發(fā)布時間：2017-08-14 11:05

  本文關(guān)鍵詞：肝素酶參與肝癌微血管捕獲的證據(jù)研究

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【摘要】：目的:尋找肝素酶(heparanase,HPSE)影響肝癌細胞與血管內(nèi)皮細胞粘附的分子學(xué)證據(jù),并獲得HPSE參與肝癌微血管捕獲的細胞學(xué)證據(jù)。方法:1)設(shè)計HPSE基因干擾序列并構(gòu)建質(zhì)粒,以脂質(zhì)體法瞬時轉(zhuǎn)染細胞后通過Real-time qPCR和Western-Blot篩選出最優(yōu)干擾序列;構(gòu)建HPSE基因過表達慢病毒,感染細胞后運用Real-time qPCR和Western-Blot檢驗感染效果。2)以上述篩選的最優(yōu)干擾序列轉(zhuǎn)染HepG-2細胞抑制HPSE基因表達,同時設(shè)置非轉(zhuǎn)染組、陰性對照組和空轉(zhuǎn)組,96孔板中觀察各組細胞與內(nèi)皮細胞HUVEC-C粘附情況,以0.25%Rose Bengal染色,脫色后測量各孔OD值并分析比較。3)以HPSE過表達慢病毒載體感染MHCC97-H細胞,同時設(shè)置非感染組和陰性對照組,96孔板中觀察各組細胞與內(nèi)皮細胞HUVEC-C粘附情況,并觀察各組細胞在Transwell小室中跨內(nèi)皮細胞遷移情況,以0.25%Rose Bengal染色,脫色后測量各孔OD值并分析比較。結(jié)果:1)成功篩選出HPSE基因最優(yōu)干擾序列siHPSE-3158,并驗證了慢病毒載體可使MHCC97-H細胞中HPSE基因過表達;2)排除內(nèi)皮細胞的影響后,非轉(zhuǎn)染組HepG-2細胞與內(nèi)皮細胞粘附率(0.351±0.030)高于HPSE基因干擾組(0.239±0.019,P0.01);陰性對照組(0.291±0.027)和空轉(zhuǎn)組(0.297±0.032)粘附率均低于非轉(zhuǎn)染組(P0.05),但高于HPSE基因干擾組(P0.05);陰性對照組和空轉(zhuǎn)組粘附率無明顯差異(P0.05);3)排除內(nèi)皮細胞的影響后,HPSE過表達組MHCC97-H細胞與內(nèi)皮細胞粘附率(0.512±0.049)明顯高于其余兩組(P0.01),陰性對照組(0.370±0.027)與未處理組的MHCC97-H細胞組(0.377±0.050)與內(nèi)皮細胞粘附率無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);4)排除內(nèi)皮細胞的影響后,HPSE過表達組MHCC97-H細胞跨內(nèi)皮細胞遷移數(shù)量(0.431±0.043)多于明顯其余兩組(P0.01),陰性對照組(0.306±0.026)與未處理組(0.295±0.044)的MHCC97-H細胞跨內(nèi)皮細胞遷移數(shù)量無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:運用基因干擾、過表達及體外實驗等手段,證實HPSE在促進肝癌細胞與血管內(nèi)皮細胞粘附以及跨內(nèi)皮細胞遷移等方面發(fā)揮重要作用,參與介導(dǎo)了肝癌微血管捕獲過程。
【關(guān)鍵詞】：肝素酶 肝癌 粘附 遷移
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 前言13-18
• 材料18-25
• 1. 細胞系18
• 2. 細菌和質(zhì)粒18
• 3.慢病毒載體18
• 4. 主要試劑18-19
• 5.部分試劑配置19-22
• 6.實驗主要儀器22-25
• 研究內(nèi)容與方法25-41
• 1.研究內(nèi)容25
• 2.HPSE基因表達的q PCR驗證25-29
• 3. HPSE基因RNA干擾瞬時轉(zhuǎn)染Hep G-2 細胞及質(zhì)粒篩選29-36
• 4. HPSE對Hep G-2 細胞和內(nèi)皮細胞粘附的影響36-37
• 5. 慢病毒感染MHCC97-H細胞HPSE基因過表達的驗證37-38
• 6. HPSE基因過表達對MHCC97-H細胞和內(nèi)皮細胞粘附的影響38-39
• 7. HPSE對MHCC97-H細胞跨內(nèi)皮細胞遷移的影響39-41
• 結(jié)果41-55
• 1. 細胞HPSE基因表達的q PCR驗證41
• 2. HPSE基因RNA干擾瞬時轉(zhuǎn)染Hep G-2 細胞及質(zhì)粒篩選41-45
• 3. HPSE對Hep G-2 細胞和內(nèi)皮細胞粘附的影響45-47
• 4. 慢病毒感染MHCC97-H細胞HPSE基因過表達的驗證47-49
• 5. HPSE對MHCC97-H細胞和內(nèi)皮細胞粘附的影響49-52
• 6. HPSE對MHCC97-H細胞跨內(nèi)皮細胞遷移影響52-55
• 討論55-61
• 結(jié)論61-62
• 參考文獻62-69
• 綜述69-77
• 參考文獻73-77
• 附錄77-78
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果78-79
• 致謝79

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1 馮勇,劉君;肝動脈化療栓塞治療肝癌[J];世界華人消化雜志;2004年06期

2 曹燕燕,邊建超,郭惠媛,王啟敏,王啟軍,張竹梅,湯伯明;洛陽市肝癌的出生順序分析[J];復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2005年04期

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4 周儉;;從微創(chuàng)到肝移植巨創(chuàng)治療肝癌的辯證思維[J];醫(yī)學(xué)與哲學(xué)(臨床決策論壇版);2008年10期

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6 黃，

本文編號：672305