本文關(guān)鍵詞：癌基因DEK調(diào)節(jié)VEGF表達及其在血管生成中作用的初步研究

  更多相關(guān)文章： 癌基因DEK 血管內(nèi)皮生長因子VEGF 缺氧誘導因子HIF-1a 血管生成

【摘要】：腫瘤細胞通過血管獲得營養(yǎng),同時血管也為腫瘤轉(zhuǎn)移提供通道。抑制腫瘤血管生成,可以在一定程度上抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在調(diào)控血管生成中發(fā)揮重要作用,也是調(diào)節(jié)腫瘤血管生長及腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因子。癌基因DEK在多種腫瘤中高表達,DEK過度表達與多種癌癥的不良預(yù)后相關(guān)。目前DEK在調(diào)節(jié)腫瘤血管生成中的作用尚不明確。本研究探討了癌基因DEK調(diào)控VEGF表達及在血管生成中的作用,為進一步深入研究DEK在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用奠定實驗基礎(chǔ)。本研究包括以下內(nèi)容:1.癌基因DEK對VEGF表達的影響及在調(diào)控血管生成中作用的研究通過熒光素酶活性、RT-PCR檢測DEK對VEGF表達的影響,并觀察DEK在HUVEC細胞生長、遷移及體外成管中的作用。利用雞胚絨毛尿囊膜模型,觀察DEK對體內(nèi)血管形成的影響。結(jié)果表明:DEK激活VEGF的轉(zhuǎn)錄,增加VEGF表達,并促進HUVEC細胞的生長、遷移及體內(nèi)、外血管生成。2.癌基因DEK通過VEGF影響血管內(nèi)皮細胞的生物學活性研究利用VEGF中和性抗體封閉DEK過表達乳腺癌細胞ZR75-1分泌的VEGF,以其上清作為條件培養(yǎng)基培養(yǎng)HUVEC,觀察DEK對HUVEC細胞的生長,遷移及體外血管生成的作用,并利用雞胚絨毛尿囊膜模型,觀察其對體內(nèi)血管形成的影響。結(jié)果顯示:DEK通過VEGF促進HUVEC細胞的生長、遷移及體內(nèi)、外血管生成。3.癌基因DEK促進VEGF表達與HIF-1a相關(guān)性的研究在缺氧及敲低HIF-1a表達的條件下,檢測DEK對VEGF表達的影響,并觀察在敲低HIF-1a表達時,DEK對HUVEC細胞生物學活性的影響。結(jié)果表明:DEK部分依賴于HIF-1a促進HUVEC細胞的生長、遷移及體內(nèi)、外血管生成。4.癌基因DEK調(diào)控VEGF分子機制的初步研究利用CHIP、EMSA尋找DEK與VEGF啟動子的結(jié)合點,結(jié)果顯示:DEK通過DRE和HRE募集于VEGF啟動子,HIF-1a只募集于HRE調(diào)控VEGF的轉(zhuǎn)錄活性。5.癌基因DEK與HIF-1a的相互關(guān)系研究通過GST pull-down和免疫共沉淀確認DEK與HIF-1a的相互關(guān)系,結(jié)果表明:在生理條件下,DEK與HIF-1a存在相互作用。結(jié)論:1.癌基因DEK通過促進VEGF表達影響血管生成;2.癌基因DEK可與VEGF啟動子結(jié)合,其對VEGF表達的調(diào)控部分依賴于缺氧誘導因子HIF-1a。
【關(guān)鍵詞】：癌基因DEK 血管內(nèi)皮生長因子VEGF 缺氧誘導因子HIF-1a 血管生成
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 英文縮寫詞表12-13
• 第一章 引言13-23
• 1.1 血管內(nèi)皮因子（VEGF）與腫瘤血管生成13-17
• 1.1.1 VEGF的生物學特征13-14
• 1.1.2 VEGF的表達調(diào)控14-15
• 1.1.3 血管生成與腫瘤15-16
• 1.1.4 VEGF與乳腺癌相關(guān)研究16-17
• 1.2 缺氧誘導因子（HIF-1）與腫瘤血管生成17-20
• 1.2.1 HIF-1 概述17-18
• 1.2.2 缺氧與血管形成18-20
• 1.3 DEK與乳腺癌相關(guān)研究20-23
• 1.3.1 DEK蛋白概述20-21
• 1.3.2 DEK與腫瘤21-23
• 第二章 癌基因DEK對VEGF表達的影響及在調(diào)控血管生成中的功能研究23-35
• 2.1 材料23-25
• 2.1.1 細胞株23
• 2.1.2 質(zhì)粒23
• 2.1.3 試劑23-24
• 2.1.4 細胞培養(yǎng)試劑和轉(zhuǎn)染試劑24
• 2.1.5 抗體24
• 2.1.6 主要實驗儀器24
• 2.1.7 常用溶液配方24-25
• 2.2 方法25-30
• 2.2.1 慢病毒包裝及哺乳動物細胞穩(wěn)定克隆的制備25-26
• 2.2.2 哺乳動物細胞的轉(zhuǎn)染26
• 2.2.3 熒光素酶 β-半乳糖苷酶活性測定26-27
• 2.2.4 總RNA的提取27
• 2.2.5 反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）27-28
• 2.2.6 Real-time PCR28
• 2.2.7 細胞全蛋白提取28
• 2.2.8 Western blot分析28-29
• 2.2.9 細胞生長曲線測定29
• 2.2.10 細胞劃痕實驗29
• 2.2.11 HUVEC細胞成管實驗29-30
• 2.2.12 雞胚絨毛尿囊膜（CAM）實驗30
• 2.3 結(jié)果與分析30-34
• 2.3.1 癌基因DEK對VEGF表達的影響30-31
• 2.3.2 DEK過表達及敲低穩(wěn)定細胞系的建立31
• 2.3.3 DEK促進VEGF m RNA的表達31-32
• 2.3.4 DEK促進HUVEC細胞的生長和遷移32-33
• 2.3.5 DEK促進體內(nèi)外血管的形成33-34
• 2.4 小結(jié)34-35
• 第三章 癌基因DEK通過VEGF影響血管內(nèi)皮細胞的生物學活性35-39
• 3.1 材料35-36
• 3.1.1 細胞株35
• 3.1.2 細胞培養(yǎng)試劑和轉(zhuǎn)染試劑35
• 3.1.3 抗體35
• 3.1.4 主要實驗儀器35-36
• 3.2 方法36
• 3.2.1 細胞生長曲線測定，劃痕實驗等36
• 3.3 結(jié)果與分析36-38
• 3.3.1 DEK通過VEGF促進HUVEC細胞生長36-37
• 3.3.2 DEK通過VEGF促進HUVEC細胞遷移37
• 3.3.3 DEK通過VEGF促進體外成管37-38
• 3.3.4 DEK通過VEGF促進體內(nèi)血管形成38
• 3.4 小結(jié)38-39
• 第四章 癌基因DEK調(diào)控VEGF的分子機制39-64
• 4.1 材料39-42
• 4.1.1 引物合成及序列測定39
• 4.1.2 菌株與細胞株39
• 4.1.3 質(zhì)粒39-40
• 4.1.4 試劑40
• 4.1.5 細胞培養(yǎng)試劑和轉(zhuǎn)染試劑40
• 4.1.6 抗體40-41
• 4.1.7 主要實驗儀器41
• 4.1.8 常用溶液配方41-42
• 4.2 方法42-47
• 4.2.1 哺乳動物細胞的轉(zhuǎn)染，熒光素酶 β-半乳糖苷酶活性測定等42
• 4.2.2 GST融合蛋白的誘導表達42
• 4.2.3 GST融合蛋白的純化42
• 4.2.4 GST沉淀（pull-down）分析42-43
• 4.2.5 免疫共沉淀IP43
• 4.2.6 內(nèi)源性免疫共沉淀43-44
• 4.2.7 染色質(zhì)免疫共沉淀（CHIP）44-45
• 4.2.8 EMSA45-47
• 4.3 結(jié)果與分析47-62
• 4.3.1 缺氧條件下DEK促進VEGF的表達47-49
• 4.3.2 DEK促進VEGF表達與HIF-1a相關(guān)性的研究49-50
• 4.3.3 DEK部分依賴于HIF-1a促進血管內(nèi)皮細胞的生物學活性50-53
• 4.3.4 確定DEK與VEGF啟動子的結(jié)合位點53-58
• 4.3.5 DEK與HIF-1a存在相互作用58-62
• 4.4 小結(jié)62-64
• 第五章 討論64-66
• 第六章 結(jié)論66-67
• 參考文獻67-71
• 碩士期間研究成果71-72
• 致謝72

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