本文關(guān)鍵詞：MTX對映體耐藥A549細胞中VEGF、MMP-2的表達及其與侵襲能力差異的研究

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【摘要】：目的:研究氨甲蝶呤(MTX)對映體耐藥人非小細胞肺癌A549細胞中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)基因及蛋白的表達及其與細胞侵襲能力差異的研究。方法:(1)采用濃度遞增并結(jié)合低劑量持續(xù)誘導(dǎo)的方法建立MTX不同對映體耐藥細胞系,分別命名為:L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549,MTT法測定其耐藥指數(shù)并檢測MTX對映體對A549細胞的生長抑制作用,倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)學變化;(2)Transwell侵襲實驗檢測L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549及親本A549細胞侵襲能力的差異;(3)通過實時熒光定量PCR檢測L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549及親本A549細胞中VEGF、MMP-2m RNA的表達;(4)Western blot檢測L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549及親本A549細胞中VEGF、MMP-2蛋白的表達量。結(jié)果:(1)倒置相差顯微鏡下觀察,L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549及親本A549細胞均呈梭形貼壁生長。L-(+)-MTX/A549的耐藥指數(shù)為5.8,為中度耐藥;D-(-)-MTX/A549的耐藥指為15.7,為高度耐藥。兩種MTX對映體抑制A549細胞的生長呈劑量與時間依賴性,L-(+)-MTX對A549細胞的抑制作用明顯強于D-(-)-MTX。(2)Transwell小室檢測D-(-)-MTX/A549細胞穿過人工基底膜Matrigel的細胞數(shù)(242±32)明顯高于L-(+)-MTX/A549(104±15)細胞及親本細胞(127±15),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。L-(+)-MTX/A549細胞穿過人工基底膜Matrigel的細胞數(shù)(104±15)略小于親本細胞(127±15),但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。(3)D-(-)-MTX/A549組細胞的VEGF及MMP-2m RNA與內(nèi)參的比值均小于L-(+)-MTX/A549細胞及親本細胞組VEGF及MMP-2m RNA與內(nèi)參的比值,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),L-(+)-MTX/A549和親本細胞組之間VEGF及MMP-2m RNA與內(nèi)參的比值的比值則無統(tǒng)計學意義(P0.05)。說明D-(-)-MTX/A549細胞中VEGF、MMP-2的表達量均大于L-(+)-MTX/A549細胞及親本細胞。(4)經(jīng)Western blot檢測D-(-)-MTX/A549細胞表達VEGF及MMP-2蛋白量明顯高于L-(+)-MTX/A549及親本細胞,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。L-(+)-MTX/A549細胞表達VEGF及MMP-2量較親本細胞稍減少,但無明顯統(tǒng)計學差異(P0.05)。結(jié)論:(1)建立不同MTX對映體的耐藥細胞株,分別為L-(+)-MTX/A549及D-(-)-MTX/A549,兩組耐藥細胞株之間存在手性差異是本研究中的關(guān)鍵,為進一步探討氨甲蝶呤(MTX)對映體耐藥人非小細胞肺癌A549細胞的侵襲能力的相關(guān)研究工作奠定了堅實的基礎(chǔ);(2)MTX對映體耐藥細胞中VEGF及MMP-2表達水平與腫瘤的侵襲性相關(guān),D-(-)-M TX/A549細胞呈VEGF及MMP-2m RNA及蛋白高表達,與L-(+)-MTX/A549及親本細胞之間存在差異。MTX對映體耐藥后導(dǎo)致腫瘤的侵襲性發(fā)生改變,相對無藥理作用的D-(-)-MTX能增強耐藥細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。(3)VEGF及MMP-2在MTX對映體耐藥細胞的表達與耐藥細胞侵襲力能力的差異可能存在關(guān)聯(lián),為臨床進一步研究VEGF及MMP-2在MTX對映體耐藥細胞轉(zhuǎn)移侵襲中的作用機制提供科學基礎(chǔ),為臨床更加合理應(yīng)用MTX對映體藥物提供依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：氨甲蝶呤 對映體 基質(zhì)金屬蛋白酶-2 血管內(nèi)皮生長因子 腫瘤侵襲
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 第一部分 耐藥細胞株建立14-25
• 研究材料與方法14-20
• 1 實驗設(shè)備和儀器14-15
• 2 實驗藥物和試劑15-16
• 3 實驗方法和步驟16-20
• 結(jié)果20-22
• 討論22-25
• 第二部分MTX對映體耐藥A549細胞中VEGF、MMP-2 的表達及其與侵襲能力差異的研究25-39
• 研究材料與方法25-34
• 1 實驗設(shè)備和儀器25
• 2 實驗藥物和試劑25-27
• 3 實驗方法及步驟27-34
• 結(jié)果34-37
• 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-44
• 綜述44-57
• 參考文獻52-57
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果57-58
• 致謝58

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本文編號：697805