本文關鍵詞：納米活性炭載負吲哚菁綠對淋巴結的示蹤作用的研究

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【摘要】：研究背景和目的目前,臨床上進行乳腺癌前哨淋巴結活檢的常用方法主要有三種,分別是染料示蹤法、核素示蹤法及染料與核素聯(lián)合示蹤法。染料法國外常用染料為專利藍(patent-blue)、活力藍(vital dye)及Isosulfan,而國內(nèi)常用染料為1%亞甲藍。其優(yōu)點是直觀,操作簡單,不需要特殊設備,價格低廉,缺點是具有一定的盲目性,成功率易受操作者的經(jīng)驗和技術影響。核素示蹤劑主要是由硫膠體或大分子右旋糖酐標記的99m锝(99mTc),術前即能探測到“熱點”,能夠更完全的發(fā)現(xiàn)前哨淋巴結,定位準確,但設備昂貴,并且存在輻射的污染。對于有經(jīng)驗的外科醫(yī)師,兩種方法的前哨淋巴結檢出率和準確率無統(tǒng)計學差異。然而,聯(lián)合應用能更準確地示蹤前哨淋巴結,提高檢出率和準確率,降低假陰性率。近年來新興的熒光示蹤法與染料法相比,具有更高的檢出率,且不存在核素的放射性傷害。其原理是熒光示蹤劑注射于乳腺原發(fā)腫瘤或其周圍后,被淋巴系統(tǒng)內(nèi)皮細胞吞噬或經(jīng)內(nèi)皮間隙進入淋巴系統(tǒng),并停留在SLN中。通過激發(fā)光的照射,熒光示蹤劑產(chǎn)生熒光,經(jīng)濾光片和成像儀收集后,成像于屏幕,實現(xiàn)SLN的示蹤。吲哚菁綠(Indocyanine Green, ICG)便是熒光示劑的代表。其又稱靛菁綠,是一種具有近紅外特征吸收峰的三碳吲哚染料,最大發(fā)射波長在795-845 nm之間,并且是兩親性結構,故具有既親水又親油的特性。然而,ICG ICG粒徑太小,導致其在淋巴結中停留時間短,易通過SLN而進入第二站淋巴結,造成SLN假陰性。納米活性炭(activated carbonnanoparticles, ACNP)是一種具有高度的淋巴系統(tǒng)趨向性,且能在淋巴系統(tǒng)中較長時間停留的材料,已作為一種新型的示蹤劑應用于SLNB,操作簡單而安全。但ACNP在靈敏性方面并沒有明顯優(yōu)勢。另外,由于其具有多孔蜂窩樣結構,能較好地吸附藥物,已有報道將其作為藥物載體用于淋巴靶向化療。本研究通過將ICG與ACNP結合形成ICG-ACNP復合體,并在小鼠上進行試驗,探索ACNP是否能提高ICG的示蹤效果。研究方法1. ICG-ACNP混懸液的制備將ACNP粉末混合PVP-K30,加入生理鹽水,超聲分散得到ACNP混懸液。用透視電鏡觀察ACNP的物理表征,并在常溫下觀察其混懸液的穩(wěn)定性。將ACNP吸附ICG制得ICG-ACNP混懸液。用分光光度計測得ICG在最大吸收波長780nm處的吸光度,通過標準曲線得到ICG對應的濃度,進而求得ACNP對ICG的吸附率,得到最優(yōu)化的ACNP與ICG質(zhì)量比及吸附時間。用Zetasizer3000HS納米粒度及電位分析儀測量成功制備的ICG-ACNP的水化粒徑和Zeta電位。2.ICG的濃度選擇將20只BALB/c小鼠隨機分為4組,每組5只,于左后肢足墊皮內(nèi)注射不同濃度的ICG溶液,15分鐘后在活體成像儀中觀察各組胭窩淋巴結顯影情況。3.ICG與ICG-ACNP在小鼠上示蹤效果比較將10只BALB/c小鼠隨機分為2組,每組5只,分別于左后肢足墊皮內(nèi)ICG溶液或ICG-ACNP混懸液。用活體成像儀觀察注射后5、15、30、60、120分鐘淋巴結的顯影情況。結果1. ACNP的物理表征及穩(wěn)定性透射電子顯微鏡下可以看到,ACNP是形態(tài)近似球形的顆粒,表面光滑,雜質(zhì)較少,粒徑約40nm,可見數(shù)個ACNP聚集成團。制備的ACNP混懸液呈黑色,分散均勻,肉眼未見粒團、掛壁或沉淀。對該混懸液離心后,再進行超聲分散,可以恢復原來性狀。2. ICG-ACNP混懸液的制備在ICG濃度為250mg/L時吸附率達到最高,10mg的ACNP吸附了溶液中93%的ICG。因此ICG與ACNP的最佳質(zhì)量比為1：4。ACNP在超聲分散30min后已吸附了52%的ICG,90min后吸附的速率顯著減慢,在120min達到吸附平衡。3.ICG濃度選擇ICG濃度為20、40、80ug/ml時產(chǎn)生的熒光強度無明顯差別(P0.05),但均明顯強于濃度10ug/ml (P0.05).選擇20ug/ml為研究使用的濃度。4.ICG與ICG-ACNP在小鼠上示蹤效果比較注射后5分鐘兩組小鼠胭窩淋巴結均顯影清晰,但ICG-ACNP組熒光強度弱于ICG組(P0.05)。注射后30、60、120min ICG-ACNP組熒光均強于ICG組(P0.05)。注射后60min,ICG組中1只小鼠髂內(nèi)側(cè)淋巴結出現(xiàn)熒光,注射后120min,ICG組共有3只小鼠出現(xiàn)髂內(nèi)側(cè)淋巴結熒光。實驗過程中,ICG-ACNP組始終未見髂骨旁淋巴結熒光。結論1.成功制得了較為穩(wěn)定的納米炭混懸液分散體系,并通過探索不同ICG濃度及不同吸附時間對ACNP吸附效果的影響,確定了ICG-ACNP的最優(yōu)制備條件,為今后的進一步研究奠定了基礎。2.本研究通過將ICG與ACNP結合,提高了ICG的淋巴靶向性,使其能夠更長時間地聚集在SLN中,不容易通過SLN進入第二站引流淋巴結。實驗中并未發(fā)現(xiàn)ACNP對ICG的熒光特性造成影響。其臨床的可行性尚需要進一步的深入研究。同時,本研究也證實了ACNP具有較強的淋巴靶向性,是攜帶藥物進入淋巴系統(tǒng)的理想載體。
【關鍵詞】：乳腺癌 吲哚菁綠 納米活性炭 前哨淋巴結活檢
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 摘要3-7
• ABSTRACT7-12
• 前言12-16
• 第一章 吲哚菁綠-納米活性炭的制備16-25
• 1 材料和方法16-19
• 2 結果19-23
• 3 討論23-24
• 4 結論24-25
• 第二章 吲哚菁綠-納米活性炭對小鼠淋巴結的示蹤25-33
• 1 材料和方法26-28
• 2 結果28-31
• 3 討論31-33
• 4 結論33
• 參考文獻33-40
• 綜述1 納米活性炭在惡性腫瘤中的應用40-49
• 參考文獻45-49
• 綜述2 吲哚菁綠在前哨淋巴結活檢中的應用49-58
• 參考文獻53-58
• 攻讀碩士期間科研成果58-59
• 致謝59-60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 劉進健;;乳腺癌前哨淋巴結手術示蹤劑的比較分析[J];當代醫(yī)學;2013年21期

2 黃炯強;雷建;陳勁松;陳遠光;胡明;柯傳烽;;納米炭在結腸癌根治術中的應用價值[J];中國藥房;2012年18期

3 董怡民,沓小容,姚崇舜,徐惠綿;納米活性炭對氟尿嘧啶的吸附和緩釋作用的實驗研究[J];中國醫(yī)科大學學報;2004年03期

4 鄭瑩;吳春曉;張敏璐;;乳腺癌在中國的流行狀況和疾病特征[J];中國癌癥雜志;2013年08期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉軍;黃林平;;熒光法前哨淋巴結活檢在早期乳腺癌中應用的初步探討[A];2013年中國中西醫(yī)結合普通外科學術會議論文匯編[C];2013年

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本文編號：688958