發(fā)布時間：2017-08-20 02:23

  本文關鍵詞：γ-分泌酶抑制劑對耐雷帕霉素人成骨肉瘤細胞增殖、侵襲及凋亡的影響

  更多相關文章： 骨肉瘤 雷帕霉素 γ-分泌酶抑制劑 多藥耐藥 凋亡 p53

【摘要】：目的：通過研究1,-分泌酶抑制劑(DAPT)、雷帕霉素(RAPA)對骨肉瘤細胞株增殖、侵襲及凋亡的影響,初步研究DAPT對骨肉瘤細胞耐藥逆轉可能性,探討在骨肉瘤多藥耐藥機制中mTOR通路、Notch通路與相關影響因素的聯(lián)系。方法：體外建立培養(yǎng)耐RAPA骨肉瘤MG-63細胞株；噻唑藍(MTT)比色法檢測耐RAPA骨肉瘤MG-63細胞株的耐藥指數,測定不同濃度的RAPA、 DAPT對2種細胞株增殖影響；劃痕試驗測定2種細胞株的遷移能力；Transwell法檢測骨肉瘤MG-63細胞的侵襲能力,對比2種藥物干預下各細胞株侵襲過程中遷移率的差異；Annexin V-FITC/PI聯(lián)合流式細胞儀測定不同藥物對2種細胞株凋亡的影響;Western blot法檢測不同藥物作用下各細胞株中p53蛋白的表達。結果：MTT結果顯示RAPA及DAPT均能抑制2種細胞株的增殖。Transwell結果表明2種細胞株在不同濃度藥物作用下遷移率出現(xiàn)明顯差異。流式檢測凋亡發(fā)現(xiàn)RAPA、DAPT均能誘導2種細胞株細胞發(fā)生凋亡,骨肉瘤MG-63細胞早、晚期凋亡率均與藥物干預劑量呈正比,而實驗組耐雷帕霉素MG-63細胞與空白對照組細胞比較,僅在高劑量藥物作用下,早、晚期凋亡率差異存在統(tǒng)計學意義。Western blot檢測結果表明,在不同濃度RAPA、 DAPT藥物作用下,2種細胞株中p53表達量存在差異,骨肉瘤MG-63細胞p53表達量呈藥物劑量依賴性,而耐雷帕霉素MG63細胞p53的表達量則未隨藥物濃度升高而明顯增加。結論：RAPA、DAPT均能有效抑制骨肉瘤MG-63細胞及耐雷帕霉素MG-63細胞的增殖、侵襲,并促進其發(fā)生凋亡,隨著γ-分泌酶抑制劑濃度升高,耐雷帕霉素的骨肉瘤細胞株發(fā)生凋亡的程度、時間及p53蛋白的表達,相比骨肉瘤MG-63細胞均有明顯差異。這與阻斷mTOR后可能會降低骨肉瘤細胞對DAPT的敏感性有關,然后,Notch信號通路與p53在凋亡過程中的聯(lián)合作用被同步抑制。
【關鍵詞】：骨肉瘤 雷帕霉素 γ-分泌酶抑制劑 多藥耐藥 凋亡 p53
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R738
【目錄】：

• 個人簡歷3-5
• 英文縮寫對照表5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-14
• 1 材料和方法14-35
• 2 結果35-50
• 3 討論50-54
• 4 結論54-55
• 參考文獻55-64
• 附錄164-65
• 附錄265-66
• 附錄366-67
• 附錄467-68
• 綜述68-81
• 參考文獻72-81
• 致謝81-82
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄82

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本文編號：704184