本文關(guān)鍵詞：APEX1,Jagged1在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究

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【摘要】：目的:從m RNA及蛋白水平檢測(cè)脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶1(APEX1)、jagged1在原發(fā)性肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)組織中的表達(dá)情況,并探討其與HCC臨床病理特征的關(guān)系及兩者之間的相關(guān)性。檢測(cè)HCC中Notch信號(hào)通路受體Notch1、Notch2、Notch3、Notch4 m RNA的表達(dá),分析jagged1與四個(gè)受體之間的相關(guān)性。構(gòu)建LV-APEX1-RNAi慢病毒表達(dá)載體,觀察靶向干擾APEX1后對(duì)SMMC-7721細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,檢測(cè)其介導(dǎo)的RNAi干擾對(duì)SMMC-7721細(xì)胞APEX1 m RNA和蛋白表達(dá)的影響,并檢測(cè)jagged1表達(dá)的變化,探討APEX1在HCC侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。方法:1.采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time PCR)技術(shù),從m RNA水平上檢測(cè)46例HCC及相應(yīng)癌旁和遠(yuǎn)癌肝組織,13例正常肝組織中APEX1、jagged1的表達(dá)情況,并分析APEX1與jagged1表達(dá)的相關(guān)性;檢測(cè)36例HCC中Notch1、Notch2、Notch3、Notch4 m RNA的表達(dá),分析其與jagged1的相關(guān)性。2.采用蛋白免疫印跡(Western Blot)方法在蛋白質(zhì)水平上分別檢測(cè)了25例HCC及癌旁正常肝組織中APEX1蛋白表達(dá)及18例HCC及癌旁正常肝組織中jagged1蛋白。3.采用免疫組織化學(xué)染色(IHC)方法結(jié)合組織芯片技術(shù),檢測(cè)119例HCC、癌旁肝組織中APEX1、jagged1蛋白表達(dá)情況;并分析上述蛋白表達(dá)的相關(guān)性、與HCC臨床病理參數(shù)的關(guān)系。4.培養(yǎng)肝癌細(xì)胞株SMMC-7721,使用慢病毒載體介導(dǎo)的si RNA技術(shù),用構(gòu)建的LV-APEX1-RNAi(實(shí)驗(yàn)組)表達(dá)載體感染細(xì)胞,并設(shè)LV-APEX1-NC(空載體)組,Real-time PCR及Western Blot檢測(cè)感染后肝癌細(xì)胞中APEX1的m RNA及蛋白表達(dá)情況。5.選擇APEX1表達(dá)下調(diào)的SMMC-7721細(xì)胞(SMMC-7721-LV-APEX1-RNAi)及它的對(duì)照組細(xì)胞,通過(guò)噻唑藍(lán)(MTT)比色法和Transwell小室法檢測(cè)細(xì)胞的增殖、侵襲及遷移能力的變化。6.Western Blot檢測(cè)感染LV-APEX1-RNAi后肝癌細(xì)胞中jagged1表達(dá)水平的變化。結(jié)果:1.Real-time PCR結(jié)果顯示APEX1 m RNA在HCC、癌旁、遠(yuǎn)癌及正常肝組織中的相對(duì)表達(dá)量(Relative quantity,RQ)分別為2.154±1.644、1.152±0.689、1.352±0.818、0.960±0.039。APEX1 m RNA在HCC中的表達(dá)明顯高于癌旁、遠(yuǎn)癌和正常肝組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.01)。HCC組織中APEX1 m RNA的相對(duì)表達(dá)水平和HCC組織的分化程度、有無(wú)包膜侵犯及術(shù)后有無(wú)復(fù)發(fā)有關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.05)。除外,APEX1的表達(dá)水平和年齡、性別、術(shù)前AFP水平、是否合并肝硬化、有無(wú)乙肝表面抗原、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目無(wú)關(guān)。2.Western Blot及免疫組化結(jié)果顯示APEX1蛋白及jagged1蛋白在HCC中的表達(dá)均高于癌旁肝組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.結(jié)合免疫組化中jagged1蛋白的表達(dá)情況和HCC患者臨床病理參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果顯示Jagged1蛋白表達(dá)與HCC的分化程度、術(shù)前AFP、是否轉(zhuǎn)移及術(shù)后是否復(fù)發(fā)關(guān)系密切,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。除外,jagged1的表達(dá)與性別、年齡、腫瘤大小、有無(wú)硬化、有無(wú)脈管癌栓等均無(wú)關(guān)(P0.05)4.經(jīng)過(guò)Spearman秩相關(guān)分析,發(fā)現(xiàn)在HCC中APEX1與jagged1的表達(dá)存在正相關(guān)性(P?0.05);在m RNA水平j(luò)agged1的表達(dá)與Notch信號(hào)通路Notch3的表達(dá)存在正相關(guān)性(r=0.501,P=0.002),與Notch1、Notch 2、Notch4的表達(dá)無(wú)相關(guān)性(r=0.055,P=0.750;r=-0.236,P=0.640;r=-0.138,P=0.421)。5.SMMC-7721細(xì)胞轉(zhuǎn)染慢病毒LV-APEX1-RNAi后,與空載體NC組相比,其APEX1 m RNA和蛋白表達(dá)明顯降低。6.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示SMMC-7721-LV-APEX1-RNAi的增殖速度較空載體NC組明顯減慢(P?0.01),Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示其侵襲及遷移細(xì)胞數(shù)明顯減少(P?0.01)。7.SMMC-7721細(xì)胞轉(zhuǎn)染慢病毒LV-APEX1-RNAi后,APEX1表達(dá)降低的同時(shí),jagged1的表達(dá)明顯降低。結(jié)論:1.APEX1促進(jìn)了肝細(xì)胞癌的增殖和侵襲轉(zhuǎn)移,參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。2.Jagged1的表達(dá)可能促進(jìn)肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展。3.APEX1可能通過(guò)參與上調(diào)jagged1/Notch信號(hào)通路而在HCC中發(fā)揮促癌作用。
【關(guān)鍵詞】：APEX1 jagged1 肝細(xì)胞癌 SMMC-7721細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 英、漢縮略名詞對(duì)照表4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 第一部分12-40
• 前言12-14
• 材料和方法14-26
• 結(jié)果26-36
• 討論36-40
• 第二部分40-52
• 前言40-41
• 材料和方法41-47
• 結(jié)果47-51
• 討論51-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 綜述57-65
• 參考文獻(xiàn)61-65
• 致謝65

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 許良中，楊文濤;免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)[J];中國(guó)癌癥雜志;1996年04期

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本文編號(hào)：666496