本文關(guān)鍵詞：pH響應(yīng)性納米膠囊遞送miRNA治療食管癌作用的研究

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【摘要】：食管癌是最常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一,位于世界癌癥死亡率第六位。食管癌的形成是多因素多步驟累積的綜合過(guò)程,早期癥狀不明顯,并且缺乏有效的治療措施,多數(shù)患者就診時(shí)已處于晚期,預(yù)后效果比較差。目前食管鱗癌的臨床治療目前主要以手術(shù)切除和藥物化療為主,五年生存率低于15%,主要原因歸結(jié)于食管癌的高復(fù)發(fā)性和有效治療藥物的缺乏。因此,研發(fā)新型低毒、高效、可以特異性靶向腫瘤的藥物成為食管癌研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。隨著納米技術(shù)的迅速發(fā)展及在腫瘤治療領(lǐng)域中的應(yīng)用,借助納米技術(shù)開(kāi)發(fā)新型抗食管癌納米藥物逐漸成為藥物研究的新趨勢(shì),對(duì)于食管癌的發(fā)生率和死亡率的降低有著重大意義。MicroRNA(miRNA)是一類內(nèi)源性非編碼小分子RNA,長(zhǎng)度為20~25個(gè)核苷酸。MiRNA可以與信使RNA的3’端非編碼區(qū)結(jié)合,從而調(diào)節(jié)基因的表達(dá)水平,是真核生物中最重要的基因調(diào)控因子之一。其中,miR-203是一類來(lái)源于上皮基底細(xì)胞的miRNA,由于它在食管癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著重要的作用,已逐漸成為食管癌鑒定、診斷與治療的新型靶標(biāo)分子。研究表明,mi R-203通過(guò)抑制Ran,E2F1、LASP-1等靶蛋白的表達(dá)來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖與遷移,從而發(fā)揮抑制癌癥的作用。目前基于miRNA的干擾藥物是新藥研發(fā)的熱點(diǎn)之一,但由于mi RNA本身穿膜能力較差,并且在體內(nèi)環(huán)境中易降解,因此開(kāi)發(fā)miRNA抗癌藥物的關(guān)鍵在于遞送載體的選擇。在本研究中,我們利用O-羧甲基殼聚糖和細(xì)胞穿膜肽TAT為載體材料,通過(guò)自組裝法,構(gòu)建包載miR-203的pH響應(yīng)性納米膠囊,實(shí)現(xiàn)miR-203向食管癌細(xì)胞的高效納米遞送系統(tǒng)。然后對(duì)納米膠囊的形態(tài)結(jié)構(gòu)、包封率、穩(wěn)定性、pH響應(yīng)功能、藥物釋放效率等一系列參數(shù)進(jìn)行表征分析和優(yōu)化,最終篩選并制備出了尺寸均勻、穩(wěn)定性強(qiáng)、具有優(yōu)良載藥性能的納米藥物。一系列細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,pH響應(yīng)型納米膠囊可以高效地將miR-203遞送至食管癌細(xì)胞內(nèi)并從溶酶體逃逸,快速釋放到胞質(zhì)內(nèi)發(fā)揮作用,并通過(guò)下調(diào)靶基因E2F1、LASP-1與Ran的表達(dá)水平,顯著性抑制食管癌細(xì)胞的增殖與遷移。本論文設(shè)計(jì)制備了攜載miR-203的pH響應(yīng)性納米粒子并研究了其在抑制食道癌細(xì)胞中的作用方式及機(jī)制,為食管癌的治療探索了新的思路和方法。
【關(guān)鍵詞】：pH響應(yīng)性納米膠囊 O-羧甲基殼聚糖 細(xì)胞穿膜肽 miR-203
【學(xué)位授予單位】：北京工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.1
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 英文縮寫(xiě)詞7-10
• 第1章 緒論10-18
• 1.1 食管鱗癌簡(jiǎn)介10-11
• 1.1.1 食管鱗癌的特征10
• 1.1.2 食管鱗癌的治療現(xiàn)狀及進(jìn)展10-11
• 1.2 MicroRNA簡(jiǎn)介11-12
• 1.2.1 MicroRNA的作用機(jī)制11
• 1.2.2 MicroRNA與腫瘤治療11-12
• 1.2.3 MicroRNA-203在食管癌治療中的應(yīng)用12
• 1.3 納米載體系統(tǒng)簡(jiǎn)介12-15
• 1.3.1 納米載體的分類與發(fā)展12-14
• 1.3.2 納米載體系統(tǒng)遞送miRNA的優(yōu)勢(shì)14
• 1.3.3 細(xì)胞穿膜肽概述14-15
• 1.3.4 O-羧甲基殼聚糖概述15
• 1.4 本文的研究?jī)?nèi)容及意義15-18
• 第2章 pH響應(yīng)性納米膠囊M-CTNs的制備與表征18-28
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)儀器18-19
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法19-21
• 2.3.1 M-CTNs的制備過(guò)程19
• 2.3.2 B-CTNs及M-CTNs的粒徑與表面電位19-20
• 2.3.3 B-CTNs及M-CTNs的形態(tài)觀察20
• 2.3.4 瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證M-CTNs包載miR-203的能力20
• 2.3.5 M-CTNs的血清穩(wěn)定性檢測(cè)20
• 2.3.6 M-CTNs體外釋放miR-203速率的測(cè)定20-21
• 2.3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析21
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論21-26
• 2.4.1 M-CTNs的制備21
• 2.4.2 M-CTNs各成分比例的優(yōu)化21-22
• 2.4.3 B-CTNs及M-CTNs的形態(tài)觀察22-23
• 2.4.4 M-CTNs包載miR-203的能力23-24
• 2.4.5 M-CTNs的血清穩(wěn)定性檢測(cè)24
• 2.4.6 M-CTNs的pH響應(yīng)性能24-25
• 2.4.7 M-CTNs體外釋放miR-203的速率25-26
• 2.5 本章小結(jié)26-28
• 第3章 M-CTNs治療食管鱗癌作用的研究28-50
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料及溶液配制29-30
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料29-30
• 3.1.2 溶液配制30
• 3.2 實(shí)驗(yàn)儀器30-31
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法31-41
• 3.3.1 食管鱗癌細(xì)胞Ec-109的傳代培養(yǎng)31
• 3.3.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)M-CTNs轉(zhuǎn)染效率31-32
• 3.3.3 激光共聚焦顯微鏡觀察M-CTNs納米顆粒的溶酶體逃逸能力32-33
• 3.3.4 Real-time PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)miR-203的表達(dá)水平33-35
• 3.3.5 Real-time PCR檢測(cè)靶基因mRNA表達(dá)水平35-37
• 3.3.6 Western Blot檢測(cè)靶基因蛋白表達(dá)水平37-39
• 3.3.7 CCK8法檢測(cè)Ec-109細(xì)胞增殖能力39-40
• 3.3.8 Transwell檢測(cè)Ec-109細(xì)胞遷移能力40-41
• 3.3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析41
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論41-49
• 3.4.1 M-CTNs的轉(zhuǎn)染效率41
• 3.4.2 M-CTNs的溶酶體逃逸功能41-43
• 3.4.3 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)miR-203的表達(dá)水平43-44
• 3.4.4 靶基因E2F1、LASP-1 和Ran的mRNA表達(dá)水平44-45
• 3.4.5 靶基因E2F1、LASP-1 和Ran的蛋白質(zhì)表達(dá)水平45-46
• 3.4.6 M-CTNs抑制Ec-109細(xì)胞的增殖能力46-47
• 3.4.7 M-CTNs抑制Ec-109細(xì)胞的遷移能力47-49
• 3.5 本章小結(jié)49-50
• 結(jié)論50-52
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文58-60
• 致謝60

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本文編號(hào)：702246