本文關(guān)鍵詞：草酰乙酸的肝癌細(xì)胞HepG2毒性及上調(diào)HepG2細(xì)胞VEGF mRNA表達(dá)的研究

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【摘要】：草酰乙酸是三羧酸循環(huán)的重要中間代謝產(chǎn)物之一，除了作為底物參與能量代謝外還具有許多其他的生物學(xué)功能。本研究中首次發(fā)現(xiàn)草酰乙酸對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG2呈現(xiàn)出選擇性的細(xì)胞毒性作用，并且證明該細(xì)胞毒性作用與細(xì)胞凋亡和活性氧堆積有關(guān)。首先，75mM草酰乙酸能夠降低HepG2細(xì)胞活力，減少細(xì)胞克隆形成能力，引起細(xì)胞死亡。其次，75mM草酰乙酸能夠引起HepG2細(xì)胞內(nèi)促凋亡基因Bax的mRNA水平上調(diào)，抗凋亡基因Bcl-2的mRNA水平下調(diào)，表明草酰乙酸引起的細(xì)胞死亡與內(nèi)源性凋亡途徑有關(guān)。此外，75mM草酰乙酸處理過(guò)的細(xì)胞內(nèi)活性氧水平升高，加入抗氧化劑NAC和GSH后，細(xì)胞內(nèi)活性氧含量和細(xì)胞死亡情況都得到緩解。但是，，抗氧化劑不能緩解草酰乙酸引起的細(xì)胞凋亡，表明草酰乙酸誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡至少包括細(xì)胞凋亡和活性氧堆積兩條通路。 除了草酰乙酸的選擇性肝癌細(xì)胞毒性外，我們還首次發(fā)現(xiàn)20mM草酰乙酸可以激活ERK/Hif-1α/VEGF通路，具有潛在的促進(jìn)血管生成作用。首先，20mM草酰乙酸能增強(qiáng)HepG2細(xì)胞中ERK的磷酸化。ERK蛋白磷酸化導(dǎo)致其下游蛋白Hif-1α穩(wěn)定性增強(qiáng)，并使受Hif-1α調(diào)控的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF的mRNA表達(dá)水平增強(qiáng)。當(dāng)加入MEK1阻斷劑PD98059后，ERK蛋白磷酸化受到抑制，Hif-1α蛋白表達(dá)相應(yīng)降低，VEGF的mRNA水平也隨之降低。已知VEGF的表達(dá)與血管生成密切相關(guān)，因此我們初步推測(cè)草酰乙酸可能通過(guò)ERK/Hif-1α/VEGF途徑，具有潛在的促血管生成的作用。
【關(guān)鍵詞】：草酰乙酸 腫瘤代謝 血管生成 細(xì)胞毒性 肝癌
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 中英文縮略詞表7-11
• 第1章 緒論11-22
• 1.1 草酰乙酸及其生物學(xué)作用11-14
• 1.2 草酰乙酸生物學(xué)作用研究的意義14-16
• 1.3 細(xì)胞凋亡、活性氧與腫瘤16-19
• 1.3.1 細(xì)胞凋亡與腫瘤16-18
• 1.3.2 活性氧與腫瘤18-19
• 1.3.3 腫瘤細(xì)胞凋亡與活性氧19
• 1.4 腫瘤血管生成19-22
• 第2章 草酰乙酸肝癌 HepG2 細(xì)胞毒性作用的研究22-42
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料22-26
• 2.1.1 主要儀器22-23
• 2.1.2 主要試劑和耗材23-25
• 2.1.3 主要試劑配制25-26
• 2.1.4 細(xì)胞株來(lái)源26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法26-32
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)26-27
• 2.2.2 MTT 法檢測(cè)細(xì)胞活力27
• 2.2.3 光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)27
• 2.2.4 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞存活27-28
• 2.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞死亡28
• 2.2.6 RNA 提取28-29
• 2.2.7 RNA 定量29
• 2.2.8 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)29
• 2.2.9 PCR 反應(yīng)29-30
• 2.2.10 瓊脂糖凝膠電泳30-31
• 2.2.11 Caspase3 酶活力測(cè)定31-32
• 2.2.12 細(xì)胞 ROS 水平檢測(cè)32
• 2.3 數(shù)據(jù)處理32
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-40
• 2.4.1 草酰乙酸選擇性誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞 HepG2 死亡32-35
• 2.4.2 草酰乙酸誘導(dǎo)的肝癌 HepG2 細(xì)胞死亡和凋亡有關(guān)35-36
• 2.4.3 草酰乙酸誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡和活性氧有關(guān)36-40
• 2.5 討論40-42
• 第3章 草酰乙酸上調(diào)肝癌 HepG2 細(xì)胞 VEGF mRNA 表達(dá)的研究42-53
• 3.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料42
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法42-45
• 3.2.1 Western Blot 法檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)42-45
• 3.3 數(shù)據(jù)處理45
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-51
• 3.4.1 草酰乙酸使 ERK 磷酸化程度增高45-46
• 3.4.2 草酰乙酸通過(guò) ERK 的磷酸化穩(wěn)定細(xì)胞 Hif-1α蛋白水平46-49
• 3.4.3 草酰乙酸能上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 VEGF 的 mRNA 表達(dá)49-50
• 3.4.4 MEK1 阻斷劑能阻斷草酰乙酸誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮生成因子VEGF 表達(dá)上調(diào)50-51
• 3.5 討論51-53
• 第4章 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-62
• 在學(xué)期間獲得的研究成果62-63
• 致謝63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 ;活性氧對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡及損傷作用的劑量-效應(yīng)關(guān)系研究[J];癌變.畸變.突變;2001年04期

2 曹純章,楊紹娟,卜麗莎,楊同書(shū);過(guò)氧化氫誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡性和非凋亡性死亡的研究[J];中國(guó)病理生理雜志;2000年05期

3 ;Inactivation of PTEN is associated with increased angiogenesis and VEGF overexpression in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2004年21期

本文編號(hào)：689187