本文關(guān)鍵詞：工程化CTL凝膠預(yù)防直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)研究

  更多相關(guān)文章： 細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞 透明質(zhì)酸鈉凝膠 直腸癌術(shù)后

【摘要】：研究背景目前,直腸癌已成為全世界范圍內(nèi)最為常見的一種惡性腫瘤,在中國(guó)的發(fā)病率近年來也迅速增長(zhǎng),成為城市發(fā)病率第一的惡性腫瘤。直腸癌手術(shù)治療是對(duì)其根治的最有效方法,然而對(duì)部分低位直腸癌的手術(shù)卻陷入兩難境地,對(duì)于生活質(zhì)量要求較高的患者,腹會(huì)陰聯(lián)合根治術(shù)造成身體、心理創(chuàng)傷往往難以接受,而保肛手術(shù)存在根治不徹底、腫瘤復(fù)發(fā)率高的風(fēng)險(xiǎn),術(shù)后常規(guī)的放、化療又存在副作用大、術(shù)區(qū)粘連的弊端。我們希望能夠找到一種術(shù)中應(yīng)用的輔助治療手段,在局部切除的同時(shí),能夠降低腫瘤的復(fù)發(fā),消滅殘存的惡性腫瘤細(xì)胞,同時(shí)還能減少放療所帶來的副作用。目前,過繼細(xì)胞免疫治療已成為治療惡性腫瘤的第四種療法,在臨床得到廣泛應(yīng)用,也越來越凸顯出其良好療效,在綜合治療惡性腫瘤疾病中顯現(xiàn)出巨大作用。該方法在提高患者自身免疫防御力及殺傷力的同時(shí),積極消滅術(shù)后及放化療后血液、組織內(nèi)殘留的惡性腫瘤細(xì)胞,以實(shí)現(xiàn)降低惡性腫瘤復(fù)發(fā)率、延長(zhǎng)生存期的目標(biāo),有著副作用小、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。在體外培養(yǎng)的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞,具備靶向殺傷腫瘤細(xì)胞特點(diǎn),有效控制腫瘤生長(zhǎng)、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移。國(guó)內(nèi)外對(duì)于CTL細(xì)胞連續(xù)殺傷靶細(xì)胞的高效特點(diǎn)、抗原特異性特點(diǎn)、自身MHC限制性特點(diǎn)有很多研究,在多項(xiàng)臨床試驗(yàn)中有穩(wěn)定的抗腫瘤效果,靜脈回輸CTL細(xì)胞在臨床也有實(shí)際應(yīng)用。而將CTL細(xì)胞與含有大量水分利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)運(yùn)輸及免疫活性細(xì)胞遷移、具有網(wǎng)格結(jié)構(gòu)的凝膠材料結(jié)合構(gòu)建類淋巴組織卻在國(guó)際上沒有報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)室前期研究證實(shí)透明質(zhì)酸鈉與免疫活性細(xì)胞結(jié)合能夠最大限度保持其活性并發(fā)揮最大殺傷能力。故本實(shí)驗(yàn)擬應(yīng)用CTL細(xì)胞結(jié)合透明質(zhì)酸鈉凝膠構(gòu)建工程化類淋巴組織,以觀察其預(yù)防裸鼠直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的療效。研究目的建立裸鼠直腸癌局部切除模型,通過制備CTL透明質(zhì)酸鈉凝膠構(gòu)建的工程化類淋巴組織,對(duì)CTL凝膠預(yù)防裸鼠直腸癌切除后復(fù)發(fā)情況進(jìn)行分析,為CTL凝膠的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。研究方法：1、利用人結(jié)腸癌sw480細(xì)胞系建立裸鼠低位直腸癌模型,一周后利用外科能量平臺(tái)進(jìn)行切除,構(gòu)建裸鼠低位直腸癌切除模型；2、提取健康人血液,密度梯度離心分離PBMCs,制備載荷sw480抗原的DC細(xì)胞及T細(xì)胞,兩周后收獲CTL細(xì)胞；3、稀釋透明質(zhì)酸鈉凝膠,取CTL細(xì)胞1.8×10。,制備CTL凝膠待局部注射,將另一部分CTL細(xì)胞與無血清培養(yǎng)基混合,使細(xì)胞數(shù)達(dá)到6×107待尾靜脈注射；4、實(shí)驗(yàn)組手術(shù)部位周圍局部注射CTL凝膠,其中一組注射凝膠同時(shí)尾靜脈注射CTL溶液；5、觀察腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況,每日記錄腫瘤生長(zhǎng)變化情況,兩周后處死全部裸鼠,術(shù)區(qū)拍照對(duì)比,腫瘤、肝、脾、腫大淋巴結(jié)稱重,血液行血常規(guī)檢查,血液及研磨后脾臟行流式細(xì)胞儀檢測(cè),腫瘤及周圍組織標(biāo)本送病理檢查、免疫組化檢查。6、統(tǒng)計(jì)分析效果評(píng)價(jià)。研究結(jié)果1、成功構(gòu)建出裸鼠低位直腸癌模型及裸鼠低位直腸癌切除模型；2、手術(shù)切除+CTL凝膠+尾靜脈注射組抑瘤率為89.45%,手術(shù)切除+CTL凝膠組82.21%,與其他三組比較差異顯著；3、手術(shù)切除+CTL凝膠+尾靜脈注射組腫瘤重量與手術(shù)切除+CTL凝膠組比較有差異(P0.05),與手術(shù)切除組、凝膠組及對(duì)照組相比差異顯著(P0.01)；4、手術(shù)切除+CTL凝膠+尾靜脈注射組淋巴細(xì)胞比例、血液中T細(xì)胞比例、脾指數(shù)均與其他三組差異顯著(P0.01)；5、手術(shù)切除+CTL凝膠+尾靜脈注射組及手術(shù)切除+CTL凝膠組復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移率與手術(shù)切除組、凝膠組及對(duì)照組相比差異顯著；6、病理結(jié)果提示手術(shù)切除+CTL凝膠+尾靜脈注射組及手術(shù)切除+CTL凝膠組腫瘤切除原位無復(fù)發(fā),無腫瘤組織殘留,免疫組化檢查顯示其腫瘤切除部位周圍有大量T細(xì)胞浸潤(rùn),單純凝膠組腫瘤周圍大量T細(xì)胞浸潤(rùn)。研究結(jié)論1、本研究制備的裸鼠直腸癌模型及裸鼠直腸癌局部切除模型符合直腸癌病理特點(diǎn),制瘤率高,模擬了手術(shù)切除的過程及術(shù)后病理生理學(xué)特點(diǎn),具備了直腸癌局部切除的特征,具有操作性強(qiáng)、方法簡(jiǎn)便、可控性高的特點(diǎn),對(duì)研究直腸癌手術(shù)及輔助治療具有較高的應(yīng)用價(jià)值；2、CTL凝膠能夠有效抑制裸鼠直腸癌切除術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及種植,能夠提升T淋巴細(xì)胞數(shù)量、增強(qiáng)機(jī)體免疫能力,有效殺傷腫瘤細(xì)胞,減輕炎癥反應(yīng),減緩疾病進(jìn)展；3、CTL凝膠聯(lián)合手術(shù)及靜脈輸注CTL細(xì)胞對(duì)與直腸癌術(shù)后有良好療效,減少術(shù)后粘連,有效殺傷殘留腫瘤細(xì)胞,增強(qiáng)了CTL持續(xù)抗瘤效果,改善免疫環(huán)境,增強(qiáng)了單獨(dú)手術(shù)及單獨(dú)免疫過繼治療的效果,可以作為直腸癌手術(shù)輔助治療手段。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞 透明質(zhì)酸鈉凝膠 直腸癌術(shù)后
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.37
【目錄】：

• 中文摘要8-11
• ABSTRACT11-15
• 前言15-20
• 參考文獻(xiàn)17-20
• 第一章 裸鼠直腸癌切除模型建立20-29
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料20-22
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞株20
• 1.1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物20
• 1.1.1.2 細(xì)胞株20
• 1.1.2 主要試劑20-21
• 1.1.3 主要儀器21-22
• 1.1.4 試劑配置22
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法22-24
• 1.2.1 人結(jié)直腸sw480腫瘤細(xì)胞復(fù)蘇以及培養(yǎng)22-23
• 1.2.2 裸鼠直腸癌動(dòng)物模型建立23
• 1.2.3 裸鼠直腸癌切除模型建立23-24
• 1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析24
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-26
• 1.3.1 裸鼠直腸癌模型建造情況24-25
• 1.3.2 裸鼠直腸癌局部切除模型建立情況25-26
• 第四節(jié) 討論26-29
• 第二章 工程化CTL凝膠制備29-36
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料29-31
• 2.1.1 研究對(duì)象29
• 2.1.2 主要試劑29-30
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器30-31
• 2.1.4 主要試劑配制方法31
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法31-33
• 2.2.1 密度梯度離心分離PBMCs31-32
• 2.2.2 DC細(xì)胞培養(yǎng)32
• 2.2.3 CTL細(xì)胞培養(yǎng)32
• 2.2.4 透明質(zhì)酸鈉凝膠制備32-33
• 2.2.5 工程化CTL凝膠制備33
• 第三節(jié) 結(jié)果33-35
• 2.3.1 CTL細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果33
• 2.3.2 CTL細(xì)胞流式檢測(cè)結(jié)果33-34
• 2.3.3 光鏡下工程化CTL凝膠中CTL細(xì)胞生長(zhǎng)情況34-35
• 第四節(jié) 討論35-36
• 第三章 工程化CTL凝膠預(yù)防直腸癌局部切除術(shù)后復(fù)發(fā)的實(shí)驗(yàn)研究36-56
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料36-39
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞株36-37
• 3.1.2 主要試劑37-38
• 3.1.3 主要儀器38-39
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法39-43
• 3.2.1 CTL細(xì)胞培養(yǎng)及取用39
• 3.2.2 裸鼠直腸癌模型建立39
• 3.2.3 各組治療干預(yù)方法39-41
• 3.2.4 觀察各組裸鼠狀態(tài)及腫瘤生長(zhǎng)情況41
• 3.2.5 裸鼠眼球取血、測(cè)血常規(guī)41
• 3.2.6 觀察腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移情況,淋巴節(jié)轉(zhuǎn)移情況41
• 3.2.7 測(cè)定脾指數(shù)、脾臟淋巴細(xì)胞提取41-42
• 3.2.8 測(cè)量外周血、脾臟免疫細(xì)胞含量42
• 3.2.9 組織病理學(xué)檢查42
• 3.2.10 計(jì)算抑瘤率42-43
• 3.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析43
• 第三節(jié) 結(jié)果43-53
• 3.3.1 各組裸鼠腫瘤生長(zhǎng)情況43-44
• 3.3.2 腫瘤重量44-45
• 3.3.4 各組抑瘤率比較45
• 3.3.5 各組脾指數(shù)比較45-46
• 3.3.6 復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移情況46-48
• 3.3.7 病理HE染色切片情況48-49
• 3.3.8 免疫組化檢查49-50
• 3.3.9 血液結(jié)果50-51
• 3.3.10 各組裸鼠外周血及脾臟免疫細(xì)胞含量比較51-53
• 第四節(jié) 討論53-56
• 第四章 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-62
• 綜述62-67
• 參考文獻(xiàn)65-67
• 碩士期間發(fā)表論文情況67
• 獲得獎(jiǎng)勵(lì)情況67-68
• 致謝68-69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 隋永領(lǐng);邵峰;崔兆清;楊道貴;于俊秀;張彥波;魏法才;;直腸外翻切除結(jié)腸直腸(肛管)吻合術(shù)治療低位直腸癌28例報(bào)告[J];結(jié)直腸肛門外科;2007年01期

2 杜曉輝,鄭偉,宋少柏,孔慶龍;結(jié)直腸癌患者血清血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子含量分析及其臨床意義[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2000年06期

3 杜曉輝;;腹腔鏡結(jié)直腸手術(shù)并發(fā)癥防治[J];中國(guó)實(shí)用外科雜志;2011年09期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 鄒振玉;蟾皮抗腫瘤活性組分篩選及荷人結(jié)腸癌裸鼠淋巴道化療的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2013年

，

本文編號(hào)：681829