本文關鍵詞：APEX1,Jagged1在肝細胞癌中的表達及相關性研究

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【摘要】：目的:從m RNA及蛋白水平檢測脫嘌呤/脫嘧啶核酸內切酶1(APEX1)、jagged1在原發(fā)性肝細胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)組織中的表達情況,并探討其與HCC臨床病理特征的關系及兩者之間的相關性。檢測HCC中Notch信號通路受體Notch1、Notch2、Notch3、Notch4 m RNA的表達,分析jagged1與四個受體之間的相關性。構建LV-APEX1-RNAi慢病毒表達載體,觀察靶向干擾APEX1后對SMMC-7721細胞生物學行為的影響,檢測其介導的RNAi干擾對SMMC-7721細胞APEX1 m RNA和蛋白表達的影響,并檢測jagged1表達的變化,探討APEX1在HCC侵襲轉移中的作用。方法:1.采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(Real-time PCR)技術,從m RNA水平上檢測46例HCC及相應癌旁和遠癌肝組織,13例正常肝組織中APEX1、jagged1的表達情況,并分析APEX1與jagged1表達的相關性;檢測36例HCC中Notch1、Notch2、Notch3、Notch4 m RNA的表達,分析其與jagged1的相關性。2.采用蛋白免疫印跡(Western Blot)方法在蛋白質水平上分別檢測了25例HCC及癌旁正常肝組織中APEX1蛋白表達及18例HCC及癌旁正常肝組織中jagged1蛋白。3.采用免疫組織化學染色(IHC)方法結合組織芯片技術,檢測119例HCC、癌旁肝組織中APEX1、jagged1蛋白表達情況;并分析上述蛋白表達的相關性、與HCC臨床病理參數(shù)的關系。4.培養(yǎng)肝癌細胞株SMMC-7721,使用慢病毒載體介導的si RNA技術,用構建的LV-APEX1-RNAi(實驗組)表達載體感染細胞,并設LV-APEX1-NC(空載體)組,Real-time PCR及Western Blot檢測感染后肝癌細胞中APEX1的m RNA及蛋白表達情況。5.選擇APEX1表達下調的SMMC-7721細胞(SMMC-7721-LV-APEX1-RNAi)及它的對照組細胞,通過噻唑藍(MTT)比色法和Transwell小室法檢測細胞的增殖、侵襲及遷移能力的變化。6.Western Blot檢測感染LV-APEX1-RNAi后肝癌細胞中jagged1表達水平的變化。結果:1.Real-time PCR結果顯示APEX1 m RNA在HCC、癌旁、遠癌及正常肝組織中的相對表達量(Relative quantity,RQ)分別為2.154±1.644、1.152±0.689、1.352±0.818、0.960±0.039。APEX1 m RNA在HCC中的表達明顯高于癌旁、遠癌和正常肝組織,差異有統(tǒng)計學意義(P?0.01)。HCC組織中APEX1 m RNA的相對表達水平和HCC組織的分化程度、有無包膜侵犯及術后有無復發(fā)有關,差異有統(tǒng)計學意義(P?0.05)。除外,APEX1的表達水平和年齡、性別、術前AFP水平、是否合并肝硬化、有無乙肝表面抗原、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目無關。2.Western Blot及免疫組化結果顯示APEX1蛋白及jagged1蛋白在HCC中的表達均高于癌旁肝組織,差異有統(tǒng)計學意義。3.結合免疫組化中jagged1蛋白的表達情況和HCC患者臨床病理參數(shù)進行統(tǒng)計分析,結果顯示Jagged1蛋白表達與HCC的分化程度、術前AFP、是否轉移及術后是否復發(fā)關系密切,差異有統(tǒng)計學意義。除外,jagged1的表達與性別、年齡、腫瘤大小、有無硬化、有無脈管癌栓等均無關(P0.05)4.經(jīng)過Spearman秩相關分析,發(fā)現(xiàn)在HCC中APEX1與jagged1的表達存在正相關性(P?0.05);在m RNA水平jagged1的表達與Notch信號通路Notch3的表達存在正相關性(r=0.501,P=0.002),與Notch1、Notch 2、Notch4的表達無相關性(r=0.055,P=0.750;r=-0.236,P=0.640;r=-0.138,P=0.421)。5.SMMC-7721細胞轉染慢病毒LV-APEX1-RNAi后,與空載體NC組相比,其APEX1 m RNA和蛋白表達明顯降低。6.MTT實驗結果顯示SMMC-7721-LV-APEX1-RNAi的增殖速度較空載體NC組明顯減慢(P?0.01),Transwell實驗結果顯示其侵襲及遷移細胞數(shù)明顯減少(P?0.01)。7.SMMC-7721細胞轉染慢病毒LV-APEX1-RNAi后,APEX1表達降低的同時,jagged1的表達明顯降低。結論:1.APEX1促進了肝細胞癌的增殖和侵襲轉移,參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。2.Jagged1的表達可能促進肝細胞癌的發(fā)生發(fā)展。3.APEX1可能通過參與上調jagged1/Notch信號通路而在HCC中發(fā)揮促癌作用。
【關鍵詞】：APEX1 jagged1 肝細胞癌 SMMC-7721細胞
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 英、漢縮略名詞對照表4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 第一部分12-40
• 前言12-14
• 材料和方法14-26
• 結果26-36
• 討論36-40
• 第二部分40-52
• 前言40-41
• 材料和方法41-47
• 結果47-51
• 討論51-52
• 結論52-53
• 參考文獻53-57
• 綜述57-65
• 參考文獻61-65
• 致謝65

【參考文獻】

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1 許良中，楊文濤;免疫組織化學反應結果的判斷標準[J];中國癌癥雜志;1996年04期

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本文編號：666496