
• 研究生期間公開發(fā)表的論著67
• 研究生期間參與的科研工作67-68
• 致謝68-70

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3 彭林,王衛(wèi)東,孫建,簡(jiǎn)志祥,杜嘉林,區(qū)金銳;穩(wěn)定表達(dá)促血管生成素基因肝癌細(xì)胞系的建立及產(chǎn)物的檢測(cè)[J];廣東醫(yī)學(xué);2003年07期

4 趙蕩;陳宏武;許磊;劉飛勇;;不同時(shí)期肝癌免疫殺傷腫瘤細(xì)胞效應(yīng)探討[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2006年S1期

5 郭曉林;姜雅秋;金清龍;;多藥耐藥相關(guān)蛋白-3表達(dá)與肝癌耐藥的相關(guān)性[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2010年11期

6 ;離體培養(yǎng)的人體肝癌細(xì)胞系的建立[J];醫(yī)學(xué)研究通訊;1978年10期

7 陸榮華;陳尊器;陳瑞銘;;人體肝癌細(xì)胞系體外惡性浸潤(rùn)行為的研究[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;1982年02期

8 張志培,施新猷,李六金,劉雪松,江遜,彭磊,趙佐慶;小鼠免疫力對(duì)接種人類肝癌細(xì)胞系9724生長(zhǎng)的影響[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年07期

9 張志仁,徐順清,周宜開,任恕,劉志偉,呂斌,徐永俊;一株受二VA英類化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)表達(dá)的螢光素酶肝癌細(xì)胞系[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2001年06期

10 董琳,王桂珍;從分子基因水平開展中醫(yī)藥防治肝癌的研究[J];甘肅中醫(yī);2002年04期

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5 丁坤;骨橋蛋白促進(jìn)肝癌細(xì)胞順鉑耐藥的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2016年

6 馬春亮;KLF17在肝癌中的作用及對(duì)肝癌預(yù)后的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

7 張春虎;丹皮酚聯(lián)合氟尿嘧啶抗人不同肝癌細(xì)胞系作用及其機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2007年

8 張妤;基于微流控芯片的循環(huán)肝癌細(xì)胞檢測(cè)和微量腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

9 周e，

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