本文關(guān)鍵詞：Pokemon在MCF-7細(xì)胞中對(duì)Smad4表達(dá)的影響及其機(jī)制的初步探究

  更多相關(guān)文章： Pokemon Smad4 MCF-7 MDA-MB-231 BCSCs

【摘要】：目的:觀察Pokemon在人乳腺癌MCF-7細(xì)胞中對(duì)Smad4表達(dá)的影響,并初步探究其相關(guān)分子機(jī)制。方法:實(shí)驗(yàn)分為二部分。第一部分:1)以體外培養(yǎng)的人乳腺癌細(xì)胞MCF-7為研究對(duì)象,通過(guò)轉(zhuǎn)染空載體質(zhì)粒及Pokemon表達(dá)質(zhì)粒分別作為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,用Q-PCR、Western Blot及免疫熒光分別從核酸水平、蛋白水平及形態(tài)學(xué)三個(gè)方面檢測(cè)Pokemon對(duì)Smad4表達(dá)的影響;2)以體外培養(yǎng)的人乳腺癌細(xì)胞MCF-7為研究對(duì)象,研究Pokemon對(duì)Smad4啟動(dòng)子活性的影響。通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染空載體質(zhì)粒作為對(duì)照組,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Pokemon表達(dá)質(zhì)粒作為實(shí)驗(yàn)組,然后應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因活性實(shí)驗(yàn)分析對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的Smad4啟動(dòng)子的活性。第二部分:1)以體外培養(yǎng)的人乳腺癌細(xì)胞MCF-7為研究對(duì)象,通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染空載體質(zhì)粒及Pokemon表達(dá)質(zhì)粒分別作為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,以及培養(yǎng)穩(wěn)定高表達(dá)Pokemon的MCF-7細(xì)胞,然后應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的乳腺癌干樣細(xì)胞數(shù)目的比率;2)以體外培養(yǎng)的MDA-MB-231細(xì)胞為研究對(duì)象,通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染空載體質(zhì)粒和Pokemon表達(dá)質(zhì)粒分別作為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的乳腺癌干樣細(xì)胞數(shù)目的比率。結(jié)果:第一部分:1.Pokemon在人乳腺癌MCF-7細(xì)胞抑制Smad4的表達(dá)。通過(guò)在MCF-7細(xì)胞中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染空載體質(zhì)粒及Pokemon表達(dá)質(zhì)粒:1)Q-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:Pokemon抑制Smad4 m RNA的轉(zhuǎn)錄(p0.01);2)免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:Pokemon抑制Smad4蛋白的表達(dá)(p0.05);3)Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:Pokemon抑制Smad4蛋白的表達(dá)(p0.05)。4)在穩(wěn)定高表達(dá)Pokemon的MCF-7細(xì)胞中,Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:Pokemon抑制Smad4蛋白的表達(dá)(p0.05)。2.Pokemon在人乳腺癌MCF-7細(xì)胞中抑制Smad4啟動(dòng)子的活性。1)驗(yàn)證由本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的3個(gè)p GL4.10-Smad4啟動(dòng)子片段在MCF-7細(xì)胞中具有轉(zhuǎn)錄活性。雙熒光素酶報(bào)告基因活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與轉(zhuǎn)染p GL4.10相比,p GL4.10-Smad4各組的熒光比值明顯增高(p GL4.10-Smad4pp1 p0.001,p GL4.10-Smad4pp2 p0.05,p GL4.10-Smad4pp3 p0.05);2)研究Pokemon在MCF-7細(xì)胞中對(duì)p GL4.10-Smad4啟動(dòng)子片段活性的影響。雙熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在3個(gè)轉(zhuǎn)染了不同長(zhǎng)度的p GL4.10-Smad4啟動(dòng)子片段組中,與對(duì)照組相比,Pokemon高表達(dá)組的Smad4啟動(dòng)子活性均明顯下調(diào)(p GL4.10-Smad4pp1 p0.05、p GL4.10-Smad4pp2 p0.001、p GL4.10-Smad4 p0.05)。說(shuō)明Pokemon在MCF-7細(xì)胞中抑制Smad4啟動(dòng)子的活性。第二部分:1.Pokemon在人乳腺癌MCF-7細(xì)胞中下調(diào)BCSCs的比率:流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:Pokemon在MCF-7細(xì)胞中下調(diào)瞬轉(zhuǎn)(p0.05)及穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株(p0.05)中的CD24-/CD44~+的細(xì)胞比率。2.Pokemon在人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞中下調(diào)BCSCs的比率:流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:Pokemon在MDA-MB-231細(xì)胞中下調(diào)CD24-/CD44~+(p0.05)和CD49f~+/Ep CAM~+(p0.05)的細(xì)胞比率。結(jié)論:1)Pokemon在人乳腺癌MCF-7細(xì)胞中可抑制Smad4的表達(dá),其機(jī)制可能與Pokemon通過(guò)抑制Smad4啟動(dòng)子活性有關(guān)。2)Pokemon在人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞中下調(diào)BCSCs的比率。
【關(guān)鍵詞】：Pokemon Smad4 MCF-7 MDA-MB-231 BCSCs
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 主要縮略詞及英文索引11-13
• 前言13-15
• 第一部分 Pokemon在人乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中對(duì)Smad4表達(dá)的影響及其作用機(jī)制15-31
• 1 實(shí)驗(yàn)材料15-18
• 2 實(shí)驗(yàn)方法18-26
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-31
• 第二部分 Pokemon在人乳腺癌細(xì)胞中對(duì)BCSCs的影響31-37
• 1.材料與方法31
• 2 實(shí)驗(yàn)方法31-32
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-37
• 討論37-41
• 結(jié)論41-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 綜述47-61
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 致謝61

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳偉 ,付小兵 ,盛志勇;Review of current progress in the structure and function of Smad proteins[J];Chinese Medical Journal;2002年03期

2 王啟偉;Smad蛋白信號(hào)網(wǎng)絡(luò)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2003年04期

3 張遠(yuǎn)強(qiáng),胡靜,劉新平,許若軍;EXPRESSION AND LOCALIZATION OF SMAD4 PROTEIN IN RAT TESTIS DURING THE POSTNATAL DEVELOPMENT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2003年03期

4 徐新保,冷希圣,何振平,梁志清,林凱,魏玉華,于鑫,彭吉潤(rùn);Inhibitory effect of retroviral vector containing anti-sense Smad_4 gene on Ito cell line, LI90[J];Chinese Medical Journal;2004年08期

5 鄭啟新;王運(yùn)濤;郭曉東;;Wild-type Smad3 Gene Enhances the Osteoblastic Differentiation of Rat Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells in Vitro[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)英德文版);2005年06期

6 王運(yùn)濤,鄭啟新,郭曉東,吳永超,郝杰;Influence of Exogenous TGFβ_1 on the Expression of Smad2 and Smad3 in Rat Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)英德文版);2005年01期

7 ;HSP70 decreases receptor-dependent phosphorylation of Smad2 and blocks TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition[J];遺傳學(xué)報(bào);2011年03期

8 ;Berbamine inhibits proliferation and induces apoptosis of KU812 cells by increasing Smad3 activity[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2011年07期

9 尚政軍;修復(fù)相關(guān)基因Smad3的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2001年05期

10 楊曉 ,孫彥洵 ,周江 ,黃培堂 ,黃翠芬 ,徐曉玲 ,李翠玲 ,GotayJessica ,陳林 ,鄧初夏;Establishment of murine Smad5 double knockout ES cells and the studies on their properties[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2001年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 霍艷英;李剛;胡迎春;周平坤;吳德昌;;THE SIGNIFICANCE OF SMAD7 IN TGF-β-MEDIATED SMADS AND ERK/MAPK SIGNAL PATHWAY IN RADIATION-INDUCED TUMORIGENIC HUMAN BRONCHIAL EPITHELIAL CELLS[A];海峽兩岸第三屆毒理學(xué)研討會(huì)論文摘要[C];2005年

2 張素平;張然;陳峰;張麗霞;陳曄光;;Smad7 antagonises TGF-β signaling in the nucleus[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

3 王劍;楊曉;;Gene expression profile in cardiomyocyte-specific Smad4 knock-out mice[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)第八次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編（2004-2008）[C];2008年

4 劉昭廷;王強(qiáng);孟安明;;基因組水平上受斑馬魚(yú)Smad2調(diào)控的靶基因[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

5 ;HSP70 decreases receptor-dependent phosphorylation of Smad2 and blocks TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

6 ;Maternal Smad3 Deficiency Compromises Decidualization in Mice[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

7 Jingmin Zhao;Jia Wang;Jun Yu;;Inhibitory role of Smad7 in hepatocarcinogenesis in mice and in vitro[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十六次全國(guó)病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

8 Bensoussan D.;Stoltz J.F.;de Isla N;;Differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells induced by biaxial tension involves Smad3 activation[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第23屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨生理學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要文集[C];2010年

9 ;Function of TGF-β/Smad4 Signaling in the Maintenance of Tissue Homeostasis[A];中國(guó)的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動(dòng)中國(guó)西部經(jīng)濟(jì)與社會(huì)發(fā)展——2011年中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)大會(huì)論文摘要匯編[C];2011年

10 楊曉;;Targeted disruption of Smad4 in mouse epidemis results in failure of hair follicle cycling and formation of skin tumors[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)七屆一次青年研討會(huì)暨上海高校模式生物E——研究院第一屆模式生物學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2005年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 記者 李天舒;先天性心臟病病因被發(fā)現(xiàn)[N];健康報(bào);2009年

2 通訊員 俞志新　記者 李水根;骨碎補(bǔ)總黃酮可以促進(jìn)骨形成[N];健康報(bào);2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黎錦;氨氯地平通過(guò)調(diào)節(jié)Smad的表達(dá)防止腎臟纖維化[D];武漢大學(xué);2014年

2 張俊文;TGF-β信號(hào)通路中兩個(gè)與TβRI相互作用蛋白的功能研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

3 胡祥鵬;復(fù)方芪參提取物調(diào)控TGF-β/Smad信號(hào)及miR-145、miR-21表達(dá)發(fā)揮抗肝纖維化—肝細(xì)胞癌作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

4 徐濤;NLRC5通過(guò)NF-κB與TGF-β1/Smad通路調(diào)控肝星狀細(xì)胞炎癥因子分泌和纖維化的功能及其機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 徐洪杰;回轉(zhuǎn)條件下成骨細(xì)胞微絲對(duì)BMP2信號(hào)傳導(dǎo)的調(diào)控[D];西北工業(yè)大學(xué);2015年

6 黃闖;FTY-720調(diào)節(jié)去勢(shì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化Smad信號(hào)通路的機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 王加紅;IL-6對(duì)TGF-β1/Smad3信號(hào)通路介導(dǎo)缺血心肌重構(gòu)的影響及作用機(jī)制[D];山東大學(xué);2015年

8 田彥;三步序貫法對(duì)激素依賴(lài)型哮喘患者及激素撤減過(guò)程中氣道重塑模型大鼠TGF-β_1/Smad信號(hào)通路的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

9 計(jì)磊;突變體p53與生長(zhǎng)轉(zhuǎn)化因子β信號(hào)在肺癌發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)移擴(kuò)散中的作用[D];華東師范大學(xué);2015年

10 牛立慢;TGF-β1/Smad3在四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷中的表達(dá)及其作用研究[D];吉林大學(xué);2016年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 汪呈;靶向Smurf1 HECT結(jié)構(gòu)域的小分子抑制劑的細(xì)胞學(xué)水平驗(yàn)證[D];石河子大學(xué);2015年

2 田茜華;補(bǔ)腎法、疏肝法對(duì)體外培養(yǎng)IVF-ET患者卵巢顆粒細(xì)胞中ACTA及其Smads信號(hào)通路的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 周耿民;Smad7對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎保護(hù)作用的研究[D];汕頭大學(xué);2011年

4 侯智博;TGF-β-Smad信號(hào)通路參與調(diào)控骨骼肌損傷修復(fù)機(jī)制的研究[D];遼寧師范大學(xué);2015年

5 潘晶晶;益氣滌痰逐瘀方“滌痰”和“逐瘀”藥對(duì)調(diào)節(jié)COPD氣道重塑TGF-β1/Smad通路的實(shí)驗(yàn)研究[D];云南中醫(yī)學(xué)院;2016年

6 劉佩;Smad2/3在維甲酸誘導(dǎo)腭裂小鼠及正常小鼠腭發(fā)育不同時(shí)期的表達(dá)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

7 張凌偉;當(dāng)歸紅芪提取物對(duì)糖尿病腎病大鼠腎組織TGF-β1、Smad2及Smad3表達(dá)的影響[D];甘肅中醫(yī)藥大學(xué);2016年

8 陳邦濤;Nedd4L基因調(diào)控大鼠肝星狀細(xì)胞TGF-β1/Smad信號(hào)通路的實(shí)驗(yàn)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

9 翁嘉懿;CD137信號(hào)通過(guò)Smad1/5-NFATc1信號(hào)調(diào)控血管新生[D];江蘇大學(xué);2016年

10 汪玉榮;褪黑素對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝纖維化大鼠氧化應(yīng)激及TGF-β1/Smad信號(hào)通路的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：665276