本文關(guān)鍵詞：Klotho基因表達(dá)蛋白KL1在人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中的作用及其相關(guān)機(jī)制的研究

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【摘要】：背景：肺癌是目前最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率均較高。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,肺癌的治療有了顯著的進(jìn)步,但是,肺癌患者尤其是非小細(xì)胞肺癌患者的五年生存率仍較低,只有21%左右。因此尋求新的安全有效的治療方法就顯得尤為重要。目前多項(xiàng)研究表明,基因與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切聯(lián)系,基因治療將為腫瘤治療提供新思路。老化是癌癥發(fā)生發(fā)展中的一個(gè)極其重要而又獨(dú)立的危險(xiǎn)因素,隨著年齡的增加,癌癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著上升。新近多項(xiàng)研究表明,老化相關(guān)基因Klotho不僅具有抗衰老作用,還與腫瘤尤其是肺癌的發(fā)生發(fā)展有著密切聯(lián)系。有研究表明,該基因主要通過調(diào)控胰島素樣生長因子-1 (Insulin-like growth factor-1, IGF-1),堿性成纖維生長因子(basic fibroblast growth factor, bFGF), Wnt/β-catenin, PI3k/Akt等信號通路在肺腺癌中發(fā)揮抑癌作用。KL1是Klotho基因表達(dá)的一種蛋白,可以通過對其信使RNA(mRNA)的選擇性剪切進(jìn)而直接翻譯表達(dá)而成,或者通過對其翻譯表達(dá)的完整蛋白KL,利用ADAM10/17酶切而成。有研究者發(fā)現(xiàn),KL1在胰腺癌中,能夠發(fā)揮與KL相似的抑癌作用,并且不影響成纖維細(xì)胞生長因子23(fibroblast growth factor23, FGF23)信號通路,具有更高的安全性。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn),胰腺癌與非小細(xì)胞肺癌具有相似的發(fā)病機(jī)制,因此我們推測KL1在非小細(xì)胞肺癌中可能也具有抑癌作用,且安全性較高。目的：研究人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中KL1的相關(guān)功能及機(jī)制。方法：體外培養(yǎng)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549,A549/DDP,PC9細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分為3組：對照組(PCDNA3.1), KL1過表達(dá)組(PCDNA3.1-KL1), KL過表達(dá)組(PCDNA3.1-KL)。細(xì)胞轉(zhuǎn)染后通過Western blot驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率。分組處理后觀察細(xì)胞生長、增殖、凋亡、遷移能力以及順鉑敏感性等,同時(shí)觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞IGF-1,bFGF以及FGF23信號通路中下游信號蛋白磷酸化水平的變化。結(jié)果：轉(zhuǎn)染后48 h細(xì)胞分別高表達(dá)外源性KL,KL1；與過表達(dá)KL組相比,過表達(dá)KL1組細(xì)胞生長、增殖并無明顯變化；與對照組相比,過表達(dá)組細(xì)胞生長、增殖均被明顯抑制(P0.01)。與對照組相比,過表達(dá)KL1或KL能明顯促進(jìn)A549細(xì)胞凋亡(P0.01)。與對照組相比,過表達(dá)KL1或KL能夠明顯增加細(xì)胞遷移能力(P0.01)。過表達(dá)KL1或KL能夠增加細(xì)胞對順鉑的敏感性(P0.01)。與對照組相比,過表達(dá)KL1能夠明顯降低IGF-1通路的下游信號蛋白AKT,ERX的磷酸化水平(P0.01),也能夠明顯降低bFGF通路的下游信號蛋白ERK的磷酸化水平(P0.01),該作用與KL相似。過表達(dá)KL后,FGF23下游信號蛋白ERK磷酸化水平較對照組明顯增高,而過表達(dá)KL1后該蛋白磷酸化水平無明顯改變。結(jié)論：KL1與KL蛋白具有類似的能夠抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞生長、增殖、遷移,促進(jìn)細(xì)胞凋亡和降低細(xì)胞對順鉑耐藥的作用,同時(shí)KL1具有與KL相似的抑制IGF-1,bFGF信號通路激活的作用。據(jù)此我們推測,KL1可能是K1otho基因在腫瘤抑制中的主要功能蛋白,并且KL1不影響FGF23信號通路,可能對機(jī)體內(nèi)環(huán)境影響較小,具有更高的安全性。
【關(guān)鍵詞】：肺癌 Klotho基因 胰島素樣生長因子-1 堿性成纖維生長因子 成纖維細(xì)胞生長因子23 增殖 凋亡 耐藥
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 縮略詞表6-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-28
• 1 材料13-14
• 1.1 細(xì)胞13
• 1.2 質(zhì)粒13
• 1.3 主要試劑13
• 1.4 主要儀器設(shè)備13-14
• 2 方法14-28
• 2.1 PCDNA3.1,PCDNA3.1-KL,PCDNA3.1-KL1質(zhì)粒的擴(kuò)增與鑒定14-17
• 2.2 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染17-23
• 2.3 評估細(xì)胞生長活性23-24
• 2.4 評估細(xì)胞增殖活性24
• 2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡24-25
• 2.6 評估細(xì)胞遷移能力25
• 2.7 順鉑敏感性評估25-26
• 2.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染后IGF-1,bFGF和FGF23信號通路激活檢測26-27
• 2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析27
• 2.10 主要實(shí)驗(yàn)流程27-28
• 結(jié)果28-36
• 1. 過表達(dá)KL1后對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞生長的影響28-29
• 2. 過表達(dá)KL1后細(xì)胞增殖和凋亡活性檢測29-30
• 3. 過表達(dá)KL1后細(xì)胞遷移性影響30-31
• 4. 過表達(dá)KL1對細(xì)胞順鉑耐藥性的影響31-32
• 5. 非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞過表達(dá)KL1對IGF-1和bFGF信號通路的影響32-34
• 6. 非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞過表達(dá)KL1和KL對FGF23信號通路的影響34-36
• 分析與討論36-38
• 小結(jié)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 文獻(xiàn)綜述42-55
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文55-57
• 致謝57

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號：677968