本文關(guān)鍵詞：Rapamycin聯(lián)合SAHA對(duì)人肺腺癌細(xì)胞的放療增敏效應(yīng)及機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 自噬 乙�；� A549細(xì)胞 放療敏感性 DNA雙鏈斷裂損傷

【摘要】：目的:觀察雷帕霉素(Rapamycin)聯(lián)合組蛋白去乙酰化酶抑制劑(histone deacetylase inhibitor,HDACi)辛二酰苯胺異羥肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞放療敏感性的影響并探討可能的分子機(jī)制。方法:1.Rapamycin、SAHA聯(lián)合用藥劑量確定:體外培養(yǎng)A549細(xì)胞,給予不同濃度Rapamycin(0 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L、1000nmol/L)、SAHA(0μmol/L、1μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)以及兩藥交叉聯(lián)合處理24h,MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率,計(jì)算兩藥聯(lián)合作用A549細(xì)胞24h后10%細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的濃度(IC10)。2.觀察Rapamycin聯(lián)合SAHA對(duì)A549細(xì)胞放療敏感性影響:A549細(xì)胞給予IC10處理24h,后給予4Gy X線照射,采用細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)A549細(xì)胞增殖活性。3.Rapamycin聯(lián)合SAHA放療增敏機(jī)制研究(1)檢測(cè)Rapamycin聯(lián)合SAHA對(duì)A549細(xì)胞放療后DSBs修復(fù)影響:A549細(xì)胞給予IC10處理24h,后給予4Gy X線照射,采用Western blot和免疫熒光檢測(cè)放療后1h和24hγ-H2AX蛋白表達(dá)變化和焦點(diǎn)形成;采用Western blot檢測(cè)放療后4h Rad51、Ku80、Ku70蛋白表達(dá)變化;采用RT-q PCR檢測(cè)放療后4h Rad51m RNA、Ku80 m RNA、Ku70 m RNA表達(dá)變化。(2)檢測(cè)Rapamycin聯(lián)合SAHA對(duì)A549細(xì)胞自噬和乙�；绊�:A549細(xì)胞給予Rapamycin或/和SAHA處理24h,以及4Gy X線照射,采用透射電鏡檢測(cè)A549細(xì)胞自噬體形成情況;Western blot檢測(cè)LC3、p62表達(dá)變化。A549細(xì)胞給予SAHA、Rapamycin+SAHA處理24h,采用Western blot檢測(cè)乙�；M蛋白H3(Acetyl-Histone H3,Ac-H3)表達(dá)變化。結(jié)果:1.Rapamycin、SAHA聯(lián)合用藥劑量確定:Rapamycin和SAHA對(duì)A549細(xì)胞生長(zhǎng)均具有抑制作用,呈劑量依賴(lài)性;聯(lián)合用藥組對(duì)A549細(xì)胞的抑制率較單獨(dú)用藥組增高(p0.05)。兩藥聯(lián)合劑量濃度IC10=Rapamycin:100 nmol/L;SAHA:2.5μmol/L。2.Rapamycin聯(lián)合SAHA影響A549細(xì)胞放療敏感性:細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),CTL組、IR組、IR+R組、IR+S組、IR+R+S組細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)(survival fraction,SF)分別為100.0±0.00%、67.8±6.32%、43.1±7.18%、58.5±1.17%、21.1±7.01%,相比IR組,IR+R+S組SF下降最明顯(p0.05)。3.Rapamycin聯(lián)合SAHA影響A549細(xì)胞DSBs修復(fù)過(guò)程:(1)Western blot和免疫熒光檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),相比CTL組,放療后1h各實(shí)驗(yàn)組γ-H2AX蛋白和γ-H2AX焦點(diǎn)表達(dá)增加(p0.05),組間無(wú)差異(p0.05),24h后各實(shí)驗(yàn)組γ-H2AX蛋白和γ-H2AX焦點(diǎn)表達(dá)均有所下降,IR+R+S組下降幅度最小(p0.05)。(2)Western blot檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),相比CTL組,IR組Rad51蛋白表達(dá)增加(p0.05),Ku80、Ku70蛋白表達(dá)無(wú)顯著差異(p0.05)。相比IR組,IR+R組、IR+R+S組Rad51蛋白表達(dá)下降(p0.05),IR+R組、IR+S組、IR+R+S組Ku80蛋白表達(dá)下降(p0.05),IR+R+S組Ku70蛋白表達(dá)下降(p0.05);相比各實(shí)驗(yàn)組IR+R+S組Rad51、Ku80、Ku70蛋白表達(dá)下降最大(p0.05)。(3)RT-q PCR檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),相比CTL組,放療后4h IR組、IR+R組Rad51、Ku80、Ku70 m RNA表達(dá)均有所增加(p0.05),組間無(wú)差異(p0.05)。相比IR組,IR+S組、IR+R+S組Rad51、Ku80、Ku70 m RNA表達(dá)均有不同程度下降(p0.05),組間無(wú)差異(p0.05)。4.Rapamycin聯(lián)合SAHA影響A549細(xì)胞自噬和乙�；�:(1)透射電鏡結(jié)果發(fā)現(xiàn),Rapamycin、放療均能使A549細(xì)胞自噬體形成增加,Rapamycin作用最為明顯。Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn),Rapamycin、放療可誘導(dǎo)LC3II蛋白表達(dá)增加,LC3II/LC3I比值增高,p62蛋白表達(dá)降低。(2)Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn),SAHA可誘導(dǎo)Ac-H3表達(dá)增多。結(jié)論:1.Rapamycin聯(lián)合SAHA可增加A549細(xì)胞放療敏感性。2.Rapamycin聯(lián)合SAHA放療增敏的機(jī)制可能通過(guò)上調(diào)自噬降解乙�；疍SBs修復(fù)蛋白影響DSBs修復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：自噬 乙�；� A549細(xì)胞 放療敏感性 DNA雙鏈斷裂損傷
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-11
• 中英文縮略詞表11-12
• 第1章 引言12-16
• 第2章 材料與方法16-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 2.1.1 主要儀器16-17
• 2.1.2 主要試劑17-18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-29
• 2.2.1 主要試劑的配制18-19
• 2.2.2 去RNA酶的處理19-20
• 2.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)與照射條件20-21
• 2.2.4 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率21
• 2.2.5 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖21-22
• 2.2.6 免疫熒光檢測(cè) γ-H2AX蛋白表達(dá)變化22-23
• 2.2.7 Western blot法檢測(cè)蛋白表達(dá)的變化23-25
• 2.2.8 RT-q PCR檢測(cè)修復(fù)分子m RNA的表達(dá)變化25-27
• 2.2.9 電鏡檢測(cè)自噬體變化27-28
• 2.2.10 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析28-29
• 第3章 結(jié)果29-38
• 3.1 Rapamycin、SAHA聯(lián)合用藥劑量確定29-30
• 3.2 Rapamycin聯(lián)合SAHA對(duì)A549細(xì)胞放療敏感性的影響30-31
• 3.3 Rapamycin聯(lián)合SAHA對(duì)A549細(xì)胞放療增敏的機(jī)制31-38
• 3.3.1 Rapamycin聯(lián)合SAHA對(duì)DSBs修復(fù)通路的影響31-35
• 3.3.2 Rapamycin、SAHA可能通過(guò)上調(diào)自噬清除乙酰化DSBs修復(fù)蛋白35-38
• 第4章 討論38-42
• 4.1 Rapamycin聯(lián)合SAHA增加A549細(xì)胞放療敏感性38-39
• 4.2 Rapamycin聯(lián)合SAHA通過(guò)影響DSBs修復(fù)通路增加放療敏性39-40
• 4.3 Rapamycin聯(lián)合SAHA可能通過(guò)上調(diào)自噬降解乙�；疍SBs修復(fù)蛋白影響DSBs修復(fù)40-42
• 第5章 結(jié)論42-43
• 5.1 結(jié)論42
• 5.2 進(jìn)一步工作的方向42-43
• 致謝43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果48-49
• 綜述 組蛋白去乙酰化酶抑制劑在非小細(xì)胞肺癌中的研究進(jìn)展49-58
• 參考文獻(xiàn)55-58

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 韓寶林;王軒;李立芳;王永志;王廣舜;;γH2AX對(duì)肺癌放射敏感性的預(yù)測(cè)效果[J];天津醫(yī)藥;2014年09期

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本文編號(hào)：681717