發(fā)布時間：2017-08-17 12:23

  本文關(guān)鍵詞：CRTC2在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及機制研究

  更多相關(guān)文章： CRTC2 CREB 共活化因子 表達上調(diào) 過度活化 絲氨酸合成通路 腫瘤發(fā)生

【摘要】：肝臟是人體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官,是完成糖原合成糖異生等生理功能的重要場所。機體在受到病毒、細菌、寄生蟲感染或者在其他藥物或者酒精的影響下,肝臟細胞受到破壞,肝功能損害進而誘發(fā)肝炎。流行病學研究顯示,約25%的慢性肝炎病人會誘發(fā)肝硬化,而每年又有3%-5%的肝硬化病人最終會發(fā)生肝癌。有研究報道顯示,在正常肝臟組織轉(zhuǎn)變?yōu)楦伟┙M織的過程中,伴隨著糖異生這樣一個生理現(xiàn)象的異常。因此,我們便思考,介導這一生理功能的關(guān)鍵性蛋白CRTC2在癌癥發(fā)生過程中扮演著怎樣的角色。CRTC2, CREB (cAMP—and calcium—responsive transcriptional activator)共活化因子,是人體血糖調(diào)節(jié)的關(guān)鍵性蛋白,其目前被報道的功能僅限于活化促進糖異生。CRTC2對激素和循環(huán)內(nèi)的血糖水平敏感。在短期禁食的情況下,CRTC2的Ser171位點被去磷酸化活化入核與CREB等蛋白形成一個大的轉(zhuǎn)錄復合物,從而起始糖異生的兩個限速酶的轉(zhuǎn)錄,進而啟動糖異生。我們的研究發(fā)現(xiàn),CRTC2在癌癥細胞中存在表達上調(diào)與活化,活化的CRTC2可能通過其轉(zhuǎn)錄活化子CREB上調(diào)自身絲氨酸合成通路的活性,進而促進癌癥的發(fā)生。研究中,我們證明了：在不同組織來源的癌癥細胞系中CRTC2存在不同程度的表達上調(diào)與活化,過度活化的CRTC2促進細胞生長,影響細胞增殖,不影響細胞凋亡；對葡萄糖的利用可能是CRTC2引起生長差異的原因；過度活化的CRTC2不影響葡萄糖的糖攝入與糖酵解,但是它影響了細胞的自身絲氨酸合成通路。CRTC2可能通過其轉(zhuǎn)錄活化因子CREB發(fā)揮功能�；铙w實驗部分,在裸鼠成瘤實驗中,我們發(fā)現(xiàn),相較于對照組,CRTC2敲除后的HepG2細胞,腫瘤發(fā)生的時間明顯延后,同時腫瘤的大小以及重量也明顯下調(diào)。臨床病人樣本分析中,我們發(fā)現(xiàn),相較于癌旁組織,肝癌組織中存在著更多CRTC2的表達,以及更多比例的CRTC2入核活化。同時,Kaplan-Meier survival analysis顯示,CRTC2的入核活化與病人的存活天數(shù)線性相關(guān)。我們的結(jié)果發(fā)現(xiàn)并提示,之前介導糖異生這樣代謝現(xiàn)象的蛋白CRTC2在癌癥中存在過度活化并且存在促進癌癥發(fā)生發(fā)展的功能,并且證明了其可能通過其轉(zhuǎn)錄活化因子CREB持續(xù)活化自身絲氨酸合成通路進而發(fā)揮功能。
【關(guān)鍵詞】：CRTC2 CREB 共活化因子 表達上調(diào) 過度活化 絲氨酸合成通路 腫瘤發(fā)生
【學位授予單位】：中國科學技術(shù)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.2
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 第1章 文獻綜述10-25
• 1.1 前言10
• 1.2 癌癥與其主要特征10-12
• 1.3 CRTC2相關(guān)功能以及關(guān)于其與腫瘤的猜想12-15
• 1.3.1 CRTC2介導的糖異生12-13
• 1.3.2 癌癥惡病質(zhì)暗示癌癥患者中糖異生異常13-15
• 1.4 CREB在癌癥發(fā)生中的作用15-21
• 1.4.1 CREB簡介16
• 1.4.2 CREB與CRTCs16
• 1.4.3 CREB參與的細胞活動16-17
• 1.4.4 CREB及其共活化因子CRTC1在癌癥中的作用17-18
• 1.4.5 CREB在血癌中的作用18-19
• 1.4.6 Mir-34b調(diào)節(jié)CREB19-20
• 1.4.7 CREB相關(guān)總結(jié)與展望20-21
• 1.5 癌癥與自身絲氨酸合成通路21-25
• 1.5.1 癌癥細胞對絲氨酸的依賴21-23
• 1.5.2 人類黑色素瘤中存在PHGDH表達上調(diào)以及葡萄糖代謝調(diào)整23-25
• 第2章 引言25-26
• 第3章 材料和方法26-41
• 3.1 實驗材料26-29
• 3.1.1 細胞系以及小鼠26
• 3.1.2 實驗材料26-28
• 3.1.3 實驗儀器28-29
• 3.2 實驗方法29-41
• 3.2.1 Western Blot(WB,IB)29-31
• 3.2.2 shRNA技術(shù)31-32
• 3.2.3 細胞復蘇32
• 3.2.4 田胞凍存32
• 3.2.5 貼壁細胞傳代培養(yǎng)32-33
• 3.2.6 懸浮細胞傳代培養(yǎng)33
• 3.2.7 實時熒光定量PCR技術(shù)33-35
• 3.2.8 細胞計數(shù)35-36
• 3.2.9 細胞增殖檢測36
• 3.2.10 細胞凋亡分析36-37
• 3.2.11 葡萄糖攝取檢測(glucose uptake)37
• 3.2.12 乳酸生成速率測定37
• 3.2.13 裸鼠成瘤實驗37-38
• 3.2.14 免疫組化實驗38
• 3.2.15 顯著性分析38-39
• 3.2.16 Kalpan-Meier Survival Analysis39-41
• 第4章 實驗結(jié)果41-57
• 4.1 CRTC2在不同細胞系中活化情況不同41
• 4.2 過度活化的CRTC2促進細胞生長41-43
• 4.3 過度活化的CRTC2影響細胞的增殖,對細胞的凋亡基本不存在影響43-44
• 4.4 對葡萄糖的利用可能是引起生長差異的原因44-47
• 4.4.1 過度活化的CRTC2并不影響葡萄糖攝入45-46
• 4.4.2 過度活化的CRTC2不影響糖酵解46-47
• 4.5 過度活化的CRTC2可能影響細胞的自身絲氨酸合成通路47-51
• 4.6 CRTC2可能通過其轉(zhuǎn)錄活化因子CREB發(fā)揮作用51-53
• 4.7 過度活化的CRTC2影響腫瘤的形成和大小53-54
• 4.8 肝癌患者的癌細胞中存在CRTC2過度活化54-57
• 第5章 討論57-60
• 參考文獻60-74
• 致謝74

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 程迎新;杜鵬;李飛;許桂蓮;李梅;肖虹;林江凱;朱剛;王憲榮;馮華;;不同免疫背景小鼠G422膠質(zhì)瘤顱內(nèi)移植瘤模型的建立[J];中國神經(jīng)腫瘤雜志;2009年01期

2 趙雯,史景泉,卞修武,萬瑛,盧佳友;反義GFAP對人惡性膠質(zhì)瘤細胞系CHG-5增殖及分化的影響[J];第三軍醫(yī)大學學報;2004年18期

3 夏爽 ,王金環(huán) ,祁吉;膠質(zhì)瘤的基因?qū)W研究[J];國外醫(yī)學(臨床放射學分冊);2004年04期

4 杜峰;毛華;沙忠心;蔣朝輝;;血脂與C-erbB-2、Ras、p53基因表達相關(guān)性研究[J];貴州醫(yī)藥;2013年07期

5 劉偉才;;二氯乙酸對NB4細胞株凋亡的誘導作用及機制[J];廣東醫(yī)學;2013年18期

6 肖玲;舒暢;唐記華;王曉萍;王高華;;不同時程的慢性不可預計溫和應(yīng)激對大鼠海馬神經(jīng)可塑性相關(guān)蛋白水平的影響[J];神經(jīng)損傷與功能重建;2013年06期

7 王冰;邱紅;;腫瘤標志物在肺癌診斷中的研究進展[J];國際檢驗醫(yī)學雜志;2013年24期

8 馮婷婷;凌孫彬;張陽;;二甲雙胍抗腫瘤作用的研究進展[J];大連醫(yī)科大學學報;2013年04期

9 Hélène Léger;Caroline Smet-Nocca;Amel Attmane-Elakeb;Sara Morley-Fletcher;Arndt G.Benecke;Sebastian Eilebrecht;;A TDG/CBP/RARα Ternary Complex Mediates the Retinoic Acid-dependent Expression of DNA Methylation-sensitive Genes[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2014年01期

10 周清華;祖玲玲;李潞;陳曉禾;陳曉峰;李洋;劉紅雨;孫芝琳;;器官特異性轉(zhuǎn)移肺癌細胞株的篩選及建立[J];中國肺癌雜志;2014年03期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 肖華亮;缺氧對惡性膠質(zhì)瘤細胞“干性”的影響及其機制的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2011年

2 王江;NOK基因在人腦膠質(zhì)細胞瘤增殖和侵襲中的作用及其機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2012年

3 許曉軍;能量代謝異常與髓性白血病化療耐受的研究[D];南方醫(yī)科大學;2012年

4 周芩;雙酚A對男性生殖功能的影響及機制探討[D];山西醫(yī)科大學;2013年

5 李梅;TIGAR通過增加NADPH在腦缺血再灌注損傷中發(fā)揮神經(jīng)保護作用[D];蘇州大學;2013年

6 黃星;凋亡抑制蛋白XIAP抑制自噬促進腫瘤形成的作用機制研究[D];中國科學技術(shù)大學;2013年

7 王文宇;P53突變體獲得性功能在腫瘤發(fā)生中作用機制的研究[D];中國科學技術(shù)大學;2013年

8 顧偉亭;CDK8和SREBP1在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機制研究[D];山東大學;2013年

9 耿丹丹;EphB2對Aβ寡聚體誘導的神經(jīng)毒性損傷和NMDAR信號通路的保護作用[D];河北醫(yī)科大學;2013年

10 佘笑梅;三氧化二砷對急性早幼粒細胞白血病NB4細胞株Warburg效應(yīng)的影響和機制[D];華中科技大學;2013年

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本文編號：689013