本文關(guān)鍵詞：TNFSF4基因在肝細(xì)胞肝癌發(fā)展及索拉菲尼治療中的作用

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【摘要】：背景肝細(xì)胞肝癌的發(fā)病率在過(guò)去的幾十年里逐漸升高,是惡性腫瘤中死亡率位居第3的腫瘤,即使近年來(lái)我們對(duì)肝癌的發(fā)生發(fā)展的認(rèn)識(shí)有了極大的進(jìn)展,但我們對(duì)晚期肝癌的治療手段仍極其有限。索拉非尼是一個(gè)小分子絡(luò)氨酸激酶抑制劑,抑制VEGFR, PDGFR及Raf家族激酶,在臨床上應(yīng)用于晚期肝癌的治療,有效性僅在30%左右且多于開(kāi)始服藥后6個(gè)月左右產(chǎn)生耐藥性,對(duì)索拉非尼的抵抗目前仍需要大量研究。目的本研究探討TNFSF4基因在肝癌細(xì)胞中的作用,及其與索拉非尼治療中的相互關(guān)系探討其與肝癌治療的相關(guān)性,并分析其在肝細(xì)胞肝癌臨床樣本中癌-癌旁組織表達(dá)的差異,以探討TNFSF4基因與肝癌發(fā)生發(fā)展,治療的相關(guān)性及其可能的分子機(jī)制。方法1.通過(guò)體外轉(zhuǎn)染TNFSF4敲除慢病毒建立TNFSF4基因敲除的肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞株,分析TNFSF4基因敲除后蛋白質(zhì)組學(xué)的差異,探討可能的作用。2.利用建立的細(xì)胞株進(jìn)行細(xì)胞增殖,體外侵襲的實(shí)驗(yàn),探討TNFSF4敲除對(duì)細(xì)胞功能上的影響。利用流式細(xì)胞儀分析TNFSF4基因敲除后凋亡周期上的變化。3.加入索拉非尼處理TNFSF4敲除的細(xì)胞,探討TNFSF4在肝癌治療中發(fā)揮的作用。4.收集臨床肝細(xì)胞肝癌樣本,利用PCR技術(shù)及免疫組化技術(shù)在mRNA層面及蛋白表達(dá)層面檢測(cè)實(shí)際臨床中癌-癌旁TNFSF4基因表達(dá)的差異,探討TNFSF4基因與肝癌的治療預(yù)后的差異。結(jié)果1.TNFSF4基因敲除后細(xì)胞JAK-STAT3表達(dá)量明顯下降,cleaved caspase3明顯上調(diào),p53上調(diào)而MDM2下調(diào),TGFβ1/2表達(dá)下調(diào),N-Cadherin的表達(dá)明顯上調(diào)。2. TNFSF4基因敲除后相比對(duì)照組細(xì)胞體外侵襲能力及細(xì)胞活性明顯下降(P0.001),加入TNFSF4細(xì)胞因子后侵襲能力及細(xì)胞活性明顯恢復(fù)(P0.001)。3. TNFSF4基因敲除后細(xì)胞凋亡明顯增多,加入細(xì)胞因子能逆轉(zhuǎn)細(xì)胞凋亡(P0.001)。TNFSF4敲除后能增強(qiáng)索拉非尼產(chǎn)生的凋亡,協(xié)同效應(yīng)明顯(P0.001),并同樣在加入TNFSF4后被逆轉(zhuǎn)。4.肝細(xì)胞肝癌臨床樣本中,腫瘤組織中TNFSF4的mRNA表達(dá)量明顯低于癌旁組織(P=0.031),3對(duì)免疫組化樣本中均可見(jiàn)到癌旁組織染色高于癌組織,與PCR結(jié)果一致。結(jié)論首先,TNFSF4基因敲除下調(diào)JAK-STAT3通路,能促進(jìn)p53表達(dá)并同時(shí)抑制MDM2表達(dá),cleavedcaspase3及E-Cadherin的含量升高。其次,TNFSF4能敲除能抑制細(xì)胞侵襲,抑制增殖活性,促進(jìn)凋亡,增強(qiáng)對(duì)索拉非尼的敏感性,這些效應(yīng)能在加入’TNFSF4細(xì)胞因子后得以逆轉(zhuǎn)。最后,在肝細(xì)胞肝癌臨床標(biāo)本中,TNFSF4在表達(dá)譜水平與蛋白水平的癌旁的表達(dá)高于在癌中的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：TNFSF4基因 肝細(xì)胞肝癌 索拉菲尼 耐藥 基因敲除 凋亡 細(xì)胞侵襲 自噬
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 縮略詞表11-14
• 1 緒論14-19
• 2 試驗(yàn)試劑、材料及方法19-28
• 2.1 實(shí)驗(yàn)試劑及材料19-20
• 2.2 主要儀器設(shè)備20
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方案20-27
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析27-28
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-38
• 3.1 蛋白質(zhì)印跡28-30
• 3.2 細(xì)胞侵襲試驗(yàn)30-32
• 3.3 細(xì)胞增殖檢測(cè)(CCK8)32-33
• 3.4 TNFSF4及索拉菲尼對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡的影響33-34
• 3.5 PCR組織表達(dá)驗(yàn)證34-36
• 3.6 免疫組化組織驗(yàn)證36-38
• 4 討論38-43
• 5 結(jié)論43-44
• 6 參考文獻(xiàn)44-49
• 綜述49-65
• 參考文獻(xiàn)59-65
• 作者簡(jiǎn)歷及在學(xué)期間所取得的科研成果65

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 Trevan D Fischer;Jin-Hee Wang;Adrian Vlada;Jae-Sung Kim;Kevin E Behrns;;Role of autophagy in differential sensitivity of hepatocarcinoma cells to sorafenib[J];World Journal of Hepatology;2014年10期

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本文編號(hào)：702211