發(fā)布時(shí)間：2017-08-19 01:10

  本文關(guān)鍵詞：MTX對(duì)映體耐藥A549細(xì)胞中VEGF、MMP-2的表達(dá)及其與侵襲能力差異的研究

  更多相關(guān)文章： 氨甲蝶呤 對(duì)映體 基質(zhì)金屬蛋白酶-2 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 腫瘤侵襲

【摘要】：目的:研究氨甲蝶呤(MTX)對(duì)映體耐藥人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)基因及蛋白的表達(dá)及其與細(xì)胞侵襲能力差異的研究。方法:(1)采用濃度遞增并結(jié)合低劑量持續(xù)誘導(dǎo)的方法建立MTX不同對(duì)映體耐藥細(xì)胞系,分別命名為:L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549,MTT法測(cè)定其耐藥指數(shù)并檢測(cè)MTX對(duì)映體對(duì)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用,倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;(2)Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549及親本A549細(xì)胞侵襲能力的差異;(3)通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549及親本A549細(xì)胞中VEGF、MMP-2m RNA的表達(dá);(4)Western blot檢測(cè)L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549及親本A549細(xì)胞中VEGF、MMP-2蛋白的表達(dá)量。結(jié)果:(1)倒置相差顯微鏡下觀察,L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549及親本A549細(xì)胞均呈梭形貼壁生長(zhǎng)。L-(+)-MTX/A549的耐藥指數(shù)為5.8,為中度耐藥;D-(-)-MTX/A549的耐藥指為15.7,為高度耐藥。兩種MTX對(duì)映體抑制A549細(xì)胞的生長(zhǎng)呈劑量與時(shí)間依賴性,L-(+)-MTX對(duì)A549細(xì)胞的抑制作用明顯強(qiáng)于D-(-)-MTX。(2)Transwell小室檢測(cè)D-(-)-MTX/A549細(xì)胞穿過(guò)人工基底膜Matrigel的細(xì)胞數(shù)(242±32)明顯高于L-(+)-MTX/A549(104±15)細(xì)胞及親本細(xì)胞(127±15),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。L-(+)-MTX/A549細(xì)胞穿過(guò)人工基底膜Matrigel的細(xì)胞數(shù)(104±15)略小于親本細(xì)胞(127±15),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)D-(-)-MTX/A549組細(xì)胞的VEGF及MMP-2m RNA與內(nèi)參的比值均小于L-(+)-MTX/A549細(xì)胞及親本細(xì)胞組VEGF及MMP-2m RNA與內(nèi)參的比值,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),L-(+)-MTX/A549和親本細(xì)胞組之間VEGF及MMP-2m RNA與內(nèi)參的比值的比值則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。說(shuō)明D-(-)-MTX/A549細(xì)胞中VEGF、MMP-2的表達(dá)量均大于L-(+)-MTX/A549細(xì)胞及親本細(xì)胞。(4)經(jīng)Western blot檢測(cè)D-(-)-MTX/A549細(xì)胞表達(dá)VEGF及MMP-2蛋白量明顯高于L-(+)-MTX/A549及親本細(xì)胞,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。L-(+)-MTX/A549細(xì)胞表達(dá)VEGF及MMP-2量較親本細(xì)胞稍減少,但無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:(1)建立不同MTX對(duì)映體的耐藥細(xì)胞株,分別為L(zhǎng)-(+)-MTX/A549及D-(-)-MTX/A549,兩組耐藥細(xì)胞株之間存在手性差異是本研究中的關(guān)鍵,為進(jìn)一步探討氨甲蝶呤(MTX)對(duì)映體耐藥人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的侵襲能力的相關(guān)研究工作奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ);(2)MTX對(duì)映體耐藥細(xì)胞中VEGF及MMP-2表達(dá)水平與腫瘤的侵襲性相關(guān),D-(-)-M TX/A549細(xì)胞呈VEGF及MMP-2m RNA及蛋白高表達(dá),與L-(+)-MTX/A549及親本細(xì)胞之間存在差異。MTX對(duì)映體耐藥后導(dǎo)致腫瘤的侵襲性發(fā)生改變,相對(duì)無(wú)藥理作用的D-(-)-MTX能增強(qiáng)耐藥細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。(3)VEGF及MMP-2在MTX對(duì)映體耐藥細(xì)胞的表達(dá)與耐藥細(xì)胞侵襲力能力的差異可能存在關(guān)聯(lián),為臨床進(jìn)一步研究VEGF及MMP-2在MTX對(duì)映體耐藥細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲中的作用機(jī)制提供科學(xué)基礎(chǔ),為臨床更加合理應(yīng)用MTX對(duì)映體藥物提供依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：氨甲蝶呤 對(duì)映體 基質(zhì)金屬蛋白酶-2 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 腫瘤侵襲
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 第一部分 耐藥細(xì)胞株建立14-25
• 研究材料與方法14-20
• 1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備和儀器14-15
• 2 實(shí)驗(yàn)藥物和試劑15-16
• 3 實(shí)驗(yàn)方法和步驟16-20
• 結(jié)果20-22
• 討論22-25
• 第二部分MTX對(duì)映體耐藥A549細(xì)胞中VEGF、MMP-2 的表達(dá)及其與侵襲能力差異的研究25-39
• 研究材料與方法25-34
• 1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備和儀器25
• 2 實(shí)驗(yàn)藥物和試劑25-27
• 3 實(shí)驗(yàn)方法及步驟27-34
• 結(jié)果34-37
• 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 綜述44-57
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 作者簡(jiǎn)介及讀研期間主要科研成果57-58
• 致謝58

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 高麗萍;張國(guó)慶;;高效液相色譜手性固定相法拆分重酒石酸去甲腎上腺素對(duì)映體[J];應(yīng)用化學(xué);2008年11期

2 劉玉梅;姚鑫寧;郭興杰;;直鏈淀粉手性固定相拆分咪康唑?qū)τ丑w[J];沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年07期

3 何紹雄;王殿英;;對(duì)映體藥物的臨床藥學(xué)[J];天津藥學(xué);1992年04期

4 陳鷹,馬e，

本文編號(hào)：697805