本文關(guān)鍵詞：口腔癌VEGF誘導(dǎo)致耐受性DC對T細(xì)胞免疫功能的影響

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【摘要】：[目的]研究口腔癌VEGF誘導(dǎo)致耐受性DC對T細(xì)胞免疫功能的影響。[方法]1.體外培養(yǎng)SCC7腫瘤細(xì)胞系,酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)檢測培養(yǎng)上清中VEGF含量；利用Transwell系統(tǒng)將SCC7細(xì)胞系與C57BL/6小鼠骨髓前體細(xì)胞共培養(yǎng),實驗分為四組：對照組、VEGF組、共培養(yǎng)組、抗VEGF組。細(xì)胞因子GM-CSF+IL-4聯(lián)合誘導(dǎo),于培養(yǎng)第5天獲得未成熟DC,倒置顯微鏡觀察DC形態(tài)變化,流式細(xì)胞儀檢測DC表面特異性表型分子CDllc、CD80、 CD86、CD40、MHCⅡ的表達(dá),ELISA檢測各組DC分泌IL-12的水平,混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(mixed lymphocyte reaction, MLR)檢測各組DC對同種異體T淋巴細(xì)胞增殖的影響；2.利用流式細(xì)胞術(shù)和檢測IDO及PD-L1在未成熟DC中表達(dá)情況,qPCR測定IDO及PD-L1 mRNA相對表達(dá)水平,MLR檢測IDO, PD-L1對未成熟DC誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖能力的影響。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件分析。[結(jié)果]1.VEGF在SCC7腫瘤培養(yǎng)上清中的含量隨著培養(yǎng)時間的延長而增加,72小時培養(yǎng)組,VEGF含量達(dá)630pg/ml;小鼠骨髓前體細(xì)胞培養(yǎng)5天后,可得到具有典型形態(tài)和免疫表型的未成熟DC,對照組中CDllc、CD80、CD86、CD40、MHCⅡ的表達(dá)率分別是60.47±6.13%、54.67±0.91%、45.3±0.92%、65.47±1.14%、30.8±1.57%,與對照組相比,V EGF組,SCC7共培養(yǎng)組及抗VGEF組的細(xì)胞數(shù)量減少,CDllc、CD80、 CD86、CD40、MHCⅡ的表達(dá)率均下降,且具有顯著性差異(p0.05),共培養(yǎng)組中各表面分子表達(dá)率稍低于抗VEGF組,但無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)；與對照組相比,VEGF組、共培養(yǎng)組及抗VEGF組分泌IL-12水平降低,具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)；各組未成熟DC能輕度刺激T淋巴細(xì)胞增殖,且隨著DC與T細(xì)胞培養(yǎng)比例的增加,刺激T細(xì)胞增殖能力增強；在相同比例下,VEGF組、共培養(yǎng)組及抗VEGF組間較對照組刺激T細(xì)胞增殖能力較弱,具有顯著性差異(p0.001)；抗VEGF組刺激T細(xì)胞增殖能力較腫瘤上清組有增強趨勢,且在1：10及1：5組別中差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。2.小鼠髓源性未成熟DC在VEGF或口腔癌微環(huán)境的影響下IDO及PD-L1的蛋白和mRNA的相對表達(dá)量增大,且具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。共培養(yǎng)組中IDO及PD-L1的表達(dá)率分別為88.57±1.36%和69.1±0.95%,拮抗VEGF后,IDO及PD-L1的表達(dá)率為79.2±2.55%和61.27±1.7%；高表達(dá)IDO, PD-LI的未成熟DC能輕度刺激T淋巴細(xì)胞增殖,使用小分子抑制劑1MT拮抗IDO和/或單克隆抗體MIH5拮抗PD-L1后能提高未成熟DC對刺激T淋巴細(xì)胞增殖的能力,且聯(lián)合拮抗組的刺激能力最強,具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)[結(jié)論]口腔癌中VEGF可以抑制小鼠髓樣DC分化,維持不成熟狀態(tài),抑制DC對同種異體T淋巴細(xì)胞增殖的刺激能力；口腔癌中VEGF可促進(jìn)未成熟DC表面IDO,PD-L1表達(dá)增加,使其成為致耐受性DC,并通過抑制T淋巴細(xì)胞免疫功能發(fā)揮致耐受作用。
【關(guān)鍵詞】：口腔鱗狀細(xì)胞癌 樹突狀細(xì)胞 吲哚胺2 3雙加氧酶 程序性壞死因子配體1 血管內(nèi)皮生長因子
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.85
【目錄】：

• 前言5-10
• 參考文獻(xiàn)7-10
• 摘要10-12
• abstract12-18
• 第一章 緒論18-27
• 第二章 實驗研究27-51
• 第一部分 口腔癌VEGF對小鼠髓源性未成熟樹突狀細(xì)胞發(fā)育分化的影響27-40
• 1 引言27
• 2 材料和方法27-31
• 2.1 材料27-28
• 2.2 實驗方法28-31
• 2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計31
• 3 實驗結(jié)果31-38
• 3.1 SCC7培養(yǎng)上清中VEGF因子測定31
• 3.2 體外誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞形態(tài)變化31-32
• 3.3 未成熟DC表型分析32-35
• 3.4 DC分泌IL-12的能力35-36
• 3.5 DC誘導(dǎo)同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)36-38
• 4 討論38-39
• 5 結(jié)論39-40
• 第二部分 口腔癌VEGF誘導(dǎo)小鼠髓源性未成熟樹突狀細(xì)胞免疫耐受性的研究40-51
• 1 引言40
• 2 材料和方法40-44
• 2.1 材料40-41
• 2.2 實驗方法41-43
• 2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計43-44
• 3 實驗結(jié)果44-49
• 3.1 流式細(xì)胞術(shù)檢測口腔癌VEGF誘導(dǎo)imDC表達(dá)IDO、PD-L144-45
• 3.2 qPCR檢測IDO、PD-L1基因表達(dá)情況45-47
• 3.3 未成熟DC高表達(dá)IDO,PD-L1對T淋巴細(xì)胞增殖的影響47-49
• 4 討論49-50
• 5 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 全文總結(jié)55-56
• 致謝56-57
• 附錄57-58

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