本文關(guān)鍵詞：山奈酚聯(lián)合5-氟尿嘧啶抑制大腸癌生長的作用及其機(jī)制研究

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【摘要】：目的：探討山奈酚、5-FU以及二者聯(lián)合用藥對大腸癌細(xì)胞的抗癌效果,評價(jià)其協(xié)同作用。從抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡、抑制5-FU代謝的關(guān)鍵酶的作用三個(gè)方面探討山奈酚協(xié)同5-FU的作用機(jī)制。方法：1.山奈酚聯(lián)合5-FU抗大腸癌細(xì)胞的作用：(1)通過MTT方法檢測山奈酚、5-FU對大腸癌(HCT-8、HCT-116)細(xì)胞活力的影響,并計(jì)算各藥的IC50。(2)固定比率法觀察不同比率的山奈酚聯(lián)合5-FU對大腸癌細(xì)胞HCT-8、HCT-116活力的影響,并計(jì)算Combination index (CI),評價(jià)其協(xié)同作用。 (3)觀察不同的比率的山奈酚聯(lián)合5-FU對人胚腎細(xì)胞的毒作用,確定5-FU及山奈酚的聯(lián)合濃度。2.山奈酚聯(lián)合5-FU抗大腸癌作用機(jī)制研究：(1)大腸癌細(xì)胞經(jīng)5-FU、山奈酚及兩藥聯(lián)合干預(yù)后,通過集落形成實(shí)驗(yàn)觀察山奈酚聯(lián)合5-FU對大腸癌生長的影響；(2)大腸癌細(xì)胞經(jīng)5-FU、山奈酚及兩藥聯(lián)合干預(yù)后,通過流式觀察山奈酚聯(lián)合5-FU對大腸癌細(xì)胞周期的影響；(3)大腸癌細(xì)胞經(jīng)5-FU、山奈酚及兩藥聯(lián)合干預(yù)后,通過Hoechst染色及流式觀察山奈酚聯(lián)合5-FU對大腸癌細(xì)胞凋亡影響；(4)Q-PCR和Western Blot (WB)方法檢測凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2、抑癌基因P53、5-FU相關(guān)代謝酶TS、DPD及相關(guān)通路的影響,從抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡、抑制5-FU相關(guān)代謝酶等方面進(jìn)一步闡明山奈酚聯(lián)合5-FU抗大腸癌的作用機(jī)制。結(jié)果：1.山奈酚聯(lián)合5-FU抗大腸癌細(xì)胞的作用：(1)5-FU干預(yù)HCT-8和HCT-116細(xì)胞的IC50分別為177.78 μM和77.63μM；山奈酚干預(yù)HCT-8和HCT-116細(xì)胞后分別為350 μM和184.33μM。 (2)當(dāng)5-FU濃度為50μM,山奈酚濃度為100μM時(shí),聯(lián)合用藥組大腸癌細(xì)胞HCT-8效果最佳,其CI=0.351(CI1),表明二者具有協(xié)同作用,且作用顯著。當(dāng)5-FU濃度為20μtM,山奈酚濃度為100μM時(shí),二者聯(lián)合對HCT-116效果最佳,其CI=0.621(CI1),表明二者具有協(xié)同作用,且作用顯著。(3)5-FU與山奈酚聯(lián)合干預(yù)HEK-293細(xì)胞,聯(lián)合組的細(xì)胞毒作用小于5-FU單獨(dú)用藥組,其CII,表明二者具有拮抗作用。2.山奈酚聯(lián)合5-FU抗大腸癌作用機(jī)制研究： (1)集落實(shí)驗(yàn)表明5-FU組及5-FU聯(lián)合山奈酚組,集落形成數(shù)量逐漸減少,表明5-FU聯(lián)合山奈酚干預(yù)可顯著降低HCT-8細(xì)胞的存活能力。 (2)細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)表明大腸癌細(xì)胞經(jīng)5-FU聯(lián)合山奈酚干預(yù)后,G1期比例升高,S期比例下調(diào)。(3)通過Hoechst染色及流式觀察細(xì)胞凋亡,發(fā)現(xiàn)聯(lián)合組中細(xì)胞發(fā)生凋亡的比例(31.41%)約為5-FU組(10.13%)的細(xì)胞凋亡率的3倍。 (P0.05) (4)QPCR及WB實(shí)驗(yàn)表明聯(lián)合組能夠升高Bax的表達(dá),降低Bcl-2的表達(dá),且與單獨(dú)用藥組相比,具有顯著差異,且山奈酚組及聯(lián)合組都有降低5-FU代謝卡丌關(guān)酶TS和DPD,此外聯(lián)合組顯著降低了由于5-FU干預(yù)引起的P13K及p-AKt的表達(dá)。結(jié)論：山奈酚聯(lián)合5-FU干預(yù)大腸癌細(xì)胞(HCT-8、HCT-116),與單獨(dú)用藥相比,能顯著降低細(xì)胞活力,具有協(xié)同抗腫瘤的作用(CI1),聯(lián)合組細(xì)胞凋亡率顯著高于單獨(dú)用藥組,且與單獨(dú)用藥組相比,山奈酚聯(lián)合5-FU使凋亡相關(guān)基因Bax顯著上調(diào)、Bcl-2顯著下調(diào)、且抑制5-FU相關(guān)代謝酶TS、DPD的表達(dá),此外聯(lián)合組顯著降低了由于5-FU干預(yù)引起的P13K及p-AKt的表達(dá),表明山奈酚聯(lián)合5-FU抗大腸癌的作用機(jī)制可能包括調(diào)控PI3K/Akt通路,協(xié)同抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)大腸癌細(xì)胞凋亡、抑制5-FU相關(guān)代謝酶TS、DPD等。更進(jìn)一步的作用機(jī)制有待更深入的研究以及動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證。
【關(guān)鍵詞】：大腸癌 協(xié)同作用 山奈酚 5-FU
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文縮略詞表9-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-20
• 1 細(xì)胞株12
• 2 藥物及試劑12-14
• 3 實(shí)驗(yàn)方法14-20
• 結(jié)果20-29
• 1 山奈酚與5-Fu對大腸癌細(xì)胞的協(xié)同作用20-23
• 2 山奈酚與5-FU對大腸癌細(xì)胞的協(xié)同作用機(jī)制23-29
• 討論29-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-34
• 致謝34-35
• 文獻(xiàn)綜述35-40
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 作者簡歷40

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本文編號：701354