本文關(guān)鍵詞：CRTC2在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： CRTC2 CREB 共活化因子 表達(dá)上調(diào) 過度活化 絲氨酸合成通路 腫瘤發(fā)生

【摘要】：肝臟是人體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官,是完成糖原合成糖異生等生理功能的重要場所。機(jī)體在受到病毒、細(xì)菌、寄生蟲感染或者在其他藥物或者酒精的影響下,肝臟細(xì)胞受到破壞,肝功能損害進(jìn)而誘發(fā)肝炎。流行病學(xué)研究顯示,約25%的慢性肝炎病人會(huì)誘發(fā)肝硬化,而每年又有3%-5%的肝硬化病人最終會(huì)發(fā)生肝癌。有研究報(bào)道顯示,在正常肝臟組織轉(zhuǎn)變?yōu)楦伟┙M織的過程中,伴隨著糖異生這樣一個(gè)生理現(xiàn)象的異常。因此,我們便思考,介導(dǎo)這一生理功能的關(guān)鍵性蛋白CRTC2在癌癥發(fā)生過程中扮演著怎樣的角色。CRTC2, CREB (cAMP—and calcium—responsive transcriptional activator)共活化因子,是人體血糖調(diào)節(jié)的關(guān)鍵性蛋白,其目前被報(bào)道的功能僅限于活化促進(jìn)糖異生。CRTC2對(duì)激素和循環(huán)內(nèi)的血糖水平敏感。在短期禁食的情況下,CRTC2的Ser171位點(diǎn)被去磷酸化活化入核與CREB等蛋白形成一個(gè)大的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物,從而起始糖異生的兩個(gè)限速酶的轉(zhuǎn)錄,進(jìn)而啟動(dòng)糖異生。我們的研究發(fā)現(xiàn),CRTC2在癌癥細(xì)胞中存在表達(dá)上調(diào)與活化,活化的CRTC2可能通過其轉(zhuǎn)錄活化子CREB上調(diào)自身絲氨酸合成通路的活性,進(jìn)而促進(jìn)癌癥的發(fā)生。研究中,我們證明了：在不同組織來源的癌癥細(xì)胞系中CRTC2存在不同程度的表達(dá)上調(diào)與活化,過度活化的CRTC2促進(jìn)細(xì)胞生長,影響細(xì)胞增殖,不影響細(xì)胞凋亡；對(duì)葡萄糖的利用可能是CRTC2引起生長差異的原因；過度活化的CRTC2不影響葡萄糖的糖攝入與糖酵解,但是它影響了細(xì)胞的自身絲氨酸合成通路。CRTC2可能通過其轉(zhuǎn)錄活化因子CREB發(fā)揮功能�；铙w實(shí)驗(yàn)部分,在裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn),相較于對(duì)照組,CRTC2敲除后的HepG2細(xì)胞,腫瘤發(fā)生的時(shí)間明顯延后,同時(shí)腫瘤的大小以及重量也明顯下調(diào)。臨床病人樣本分析中,我們發(fā)現(xiàn),相較于癌旁組織,肝癌組織中存在著更多CRTC2的表達(dá),以及更多比例的CRTC2入核活化。同時(shí),Kaplan-Meier survival analysis顯示,CRTC2的入核活化與病人的存活天數(shù)線性相關(guān)。我們的結(jié)果發(fā)現(xiàn)并提示,之前介導(dǎo)糖異生這樣代謝現(xiàn)象的蛋白CRTC2在癌癥中存在過度活化并且存在促進(jìn)癌癥發(fā)生發(fā)展的功能,并且證明了其可能通過其轉(zhuǎn)錄活化因子CREB持續(xù)活化自身絲氨酸合成通路進(jìn)而發(fā)揮功能。
【關(guān)鍵詞】：CRTC2 CREB 共活化因子 表達(dá)上調(diào) 過度活化 絲氨酸合成通路 腫瘤發(fā)生
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.2
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 第1章 文獻(xiàn)綜述10-25
• 1.1 前言10
• 1.2 癌癥與其主要特征10-12
• 1.3 CRTC2相關(guān)功能以及關(guān)于其與腫瘤的猜想12-15
• 1.3.1 CRTC2介導(dǎo)的糖異生12-13
• 1.3.2 癌癥惡病質(zhì)暗示癌癥患者中糖異生異常13-15
• 1.4 CREB在癌癥發(fā)生中的作用15-21
• 1.4.1 CREB簡介16
• 1.4.2 CREB與CRTCs16
• 1.4.3 CREB參與的細(xì)胞活動(dòng)16-17
• 1.4.4 CREB及其共活化因子CRTC1在癌癥中的作用17-18
• 1.4.5 CREB在血癌中的作用18-19
• 1.4.6 Mir-34b調(diào)節(jié)CREB19-20
• 1.4.7 CREB相關(guān)總結(jié)與展望20-21
• 1.5 癌癥與自身絲氨酸合成通路21-25
• 1.5.1 癌癥細(xì)胞對(duì)絲氨酸的依賴21-23
• 1.5.2 人類黑色素瘤中存在PHGDH表達(dá)上調(diào)以及葡萄糖代謝調(diào)整23-25
• 第2章 引言25-26
• 第3章 材料和方法26-41
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料26-29
• 3.1.1 細(xì)胞系以及小鼠26
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)材料26-28
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器28-29
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法29-41
• 3.2.1 Western Blot(WB,IB)29-31
• 3.2.2 shRNA技術(shù)31-32
• 3.2.3 細(xì)胞復(fù)蘇32
• 3.2.4 田胞凍存32
• 3.2.5 貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)32-33
• 3.2.6 懸浮細(xì)胞傳代培養(yǎng)33
• 3.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)33-35
• 3.2.8 細(xì)胞計(jì)數(shù)35-36
• 3.2.9 細(xì)胞增殖檢測36
• 3.2.10 細(xì)胞凋亡分析36-37
• 3.2.11 葡萄糖攝取檢測(glucose uptake)37
• 3.2.12 乳酸生成速率測定37
• 3.2.13 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)37-38
• 3.2.14 免疫組化實(shí)驗(yàn)38
• 3.2.15 顯著性分析38-39
• 3.2.16 Kalpan-Meier Survival Analysis39-41
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-57
• 4.1 CRTC2在不同細(xì)胞系中活化情況不同41
• 4.2 過度活化的CRTC2促進(jìn)細(xì)胞生長41-43
• 4.3 過度活化的CRTC2影響細(xì)胞的增殖,對(duì)細(xì)胞的凋亡基本不存在影響43-44
• 4.4 對(duì)葡萄糖的利用可能是引起生長差異的原因44-47
• 4.4.1 過度活化的CRTC2并不影響葡萄糖攝入45-46
• 4.4.2 過度活化的CRTC2不影響糖酵解46-47
• 4.5 過度活化的CRTC2可能影響細(xì)胞的自身絲氨酸合成通路47-51
• 4.6 CRTC2可能通過其轉(zhuǎn)錄活化因子CREB發(fā)揮作用51-53
• 4.7 過度活化的CRTC2影響腫瘤的形成和大小53-54
• 4.8 肝癌患者的癌細(xì)胞中存在CRTC2過度活化54-57
• 第5章 討論57-60
• 參考文獻(xiàn)60-74
• 致謝74

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：689013