本文關(guān)鍵詞：地西他濱對Jurkat細(xì)胞增殖、凋亡及TAL1基因表達(dá)的影響

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【摘要】：背景與目的白血病(Leukemial)是由于造血干細(xì)胞不受機(jī)體基因調(diào)控,從而惡性克隆所形成的疾病,這些惡性克隆細(xì)胞大量增生累積,抑制正常造血細(xì)胞,同時廣泛浸潤肝、脾、淋巴結(jié)等各種臟器。白血病細(xì)胞自我更新增強(qiáng)、增殖失控、分化障礙及凋亡受阻,從而停滯在細(xì)胞發(fā)育的不同階段。臨床表現(xiàn)為貧血(通常為正細(xì)胞正色素性貧血)、出血(血小板低下)、感染(粒細(xì)胞缺乏)和浸潤(通常受累脾、淋巴結(jié))等征象。根據(jù)惡性增殖的細(xì)胞系大致可將AL分為急性淋巴細(xì)胞白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia1)和急性髓系細(xì)胞白血病(Acute myeloid Leukemia1)。根據(jù)增殖的白血病細(xì)胞免疫表型,ALL又可分為B細(xì)胞型、T細(xì)胞型和T/B混合型。其中T細(xì)胞型ALL(T-ALL)是以T細(xì)胞增殖失控,大量分化障礙的T細(xì)胞惡性克隆性增生、積聚,從而大量T細(xì)胞浸潤組織為特征的血液系統(tǒng)惡性疾病,占ALL的15%-25%,有別于B細(xì)胞型ALL,它具有獨(dú)特的臨床表現(xiàn)、細(xì)胞遺傳學(xué)、免疫學(xué)和分子生物學(xué)等特點(diǎn)。T-ALL患者預(yù)后相對其他類型白血病差,特別是一些患兒。隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展,多種抗腫瘤藥聯(lián)合化療的方案及大劑量化療的臨床應(yīng)用,使得T-ALL患者預(yù)后有了很大改善,但仍有部分患者即使大劑量化療也不能達(dá)到完全緩解,T-ALL難治性問題是血液科臨床醫(yī)師面臨的最大挑戰(zhàn)。所以說,T-ALL的治療仍是目前白血病治療的難點(diǎn)和重點(diǎn)。地西他濱(Decitabine,DAC)作為新型抗腫瘤藥物,屬于DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑,其研究發(fā)現(xiàn),DAC本身也是去甲基化藥物,且具有酶的特異性。目前研究熱點(diǎn)多集中于DAC在白血病中發(fā)揮的去甲基化作用,從而達(dá)到治療目標(biāo),國外最新研究發(fā)現(xiàn),DAC亦能參與多種信號傳導(dǎo)路徑活化過程,如JAK-STAT,表明可能通過其他途徑發(fā)揮其促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用,但關(guān)DAC促凋亡的研究,國內(nèi)外甚少。TAL1(T cell acute lymphoblastic leukemia1)基因位于染色體的1p32,它對調(diào)控造血干細(xì)胞的發(fā)育以及各系血細(xì)胞的分化形成起著至關(guān)重要的作用。TAL1基因是急性T淋巴細(xì)胞白血病(T-ALL)患者中最常見的染色體重排靶標(biāo),越來越多的研究支持TAL1基因在白血病的發(fā)病過程中扮演者不可或缺的角色。盡管TAL1基因最初是在發(fā)生了染色體易位的T-ALL病人中發(fā)現(xiàn),但隨后研究表明,其在正常血細(xì)胞分化過程中擔(dān)任了不可或缺的角色。動物實(shí)驗(yàn)研究表明,TAL1的發(fā)育起始于老鼠胚胎的8.5天,隨后在上皮組織及神經(jīng)組織中表達(dá),在紅系及巨噬系細(xì)胞中也有表達(dá);研究人員在敲除了TAL1基因后,老鼠均在9.5天左右死亡,同時發(fā)現(xiàn)缺失TAL1基因的老鼠,造血組織受到了不可恢復(fù)的影響,均停滯發(fā)育、分化,從而造成小鼠死亡。臨床研究表明,多于60%的T-ALL病人中,TAL1表達(dá)水平是升高的,提示它對腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展起重要作用。然而,是什么原因?qū)е铝薚AL1的高表達(dá),至今仍未清楚。本實(shí)驗(yàn)選擇不同濃度的DAC作用于白血病Jurkat細(xì)胞系,觀察其對Jurkat細(xì)胞系的增殖、凋亡及對TAL1基因表達(dá)的影響。為DAC治療T-ALL提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。材料與方法1.WST-1測細(xì)胞增值率:采用終濃度為0.5、1、5、10μmol/L的DAC作用于Jurkat細(xì)胞24h、48、72h,確定地西他濱作用于細(xì)胞的適宜濃度與時間。2.觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化:以0μmol/L及5μmol/L DAC作用于Jurkat細(xì)胞48h,熒光倒置顯微鏡下觀察。3.通過Real-time RT-PCR實(shí)驗(yàn)方法分析檢測檢測實(shí)驗(yàn)組Jurkat細(xì)胞及空白對照組TAL1m RNA表達(dá)。4.流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡:5μmol/L DAC作用于Jurkat細(xì)胞48h后,用Annexin V-FITC/PI雙染色法通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡。結(jié)果1.WST-1結(jié)果顯示:不同濃度的DAC對Jurkat細(xì)胞的增殖均具有明顯的抑制作用。DAC終濃度為0.5、1、5、10μmol/L,作用于Jurkat細(xì)胞24h,對Jurkat細(xì)胞增殖均有抑制作用,其抑制率分別為(13.8±1.15)%、(25.8±0.93)%、(41.6±2.01)%、(49.5±0.48)%;各濃度組與空白對照組(1.70±0.25)%比較,其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);不同濃度組間兩兩比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。DAC5μmol/L作用于Jurkat細(xì)胞24、48、72h,對Jurkat細(xì)胞生長有明顯抑制作用,抑制率分別為(41.6±2.01)%、(55.8±1.22)%和(59.6±2.13)%,組間兩兩比較,24h與48h組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);48h與72h組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。由此計算出地西他濱處理Jurkat細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50值)接近于5μmol/L因此選擇其為實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。2.觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化:根據(jù)WST-1實(shí)驗(yàn)得出DAC最佳作用時間及IC50值,以0μmol/L及5μmol/L DAC作用于Jurkat細(xì)胞48h,熒光倒置顯微鏡下觀察,5μmol/L實(shí)驗(yàn)組較0μmol/L對照組細(xì)胞核明顯出現(xiàn)變形、濃縮、腎形核及花瓣樣改變,說明DAC誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞凋亡。3.通過實(shí)時熒光定量PCR法分析檢測出實(shí)驗(yàn)組Jurkat細(xì)胞系中TAL1m RNA表達(dá)水平明顯降低(0.375±0.0156),與對照組相比較(1.038±0.049),差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002;t=12.92)。4.流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡:Annexin V和PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果表明,5μmol/L DAC,作用于Jurkat細(xì)胞48h后,其細(xì)胞凋亡率分別為(63.5±1.6)%,高于對照組(7.4±0.8)%(P0.05),其差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論地西他濱能抑制Jurkat細(xì)胞的增殖及誘導(dǎo)凋亡,顯著下調(diào)TAL1m RNA表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：TAL1 急性T淋巴細(xì)胞白血病 增殖 凋亡
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.7
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 部分中英文縮略詞表12-13
• 引言13-16
• 材料與方法16-22
• 結(jié)果22-26
• 討論26-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-36
• 綜述 TAL1與白血病36-55
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 致謝55-56
• 個人簡歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果56

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 胡艷玲;傅得興;胡欣;;地西他濱的藥理作用和臨床評價[J];中國藥學(xué)雜志;2008年02期

2 蔣艷,胡群,劉雙又,丁玉峰,劉愛國,張柳清;小檗堿誘導(dǎo)人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞凋亡的研究[J];醫(yī)藥導(dǎo)報;2005年07期

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本文編號：696322